1、中药制剂教研室,1.如何建立一清颗粒的定性鉴别方法？ 叙述实验步骤及注意事项。,问 题,中药制剂教研室,1.薄层板的制备 2.黄连药材的鉴别： 2.1对照品溶液的制备：小檗碱作为对照品，制备小檗碱甲醇对照品溶液； 2.2黄连对照药材溶液的制备：甲醇回流提取 2.3供试品溶液的制备：甲醇浸渍提取 2.4点样及展开：按照薄层色谱法试验，在同一薄层板上进行 2.5检视：供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同的斑点,中药制剂教研室,1.药味及活性成分的选择黄连君药 小檗碱主要活性成分 2.供试品溶液的制备：提取、纯化（液液萃取法）制备供试品溶液 3.对照品溶液的制备：精密称取干
2、燥至恒重的小檗碱对照品溶液，溶于甲醇即得对照品溶液 4.固定相即色谱柱的选择：采用ODS柱 5.流动相的选择：部分含水溶剂，水用超纯水，有机溶剂采用色谱纯溶剂，并用0.45um过滤膜过滤 6.洗脱方式的选择,1.如何建立一清颗粒定含量测定分析方法？ 叙述实验步骤及注意事项。,中药制剂教研室,7.检测器的选择：UVD 8.定量分析 8.1方法学考察：专属性，线性关系和范围，精密度试验，重现性试验，稳定性试验 8.2含量测定：,中药制剂教研室,第五章 中药制剂中各类化学成分分析,第一节 生物碱类成分分析,中药制剂教研室,大纲要求,熟悉生物碱类成分结构特征及理化性质 掌握生物碱类制剂定性鉴别常用方法
3、 掌握生物碱类制剂定量分析常用方法,中药制剂教研室,问题,生物碱类成分的理化性质？ 含生物碱类成分的中药制剂制备供试品时需考虑的问题？ 含生物碱类成分中药制剂定性鉴别，以硅胶为载体时，展开系统需注意的问题？ HPLC法分析制剂中单体生物碱的含量时，改进流动相的常用方法？,中药制剂教研室,概述,定义 生物碱是生物界除生物体必须的含氮化合物（如氨基酸、蛋白质和B族微生素等）之外的所有含氮有机化合物，因其结构中氮原子上的未共享电子对而大多具有碱性。,绝大多数具有显著的生理活性 中药材中生物碱多和植物酸性成分结合成盐的状态存在,中药制剂教研室,结构特征及理化性质,结构特征 C H O N 理化性质 物
4、理性状：结晶性固体；液体、小分子固体（挥发性、升华性），多无色 溶解性：多样性 沉淀反应：生物碱沉淀试剂，定性（蛋白质、多肽、鞣质，避免假阳性） 显色反应：纯品，少用于制剂中生物碱分析 碱性：多呈碱性，碱性强成盐弱游离，供试品制备及分析方法建立及条件 选择的依据 紫外光谱特征：共轭体系，紫外吸收,大多数生物碱在酸性水溶液中可以与某些试剂生成不溶于水的复盐或分子复合物，这类试剂,中药制剂教研室,定性鉴别,一般理化鉴别 沉淀反应多用：酸性条件，净化处理（除蛋白质、多肽、鞣质），制剂中两种以上含生物碱药材（难说明问题）,中药制剂教研室,马钱子主含生物碱。以番木鳖碱(士的宁) 与马钱子碱(布鲁生) 为
5、主, 主效成分及毒性成分。生物碱以盐的形式存在，加浓氨水使生物碱盐转变成游离碱，易溶于氯仿有机溶剂。 地龙含较多多肽、蛋白质等，不溶于有机溶剂。,中药制剂教研室,定性鉴别,色谱鉴别 1.TLC法： 常用载体：硅胶 常用展开剂：氯仿、苯及相应极性调节剂 硅胶弱酸性，形成盐至Rf值小、拖尾、复斑，碱性展开系统or碱性条件下 显色剂：改良碘化铋钾（橘红色） 供试品的制备：处方、剂型、存在状态、溶解性、共存成分的性质,中药制剂教研室,中药制剂教研室,中药制剂教研室,固体剂型回流提取,中药制剂教研室,中药制剂教研室,液体剂型液液萃取,中药制剂教研室,中药制剂教研室,固体剂型大蜜丸,中药制剂教研室,中药制
6、剂教研室,定性鉴别,色谱鉴别 2.纸色谱法： 显色：含硫酸的试剂不可 3.HPLC法： 快速、灵敏、微量 Rt值法，峰面积 or 峰高加大法（用内标）,中药制剂教研室,含量测定,反映中药制剂中含生物碱的真实情况 提取、净化、分析测定均要准确 方法学考察内容 1.提取净化条件的考察 2.测定方法与条件的选择 3. 定量分析方法验证 3.1 专属性 3.2 线性关系考察 3.3 精密度试验 3.4 准确度试验 3.5 稳定性试验 3.6 测灵敏度及检测限的测定,中药制剂教研室,含量测定,总生物碱含量测定 化学分析法 范围：处方药味少，内含成分简单的中药制剂 酸碱滴定法：生物碱碱性强弱，水/非溶液酸
7、碱滴定法 重量法：提取生物碱成沉淀 or 加生物碱沉淀试剂,中药制剂教研室,中药制剂教研室,酸碱滴定法,中药制剂教研室,中药制剂教研室,中药制剂教研室,中药制剂教研室,中药制剂教研室,重量法,溶液后标示的“（110）”等符号，系指固体溶质1.0g或液体溶质1.0ml加溶剂使成10ml的溶液；未指明用何种溶剂时，均系指水溶液；,中药制剂教研室,含量测定,分光光度法 样品分离、净化（化学法、柱色谱法、TLC法等） 直接测定法：不经过化学反应用生物碱物质自身的吸收波长 范围：药物少，内含成分简单的中药制剂 离子对萃取比色法,中药制剂教研室,中药制剂教研室,分光光度法：直接测定法,2010版药典：HP
8、LC 定量黄连、炒白芍,中药制剂教研室,中药制剂教研室,分光光度法：直接测定法,2010版药典：HPLC 定量黄连,中药制剂教研室,分光光度法,离子对萃取比色法 范围：中药制剂中微量生物碱的含量测定 原理：一定PH介质中，有机碱与一些酸性染料或磺酸类、酸类的阴离子，定量结合为有色离子对，离子对定量溶于某些有机溶剂，一定波长下测定有机溶剂的或碱化后释放出的染料的吸收度，按分光光度法计算有机碱的含量。 常用方法：酸性染料比色法和苦味酸盐比色法,中药制剂教研室,分光光度法,酸性染料比色法适当PH介质中，生物碱可与氢离子结合成生物碱盐的阳离子，而酸性染料在此条件下解离为阴离子，生物碱盐的阳离子与染料阴
9、离子定量地结合成有色的配合物（即离子对），此离子对可定量地溶于某些有机溶剂，测定有机溶剂的吸收度 or 经碱化后释放出的染料的吸收度，即可计算生物碱的含量。,中药制剂教研室,分光光度法,酸性染料比色法 关键：介质的PH、酸性染料的种类、有机溶剂 pH值的选择：染料的性质及生物碱的碱性，生物碱一元碱与溴百里酚蓝形成1：1的离子对，pH(5.26.4)，二元碱形成1：2的离子对， pH(3.05.8) 常用染料：溴百里酚蓝、溴甲酚绿、溴酚蓝、溴甲酚紫,中药制剂教研室,分光光度法,酸性染料比色法有机溶剂的选择：根据离子对与有机相能否形成氢键以及形成氢碱能力的强弱，氯仿、二氯甲烷与离子对形成氢键，有中
10、等程度的萃取率，选择性好，是常用的提取溶剂 有机相中的水份的影响：微量水分使氯仿发生浑浊，且水相中的过量染料影响测定结果。有机溶剂提取液可加脱水剂或经干燥滤纸滤过除去水分。,中药制剂教研室,2010版 乌头总生物碱+麻黄HPLC定量,中药制剂教研室,中药制剂教研室,酸性染料分光光度法 水相pH的选择是分别取乌头碱标准液，以不同pH的缓冲液进行试验，pH3.0较好。该条件下，吸收度较大，指示液空白对照吸收度较小，呈色稳定性好,中药制剂教研室,分光光度法,雷氏盐比色法 雷氏盐（雷氏铵or硫氰酸铬铵）：微溶于冷水，易溶热水，可溶于乙醇 雷氏盐酸性介质中可与生物碱类成分定量地生成难溶于水的有色配合物，
11、生物碱雷氏盐沉淀易溶于丙酮，其丙酮溶液呈现的吸收特征是由于分子结构中硫氰酸铬铵部分，而非生物碱部分。,中药制剂教研室,分光光度法,雷氏盐比色法 I 将此沉淀过滤洗净后溶于丙酮/甲醇直接比色测定，换算生物碱的含量； II 精密加入过量雷氏盐试剂，滤除生产的生物碱雷氏盐沉淀，用滤液进行比色测定残存的过量雷氏盐含量，间接计算生物碱的含量（雷氏盐剩余比色法）。,中药制剂教研室,分光光度法,雷氏盐比色法 注意事项： 1.雷氏盐的水溶液室温可分解，应新鲜配制，沉淀需在低温进行 2.中药制剂应先纯化处理 3.雷氏盐的丙酮or丙酮水溶液吸收值，随时间有变化，应尽快测定,中药制剂教研室,中药制剂教研室,超声处理
12、： 不同功率、频率超声提取仪对含量测定的结果不同 在同一提 取器内由于摆放部位不同提取效果也不一致。,中药制剂教研室,含量测定,单体生物碱的含量测定 TLC HPLC GC,中药制剂教研室,含量测定,单体生物碱的含量测定 TLC法：样品需纯化，吸附剂、展开剂及显色与鉴别相似，要求更严格,中药制剂教研室,3,中药制剂教研室,3,中药制剂教研室,2010版药典：HPLC法定量黄连,中药制剂教研室,中药制剂教研室,含量测定,HPLC法：反相HPLC法应用多（ODS or C18) 硅醇基酸性大，生物碱可与其牢固键合，保留时间延长，峰形变宽，拖尾，克服措施： 改进流动相 改进固定相,中药制剂教研室,含
13、量测定,HPLC法：改进流动相： 流动相中加入硅醇基抑制剂，竞争或部分阻断硅醇剂的影响，最常用硅醇基抑制剂是二乙胺、三乙胺（TEA)等。 采用离子对色谱系统：合适的pH下，流动相中加入低浓度离子对试剂，通过与生物碱类成分生成离子对而掩蔽其碱性基团。常用离子对试剂：辛烷磺酸钠或十二烷基磺酸钠。注意：清洗柱子，避免过夜，保证色谱柱的寿命。,中药制剂教研室,含量测定,HPLC法：改进流动相： 流动相中加入季铵盐试剂，掩蔽固定相表面的硅醇基，如在水甲醇中加入0.01mol/L的溴化四甲基胺。 流动相中加入电解质缓冲盐，通过改变流动相离子强度，稳定pH值及促进离子对相互作用，起到改善峰形及分离效果的作用
14、。,中药制剂教研室,中药制剂教研室,流动相+电介质缓冲盐,中药制剂教研室,中药制剂教研室,流动相+电介质缓冲盐,中药制剂教研室,中药制剂教研室,中药制剂教研室,流动相+离子对试剂,中药制剂教研室,中药制剂教研室,中药制剂教研室,中药制剂教研室,中药制剂教研室,中药制剂教研室,中药制剂教研室,中药制剂教研室,中药制剂教研室,中药制剂教研室,中药制剂教研室,中药制剂教研室,中药制剂教研室,含量测定,GC法 范围：有挥发性，遇热不分解的生物碱类（药典未收载），如麻黄碱、槟榔碱、苦参碱、颠茄类生物碱等。,中药制剂教研室,中药制剂教研室,中药制剂教研室,中药制剂教研室,中药制剂教研室,常见生物碱类成分的
15、中英文对照,小檗碱：berberine 士的宁：strychnine 乌头碱：aconitine 苦参碱：matrine 甜菜碱：betaine 麻黄碱：ephrine 水苏碱：stachydrine 吴茱萸碱：evodiamine,中药制剂教研室,思考题,小儿清热片质量分析方案设计，请设计本品定性鉴别、检查及含量测定分析方案。 定性鉴别：对照品、对照药材、鉴别方法（要不少于5味药材） 检查：片剂的检查内容 含量测定：所测成分、提取净化方法、测定方法、含量测定方法学考察内容,中药制剂教研室,中药制剂教研室,名称 处方 制法 性状 鉴别 检查 浸出物测定 含量测定 功能与主治 用法与用量 注意
16、规格 贮藏,中药制剂教研室,进展,High performance capillary electrophoresis, HPCE,高灵敏度 高分离效率（比HPLC 高得多:理论板数在百万以上，最高可达 10,000,000/m ） 高速度 （一般一次分离仅需几十秒钟至数分钟） 所需样品量少:进样量 1-10 Nl,样品量 5ul -5 mL 检测 :在线检测 自动化: 自动进样，缓冲液交换，数据处理 重现性: 迁移时间 0.5% 运行成本较低 应用范围极广 有多种模式 可免于接触HPLC流动相的毒性和污染,中药制剂教研室,苦参药材的成分分析,1 苦参碱 2 槐定碱 3 槐果碱 4 lehmannine 5 sophoramine 6 氧化苦参碱 7 氧化槐果碱 8 金雀花碱 9 苦豆碱 10 蝙蝠葛碱 11 东莨菪碱,中药制剂教研室,含量测定,HPLC法：改进固定相： 封尾技术，即键合反应结束后，用三甲基氯硅烷等进行后续处理，尽量减少残余羟基，增加覆盖度。 常用检测器：UV-D,中药制剂教研室,思考题,HPLC法中，用ODS柱进行生物碱的含量测定时。为避免峰展宽及脱尾峰现象所采取的措施？,
