1、细胞核常用荧光染料有：吖啶橙（Acridine Orange，AO）、溴化乙锭（Ethidium Bromide，EB）和碘化丙啶（Propidium Iodide，PI），DAPI、Hoechst 染料、EthD III、7-AAD、RedDot1 、2 等等。透膜的染料如下：AO：具有膜通透性，能透过细胞膜，将核 DNA 和 RNA 分别染成绿色和红色，因此使细胞核呈绿色或黄绿色荧光。EB：一种高度灵敏的荧光染色剂，在标准 302nm 处激发出橙红色信号。DAPI：蓝色 一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，其与 DNA 结合后可以产生比 DAPI 自身强 20 多倍的荧光，而与单链 DNA
2、结合无荧光的增强。DAPI 对双链 DNA 的染色灵敏度要高于 EB 和 PI，荧光强度比 Hoechst 低，但光稳定性高于 Hoechst。Hoechst 染料：蓝色一类在显微观察中标记 DNA 的荧光染料，最常见的两种是 Hoechst33342 和 Hoechst33258。这两种染料都在紫外 350nm 处被激发，在461nm 处最大发射光附近发射青/蓝色荧光。与 DAPI 相比，Hoechst33342 加有乙基，具有更强的亲脂性，因此能更好的透过完整的细胞膜，并且细胞毒性更小。RedDot 1 染料： 红色，超强的细胞核选择性，其光谱相似于 Draq?5 和 Draq?7。Red
3、Dot?染料可被几种常见的激光激发并可在远红外区激发荧光。 RedDot? 的红色近红外荧光有效的与其他常用荧光探针区分开来。不透膜的染料，如下：PI：不同通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。PI 作为红色荧光复染剂首选，PI 经常与 Calcein-AM 或者 FDA 等荧光探针合用，区分死/活细胞。EthD III、7-AAD、RedDot 2： 不能透过细胞膜，但能将坏死细胞区分开来；更适合凋亡坏死实验的检测；细胞核荧光染料（PI DAPI Hoechst33342）细胞核荧光染料 PI 碘化丙啶 （简称 PI）是一种常用的细胞核荧光染色剂。它不能透过完整的细胞膜，但 PI
4、能透过凋亡中晚期的细胞和死细胞的膜而将细胞核染红，PI 在绿色光（540nm 波长）的激发下，会在 600nm（红色光）处发出明亮的荧光，与细胞核中的 DNA 结合的 PI 发出的荧光，与未结合的 PI 相比，强度会增强 20-30 倍。40016Propidium iodide(PI)100mg40017Propidium iodide, 1.0mg/1mL solution in water10mL碘化丙啶 英文名： Propidium iodide, Propidium diiodide; PI 分子式：C27H34I2N4 分子量：668.39 外观：红棕 SF 末 应用：DNA 染色
5、 染色原理： 碘化丙啶(PI)是一种溴化乙啶的类似物，它在嵌入双链 DNA 后释放红色荧光。尽管 PI 不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。PI 经常被用 来与 Calcein-AM 或者 FDA 等荧光化合物一起使用，能同时对活细胞和死细胞染色。 光谱性质：PI-DNA 复合物的激发和发射波长分别为 535nm 和 615nm。 染色过程： 1 用 PBS 或适当的缓冲液制备 1050M 的 PI 溶液。a) 2 将 1/10 培养基体积的 PI 溶液加入到细胞培养基中。b) 3 在 37培养细胞 10-20 分钟。 4 用 PBS 或合适的缓冲液洗涤细胞两次。 5 用 53
6、5nm 激发波长，615nm 发射波长的滤光器的荧光显微镜观察细胞。 a) 由于 PI 可能具有致癌性，请小心操作。 b) 也可以用 1/10 浓度的 PI 缓冲液代替培养基。 保存条件：4 避光保存 对人体有刺激性，请注意适当防护DAPI 即 4,6-二脒基-2- 苯基吲哚(4,6-diamidino-2-phenylindole)是一种能够与 DNA 中大部分 A，T 碱基相互结合的荧光染料 常用与荧光显微镜观测。因为DAPI 可以透过完整的细胞膜它可以用于活细胞和固定细胞的染色。在荧光显微镜观察下，DAPI 染剂是利用紫外光波长的光线激发。当 DAPI 与双股 DNA 结合时，最大吸收波
7、长为 358nm，最大发射波长为 461nm，其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。DAPI 也可以和 RNA 结合，但产生的荧光强度不及与DNA 结合的结果，其发散光的波长范围约在 400nm 左右。DAPI 的发散光为蓝色，且 DAPI 和绿色荧光蛋白 (Green fluorescent protein, GFP)或 Texas Red 染剂(红色荧光染剂)的发散波长，仅有少部分重叠，研究员可以善用这项特性在单一的样品上进行多重荧光染色。DAPI 能快速进入活细胞中与 DNA 结合，因此DAPI 对生物体而言，也被视为一种毒性物质与致癌物。使用过程中应注意操作与抛弃的处理程序。DAPI
8、为一种荧光染料，可以穿透细胞膜与细胞核中的双链DNA 结合而发挥标记的作用，可以产生比 DAPI 自身强 20 多倍的荧光，和 EB 相比，对双链 DNA 的染色灵敏度要高很多倍。显微镜下可以看到显蓝色荧光的细胞，荧光显微镜观察细胞标记的效率高(几乎为 100 %) ，且对活细胞无毒副作用。DAPI 染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI 也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链 DNA 染色。细胞经热激处理后用 DAPI 染色 3 分钟，在荧光显微镜下可以看到到细胞核的形态变化。Hoechest 33258 是膜透性的 ,因此在活细胞时候能轻松进入;
9、DAPI 是半透性的, 有选择性的进入.因此 Hoechest 33258 一般用来染活细胞,可以长驱直入;DAPI 一般是染固定细胞.2、两者都可以用紫外看，参见以下的激发发射波长Hoechst 33258 的最大激发波长为 346nm，最大发射波长为 460nm；Hoechst 33258 和双链 DNA 结合后，最大激发波长为 352nm，最大发射波长为 461nm。DAPI 的最大激发波长为 340nm，最大发射波长为 488nm；DAPI 和双链 DNA 结合后，最大激发波长为 364nm，最大发射波长为454nm。Hoechst 33342/PI 双染色法1悬浮生长的细胞在培养状态
10、下加入 Heochst 33342，终浓度为 1g/ml；帖壁生长的细胞用含有 0.02EDTA 的 0.25胰蛋白酶消化成单细胞悬液，离心，弃上清，用 1ml 全培养液重悬细胞，加入 Heochst 33342，终浓度为 1g/ml，37 孵育 710min。24 5001000r/min 离心弃去染液。3加入 1.0ml PI 染液，4避光染色 15min。碘化丙啶染色1原理 碘化丙啶(propidium iodide，PI) 不能穿人完整的活细胞膜中，即正常细胞和凋亡细胞在不固定的情况下对 PI 拒染，而坏死细胞由于失去膜的完整性，PI 可进入细胞内与 DNA 结合，根据此特点，使用 PI 染色可鉴别死细胞。如果对活细胞染色必须在染色前进行固定，以增加细胞膜对染料的通透性。2溶液配制 使用 001mol LPBS(pH 74)配制终浓度为 05mg ml 的 PI 工作液。3染色程序(1)单层细胞培养标本经预冷 70乙醇固定 1 小时，4 ；(2)001molLPBS(pH 74)冲洗；(3)沥干后加入 PI 工作液，室温孵育 15 分钟；(4)冲洗后封片。结果：PI 最大激发波长和最大发射波长分别为 488nm 和 630nm，荧光显微镜观察，DNA 呈红色荧光。
