1、维生素C含量测定方法综述,摘要,目前研究维生素C测定方法的报道较多，如滴定法、光度分析法、高效液相色谱法等，各种方法各有特点。特别是高效液相色谱法是近年来发展较快的一种方法。,关键词,维生素C 滴定法 高效液相色谱法,概述,维生素C是可溶于水的无色结晶，是一种分子结构最简单的维生素。维生素C有防治坏血病的功能，所以在医药上常把它叫做抗坏血酸。维生素C能保持巯基酶的活性和谷胱甘肽的还原状态，起解毒作用等。其广泛存在于植物组织中，新鲜的水果、蔬菜，特别是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、猕猴桃、柑橘等食品中含量尤为丰富。准确测定维生素C的含量，对饮食健康、医疗保健都具有十分重要的意义。,测定维生素C常用的方
2、法有2,6-二氯靛酚滴定法、苯肼比色法、荧光法及高效液相色谱法等。2,6-二氯靛酚滴定法测定的是还原型抗坏血酸，该法简便，也较灵敏，但特异性差，样品中的其他还原性物质会干扰测定，使测定值偏高，且对深色样液滴定终点不易辨别。苯肼比色法和荧光法测得的都是抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。高效液相色谱法可以同时测得抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的含量，具有干扰少、准确度高、重现性好、灵敏、简便、快速等优点，是上述几种方法中最先进、最可靠的方法。,维生素C的结构式,维生素C：六碳的多羟基内酯,原理,染料2,6-二氯靛酚在酸性溶液中呈粉红色（在中性或碱性溶液中呈蓝色），被还原型抗坏血酸还原后颜色消失。还原型抗坏血酸
3、还原染料后，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准染料液的量，与样品中还原型抗坏血酸含量成正比。,1 滴定法测定维生素C,2，6一二氯靛酚法,2，6一二氯靛酚法,试剂1%的乙二酸溶液，2%的乙二酸溶液，1%淀粉溶液，6%碘化钾溶液。抗坏血酸标准溶液：准确称取20mg抗坏血酸，溶于1%的乙二酸中，并稀释至100mL，置冰箱中保存。用时取出5mL，置于50mL容量瓶中，用1%乙二酸溶液定容，配成0.02mg/mL的标准溶液。 标定：吸取此标准液5mL于三角瓶中，加入6%碘化钾溶液0.5mL，1%淀粉溶液3滴，以0.001mol/L碘酸钾标准溶液滴定，终点为淡蓝色。,
4、2，6一二氯靛酚法,计算：,式中： c抗坏血酸标准溶液的浓度mg/mL；V1滴定时消耗0.001mol/L碘酸钾标准溶液的体积，mL；V2滴定时所取抗坏血酸的体积，mL；0.0881mL0.001mol/L碘酸钾标准溶液相当于抗坏血酸的量，mg/mL。,2，6一二氯靛酚法,试剂0.000167mol/L碘酸钾标准溶液：精确称取干燥的碘酸钾0.3567g，用水稀释至100mL，取出1mL，用水稀至100mL，此溶液1mL相当于抗坏血酸0.088mg。2,6-二氯靛酚溶液：称取2,6-二氯靛酚50mg，溶于200mL含有52mg碳酸氢钠的热水中，待冷，置于冰箱中过夜。次日过滤于250mL棕色容量瓶
5、中，定容，在冰箱中保存。每周标定1次。标定：取5mL已知浓度的抗坏血酸标准溶液，加入1%乙二酸溶液5mL，摇匀，用2,6-二氯靛酚溶液滴定至溶液呈粉红色，在15s内不褪色即为终点。,2，6一二氯靛酚法,计算：,式中：T每毫升染料溶液相当于抗坏血酸的毫克数，mg/mL；c抗坏血酸的浓度，mg/mL；V1抗坏血酸标准溶液的体积，mL；V2消耗2,6-二氯靛酚的体积，mL。,2，6一二氯靛酚法,测定步骤 提取 鲜样制备：称100g鲜样，加等量的2%乙二酸溶液，倒入组织捣碎机中打成匀浆。取1040g匀浆（含抗坏血酸12mg）于100mL容量瓶中，用1%乙二酸稀释至刻度，混合均匀。 干样制备：称14g干
6、样（含12mg抗坏血酸）放入研钵内，加1%乙二酸溶液磨成匀浆，倒入100mL容量瓶中，用1%乙二酸稀释至刻度。过滤上述样液，不易过滤的可用离心机沉淀后，倾出上清液，过滤备用。,2，6一二氯靛酚法,测定步骤 滴定吸取510mL滤液，置于50mL三角瓶中，快速用2，6-二氯靛酚溶液滴定，直到红色不能立即消失，而后再尽快地一滴一滴地加入（样品中可能存在其他还原性杂质，但一般杂质还原染料的速度均比抗坏血酸慢），以呈现的粉红色在15s内不消失为终点。同时做空白实验。,2，6一二氯靛酚法,结果计算,式中：X样品中抗坏血酸含量，mg/100g；m滴定时所取溶液中含有样品的质量，g；T1mL染料溶液相当于抗坏
7、血酸标准溶液的量，mg/mL；V滴定样液时消耗染料的体积，mL；V0滴定空白时消耗染料的体积，mL。,2，6一二氯靛酚法,注意事项 （1）所有试剂最好用重蒸馏水配制。 （2）样品采取后，应浸泡在已知量的2%乙二酸溶液中，以防止维生素C氧化损失。测定时整个操作过程要迅速，防止抗坏血酸被氧化。 （3）若测动物性样品，需用10%三氯乙酸代替2%乙二酸溶液提取维生素C。 （4）若样品滤液颜色较深，影响滴定终点观察，可加入白陶土脱色后再过滤。白陶土使用前应测定回收率。,2，6一二氯靛酚法,注意事项 （5）若样品中含有Fe2+、Sn2+、亚硫酸盐、硫代硫酸盐等还原性杂质时，会使结果偏高；Cu2+可与抗坏血
8、酸反应，也干扰测定。有无这些干扰离子可用以下方法检验：取样品提取液、偏磷酸-乙酸溶液各5mL混合均匀，加入0.05%亚甲基蓝水溶液2滴。如亚甲基蓝颜色在510s消失，即证明有干扰物存在；此检验对Sn2+无反应，可在另一份10mL的样品溶液中加入1：3盐酸溶液10mL，加0.05%靛胭脂红水溶液5滴，若颜色在510s消失；证明有Sn2+或其他干扰性物质存在。为消除上述杂质带来的误差，可采取以下测定方法：取10mL提取液两份，各加入0.1mL10%硫酸铜溶液，在110加热10min，冷却后在用染料滴定。有铜存在时，抗坏血酸完全被破坏，从样品滴定值中扣除校正值，即得抗坏血酸含量。,维生素C 2,6-
9、二氯酚靛酚 维生素C 2,6-二氯酚靛酚 （还原型） （氧化型，粉红色） （氧化型） （还原型）,+,+,=,2,6-二氯酚靛酚染料的钠盐在水溶液中显蓝色，在酸性溶液中呈红色，被还原后红色消失。,2高效液相色谱法测定维生素C,原理,样品中的维生素C经乙二酸溶液（1g/L）迅速提取后，在反相色谱柱上分离测定。,主要仪器及试剂,高效液相色谱仪，紫外检测器等。 乙二酸溶液（1g/L）。 维生素C标准溶液：准确称取维生素C样本2mg与50ml容量瓶中，用乙二醇溶液（1g/L）溶解、定容，摇匀备用，用前配制。,2高效液相色谱法测定维生素C,样品处理,液体样品：取原液5mL与25mL容量瓶中，用乙二醇溶液
10、（1g/L）定容，摇匀后经0.45m滤膜过滤后待测。固体样本：称1g样品于研钵中，用5mL乙二醇溶液（1g/L）迅速研磨，过滤，残渣用乙二醇溶液（1g/L）洗涤，合并提取液于25mL容量瓶中，蒸馏水定容，摇匀后经0.45m滤膜过滤后待测。,2高效液相色谱法测定维生素C,测定取5m标准溶液进行色谱分析，重复进样3次，取标样峰面积的平均值。然后在相同条件下，取5L样品液进行分析，以相应峰面积计算含量。 色谱条件色谱柱，-Bondapak C18（直径3.9mm*300mm）；流动相，H2C2O4（1g/L）；流速，1.0mL/min；检测器，紫外245nm；进样量，5L。,2高效液相色谱法测定维生素C,计算结果,式中： X样品中维生素C的含量，mg/100g或mg/100mL；m1标样进样体积中维生素C含量，g；m2样品质量（或体积），g或mL；A1标样峰面积平均值；A2样品峰面积；V1样品进样量，L；V2样品定容体积，mL。,结束语,总之，维生素C的测定方法很多，各种方法各有特点，常用的滴定法方法简单，但在滴定有色物质终点不易判断，分光光度法操作费时，高效液相色谱法是目前发展较快的一种方法，方法灵敏，选择性好，有较好的发展前景。毛细管电泳n51是近几年新兴的分析方法，具有效率高、分析时间短、样品处理简单等特点，但有待于进一步完善。,
