1、 地 址：上海市南汇区航头镇航头路109号 201316 电 话：021-58229995 传 真：021-58228544 网 站： 邮 件： 上海源耀生物科技有限公司 技术交流资料 2007年5月 GB/T 178111999 前 言 本标准等效采用美国公职分析化学家协会（AOAC）（ 1995 年版）动物蛋白质饲料的胃蛋白酶消化率测定方法 过滤法。 在技术内容上，原方法中所用的“恒温搅动器”，根据实际情况改用“恒温平转摇床”；再则，限于国内试剂条件，选用市场上易购的胃蛋白酶试剂（1:3000）代替原方法指定的胃蛋白酶试剂（1:10000）。 本标准由中华人民共和国国内贸易部提出。 本标准
2、由全国饲料工业标准化技术委员会归口。 本标准由国家饲料质量监督检验中心（武汉）负责起草。 本标准主要起草人：屈利文，钱肪。 中华人民共和国国家标准 动物蛋白质饲料消化率的测定 胃蛋白酶法 Determination of digestibility in animal protein feedsPepsin method 1 范围 本标准规定了动物蛋白质饲料消化率的胃蛋白酶测定方法。 本标准适用于所有动物性蛋白质饲料，不适用于植物性蛋白质或混和饲料消化率的胃蛋白酶测定方法。 2 引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会
3、被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 GB/T 64321994 饲料中粗蛋白测定方法 GB/T 64321994 饲料粗脂肪测定方法 GB/T 64821992 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法原理 脱过脂的试样，用温热的胃蛋白酶溶液，在恒温、持续不断地搅拌下消化 16h，过滤分离不溶性残渣，洗涤、干燥，测定残渣地粗蛋白含量。同时，测定空白和脱脂未酶解试样地粗蛋白含量。 4 试剂 本标准所用试剂，除特殊说明外，均为分析纯 实验室用水应符合GB/T 6682中三级水的规格。 4.1 0.2胃蛋白酶溶液：将6.1ml浓盐酸稀释至1000ml水中（溶液pH12），加热
4、至 4245，加入2g活PDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 地 址：上海市南汇区航头镇航头路109号 201316 电 话：021-58229995 传 真：021-58228544 网 站： 邮 件： 性为1:10000生化级胃蛋白酶若活性不是1:10000，可使用活性1:3000生化级胃蛋白酶1）（不可使用非生化级胃蛋白酶），应注意胃蛋白酶溶液中胃蛋白酶浓度应为每毫升20IU,并缓慢搅拌直至溶解。勿在加热板上加热胃蛋白酶溶液或配制时过热。临用前钱配制。 4.2 乙醚。 4.3 丙酮。 4.4 定氮试剂：按GB/T6432中试剂及配制方法规定 采用说明： 1AO
5、AC中制定为1:10000。 国家质量技术监督局1999-08-10批准 2002-02-01实施 GB/T 178111999 5 仪器、设备 5.1 恒温式平转摇床1：温控范围2050，水浴式或空气浴式均可，转速可调（15300r/min）。 5.2 实验室用样品粉碎机。 5.3 索氏抽提器、脱脂设备：按GB/T 6433中仪器、设备规定。 5.4 定氮仪器、设备：按GB/T 6432 中仪器、设备规定。 5.5 实验室常用仪器、设备。 6 试样制备 取具有代表性试样，用四分法缩分至200g，然后粉碎至全部过0.90mm孔筛（20目），混匀装于密封容器，保存备用。 7 测定步骤 7.1 脱
6、脂 称取12g试样用乙醚（4.2）脱脂（含脂肪小于1可不脱脂，含脂肪110建议脱脂，含脂肪大于10则必须脱脂）。脱脂方法可参照GB/T 6433中粗脂肪抽提方法进行。脱脂后的样品需烘干。 7.2 胃蛋白酶消化 称取脱脂烘干（7.1）后的样品若干克（精确至0.0002g，含氮量约580mg）于250ml带盖磨口瓶中，加150ml新配制的并已预热至4245的胃蛋白酶溶液（4.1），要确保样品完全被胃蛋白酶溶液浸湿，盖紧瓶盖，将瓶夹于恒温摇床（5.1）上，于45恒定搅动16h进行保温消化。 7.3 消化残渣的处理 从搅动器上取下磨口瓶，呈45角放置，让残渣沉淀15min以上，随后在铺有快速滤纸的布氏
7、漏斗上抽滤，先用少量水将瓶盖上的残渣洗至滤纸上，再将磨口瓶保持沉淀时的角度移至布氏漏斗上，慢慢倾出内容物，使之通过滤纸后形成连续的细流，避免任何不必要的搅动。液体通过滤纸的速度应与倾入的速度相同。 当上层液体通过滤纸后，于瓶中加入15ml丙酮，用拇指盖住瓶口剧烈振摇，放开。再用拇指堵住瓶口，PDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建 地 址：上海市南汇区航头镇航头路109号 201316 电 话：021-58229995 传 真：021-58228544 网 站： 邮 件： 在滤纸上方将瓶倒置振摇，放开拇指让丙酮和残渣流到滤纸上。再用一份15ml的丙酮进行洗涤，照上法振摇
8、和倒出。检查瓶子，并用丙酮在此洗涤。当全部液体通过滤器后，用洗瓶以少量丙酮洗涤漏斗壁上残渣两次，并抽干。从布氏漏斗上小心取下载有残渣的滤纸，无损的移入凯氏烧瓶中，并将凯氏烧瓶置于 105烘箱内烘干。 7.4 粗蛋白的测定 将上述（7.3）烘干的残渣按GB/T 6432中方法测定粗蛋白含量（W2）。同时，称取脱脂烘干（7.1）后的样品若干克（精确至0.0002g，含氮量约580mg），直接按 GB/T 6432方法测定脱脂未酶解的样品中粗蛋白的含量（W1） 采用说明： 1AOAC方法中，规定使用“恒温搅动器”。 GB/T 178111999 8 分析结果的计算及表示 8.1 结果按式（1）计算 W1W2 X(%)=-100 （1） W1 式中：X试样的胃蛋白酶消化率， W1脱脂未酶解的原样品中粗蛋白的平均含量， W2脱脂酶解后残渣中粗蛋白的平均含量， 所得结果表示到小数点后一位。 8.2 允许差 每个试样脱脂后取两份试料进行平行测定，以其平均值为测定结果。 测定结果得相对偏差按GB/T 6432中粗蛋白测定得相对偏差允许范围。 PDF 文件使用 “pdfFactory Pro“ 试用版本创建
