1、血细胞计数板,显微镜直接计算法,血球计数板的构造和使用,方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供微生物计数用。,大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm， 即1mm1mm0.1mm，其容积为0.1mm3；,血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物数量的仪器，由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网。,血球计数板的结构,大方格,中方格,小方格,计数,1625型：一般取四角的四个中方格（100个小方格）计数,2516型：一般计数四个角和中央的五个中方格（80个小方格）的细胞
2、数。,计数室两种规格,11625型的计数板 将计数室放大，可见它含16中格，一般取四角：1、4、13、16四个中方格（100个小方格）计数 。 细胞个数1mL100个小方格细胞总数/ 100 40010000稀释倍数,22516型的计数板 中央大方格以双线等分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格，供细胞计数用（见图三）。一般计数四个角和中央的五个中方格（80个小方格）的细胞数。 细胞个数1mL80个小方格细胞总数/ 80 40010000稀释倍数,血球计数板的使用方法步骤1镜检计数室。在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗，吹干后才能进行计数；2加样品。将清洁干燥的血
3、球计数板的计数室上加盖专用的盖玻片，用吸管吸取稀释后的酵母菌悬液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行缓缓渗入，一次性充满计数室，防止产生气泡，多余培养液可用滤纸吸去；3计数。稍待片刻（约5min），待酵母菌细胞全部沉降到计数室底部后，将计数板放在载物台的中央，先在低倍镜下找到计数室所在位置后，再转换高倍镜观察、计数并记录。,注意事项,1.从试管中吸出培养液进行计数之前，建议将试管震荡几次，目的是什么？,目的：使培养液中酵母菌分布均匀，以保证估算准确，减少误差,2 如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当对培养液进行稀释。具体方法是：,摇匀试管，取1mL酵母菌培养液，加入成倍的无菌水稀释，稀释n倍后
4、，再用血球计数板计数，所得数值乘以稀释倍数。以每小方格内含有45个酵母细胞为宜。,3活酵母有芽殖现象，若芽体达到母细胞大小的一半时，即可作为两个菌体计数，若芽体小于母细胞一半时为1个酵母细胞。4对于压在方格界线上的酵母菌应当计数同侧相邻两边上的菌体数，一般可采取“数上线不数下线，数左线不数右线”的原则处理，另两边不计数。,5计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算，对每个样品可计数三次，再取其平均值。6血球计数板的清洁 血球计数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用95%的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其
5、他沉淀物。若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。,例1、通常用血球计数板对培养液中酵母菌进行计数，若计数室为1mm1mm0.1mm方格，由400个小方格组成，如果一个小方格内酵母菌过多，难以计数，应先 后再计数。若多次重复计数后，算得每个小方格中平均有5个酵母菌，则10mL该培养液中酵母菌总数有 个。（参考答案：稀释；2108）540010000102108 。,例2.检测员将1 mL水样稀释10倍后，用抽样检测的方法检测每毫升蓝藻的数量；将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取少许培养液使其自行渗入计数室，并用滤纸吸去多余液体。已知每个计数室由2516400个小格组成，容纳液体的总体积为01 mm3
6、。,现观察到图中该计数室所示a、b、c、d、e 5个中格80个小格内共有蓝藻n个，则上述水样中约有蓝藻 个mL。,5n105,解析：从例题来看，是按照血球计数板的原理进行设计试题的，还添加了相应的图示，题意一目了然。按照前面所述的公式，不难得出正确答案：酵母细胞个数1mL 80个小方格细胞总数/ 80 40010000稀释倍数n/8040010000105n105 。,例3、（2008江苏高考31） （4）在整个实验过程中，直接从静置的培养瓶中取培养原液计数的做法是错误的，正确的方法是 和 。（5）实验结束后，用试管刷蘸洗涤剂擦洗血球计数板的做法是错误的，正确的方法是 。（参考答案（4）摇匀培养液后再取样 样液稀释后再计数（5）浸泡和冲洗）,
