1、自 然 科 学 进 展 第 17 卷 第 11 期 2007 年 11 月3 研 究 简 讯 3Ghrelin 样 免 疫 活 性 细 胞 在 文 昌 鱼 体 内 的分 布 2免 疫 组 织 化 学 的 定 位 3翁 幼 竹 宋 海 霞 方 永 强 3 3国 家 海 洋 局 第 三 海 洋 研 究 所 , 厦 门 3610052007204219 收 稿 , 2007205216 收 修 改 稿3 国 家 自 然 科 学 基 金 资 助 项 目 (批 准 号 : 30470224 , 40576075)3 3 通 信 作 者 , E2mail : fant98 public. xm. fj.
2、cn摘 要 用 免 疫 组 织 化 学 方 法 和 兔 抗 合 成 的 哺 乳 类 ghrelin 多 克 隆 抗 体 , 研 究 了 ghrelin 样 免 疫 活性 细 胞 在 文 昌 鱼 ( B ranchiostom a belcheri) 体 内 的 分 布 . 结 果 表 明 , ghrelin 样 免 疫 活 性 细 胞 广 泛 分布 在 文 昌 鱼 神 经 系 统 、 哈 氏 窝 和 轮 器 、 消 化 道 和 性 腺 (卵 巢 和 精 巢 ) . 在 神 经 系 统 , ghrelin 样 免 疫活 性 神 经 元 及 其 突 起 特 异 性 分 布 在 脑 泡 背 面 与
3、腹 面 和 脑 泡 漏 斗 部 以 及 在 神 经 管 均 可 见 分 散 的 免 疫活 性 神 经 细 胞 及 其 神 经 纤 维 . 哈 氏 窝 1 3 层 的 上 皮 细 胞 和 轮 器 细 胞 中 均 显 ghrelin 样 免 疫 阳 性 ,阳 性 物 质 沿 胞 膜 分 布 . 在 消 化 道 , ghrelin 样 免 疫 活 性 细 胞 分 布 在 肝 盲 囊 、 中 肠 前 部 和 中 肠 后 部 ,其 中 以 肝 盲 囊 阳 性 细 胞 的 数 量 最 多 , 中 肠 后 部 次 之 , 中 肠 前 部 最 少 , 它 们 分 别 属 开 放 型 和 封 闭 型内 分 泌
4、细 胞 . 在 性 腺 , 小 生 长 期 和 大 生 长 期 卵 巢 中 卵 原 细 胞 、 卵 母 细 胞 和 滤 泡 细 胞 以 及 精 巢 中 早期 生 精 细 胞 和 足 细 胞 均 检 测 到 ghrelin 样 免 疫 阳 性 物 质 . ghrelin 样 细 胞 在 文 昌 鱼 体 内 的 广 泛 分 布 ,表 明 该 细 胞 在 进 化 上 的 保 守 性 及 功 能 多 样 性 . 研 究 发 现 文 昌 鱼 脑 泡 和 哈 氏 窝 均 存 在 ghrelin 样 免 疫活 性 细 胞 , 为 它 们 之 间 可 能 建 立 调 节 哈 氏 窝 分 泌 生 长 激 素 的
5、 兴 奋 系 统 提 供 新 的 形 态 学 证 据 .关 键 词 ghrelin(促 食 欲 激 素 ) 文 昌 鱼 神 经 系 统 哈 氏 窝 消 化 道 性 腺Kojima 等 在 1999 年 首 次 报 道 了 从 大 鼠 胃 中 提取 、 纯 化 和 鉴 定 出 一 种 28 个 氨 基 酸 的 肽 “ gh2relin ” ( growt h2hormone secretagoguereceptor ,GHS2R) , 它 是 生 长 激 素 促 分 泌 素 受 体 的 一 种 天 然内 源 性 配 体 , 具 有 刺 激 脑 垂 体 分 泌 生 长 激 素 的 作用 1 ,2
6、. 因 此 , 人 们 已 将 ghrelin 归 为 脊 椎 动 物 下 丘脑 调 节 脑 垂 体 分 泌 生 长 激 素 的 兴 奋 系 统 , 也 称 为 生长 激 素 的 第 三 种 生 理 调 节 者 ( t hird p hysiologicalregulator) 3 . ghrelin 现 已 被 证 明 在 脊 椎 动 物 , 哺乳 类 (包 括 人 ) 3 5 、 鸟 类 6 、 两 栖 类 7 和 鱼 类 8 10 体 内 的 多 种 组 织 中 分 布 , 行 使 多 种 生 理 功 能 . 而 在爬 行 类 和 圆 口 类 , 则 尚 未 见 ghrelin 的 研
7、究 报 道 .头 索 类 文 昌 鱼 是 介 于 无 脊 椎 动 物 进 化 到 脊 椎 动 物 的过 渡 类 型 , 其 体 内 是 否 存 在 ghrelin , 迄 今 也 尚 未 研究 . 本 文 采 用 兔 抗 合 成 的 哺 乳 类 ghrelin 的 多 克 隆抗 体 对 其 在 文 昌 鱼 神 经 系 统 (脑 泡 和 神 经 管 ) 、 哈 氏窝 和 轮 器 、 消 化 道 和 性 腺 (卵 巢 和 精 巢 ) 中 的 分 布 进行 免 疫 组 织 化 学 定 位 , 目 的 在 于 : 了 解 ghrelin 在文 昌 鱼 体 内 分 布 及 其 可 能 的 功 能 , 尤
8、 其 是 了 解 脑 泡是 否 存 在 ghrelin 样 免 疫 活 性 神 经 元 , 为 脑 泡 和 哈氏 窝 之 间 可 能 存 在 类 似 脊 椎 动 物 的 生 长 激 素 兴 奋 系统 提 供 新 的 形 态 学 证 据 .27511 材 料 和 方 法1. 1 实 验 动 物文 昌 鱼 ( B ranchiostom a belcheri) 取 自 福 建 省 厦门 市 同 安 琼 头 海 区 . 取 材 时 间 从 2004 年 5 月 至2005 年 4 月 . 从 海 区 采 集 的 文 昌 鱼 在 室 内 水 族 箱 中暂 养 1 周 , 每 日 投 喂 单 细 胞 藻
9、 类 , 上 下 午 各 1 次 .待 适 应 后 , 取 成 年 雌 、 雄 文 昌 鱼 共 12 尾 , 属 性 腺发 育 不 同 时 期 , 体 长 43. 8 56. 6 mm , 用 于 本 研究 .1. 2 样 品 制 备整 尾 文 昌 鱼 经 低 温 麻 醉 后 , 投 入 新 配 制 Bouin液 (不 含 醋 酸 ) 固 定 24 h , 在 梯 度 酒 精 脱 水 过 程 中 ,分 头 、 中 、 尾 三 部 分 , 取 头 部 和 中 部 用 石 蜡 包 埋 ,连 续 横 切 或 纵 切 片 , 厚 6 7 m , 切 片 裱 贴 在 预 先涂 有 多 聚 赖 氨 酸 的
10、 载 玻 片 上 . 在 低 倍 显 微 镜 下 , 挑选 带 有 脑 泡 、 神 经 管 、 哈 氏 窝 、 消 化 道 各 部 位 以 及不 同 发 育 时 期 性 腺 (卵 巢 和 精 巢 ) 的 切 片 , 用 于 免 疫组 织 化 学 反 应 .1. 3 免 疫 组 织 化 学 反 应 程 序按 照 免 疫 组 织 化 学 SABC 的 程 序 进 行 : 切 片 脱蜡 水 化 后 , 放 入 3 %H2 O2 中 10 min , 以 除 去 内 源 性过 氧 化 物 酶 活 性 . 抗 原 热 修 复 后 , 蒸 馏 水 轻 洗 , 0.01 mol/ L PBS (p H 7.
11、 2 7. 4)浸 泡 5 min , 然 后 滴 加1 10 正 常 山 羊 血 清 封 闭 液 , 室 温 下 孵 育 15 min.滴 加 第 一 抗 体 , 兔 抗 合 成 的 哺 乳 类 ghrelin (购 自 武汉 博 士 德 生 物 工 程 有 限 公 司 ) 的 多 克 隆 抗 体 (1 150稀 释 ) , 4 孵 育 36 h. PBS 轻 洗 , 滴 加 生 物 素 化 二抗 (购 自 武 汉 博 士 德 生 物 工 程 有 限 公 司 ) , 室 温 下 孵育 20 min , PBS 轻 洗 , 滴 加 SABC 复 合 物 ( strepta2vidin2biot
12、in2peroxidase complex ) , 室 温 下 孵 育20 min , 最 后 用 3 , 3 2二 氨 基 联 苯 胺 (DAB) 显 色15 20 min. 阴 性 对 照 实 验 包 括 用 正 常 兔 血 清 、PBS 替 代 第 一 抗 体 孵 育 , 或 在 SABC 反 应 中 省 去 第一 步 进 行 同 步 反 应 , 对 照 染 色 结 果 为 阴 性 .2 结 果免 疫 染 色 结 果 显 示 , ghrelin 样 免 疫 活 性 细 胞 分布 于 文 昌 鱼 的 神 经 系 统 、 哈 氏 窝 和 轮 器 、 消 化 道 、精 巢 和 卵 巢 . 分
13、述 如 下 :(1) 神 经 系 统 : 文 昌 鱼 神 经 系 统 为 一 条 横 贯 身体 的 实 心 管 状 结 构 , 可 分 为 头 部 略 微 膨 大 的 脑 泡 和体 部 的 神 经 管 (脊 髓 ) . 免 疫 组 化 染 色 结 果 显 示 ,ghrelin 样 免 疫 活 性 神 经 元 定 位 在 脑 泡 背 面 和 腹 面 以及 脑 泡 右 侧 延 伸 并 紧 靠 哈 氏 窝 的 部 位 , 称 为 脑 泡 漏斗 部 . 脑 泡 中 免 疫 活 性 神 经 元 共 同 特 点 是 免 疫 阳 性物 质 均 沿 胞 膜 及 其 突 起 分 布 , 显 深 棕 色 , 核
14、显 示 免疫 阴 性 (图 1 (a) , ( b) ) . 在 神 经 管 的 纵 切 面 上 可 见在 背 面 和 中 央 及 腹 面 均 有 分 散 免 疫 活 性 神 经 元 及 其突 起 和 神 经 纤 维 分 布 , 纤 维 成 念 珠 状 排 列(图 1 (c) ) .(2) 哈 氏 窝 : 文 昌 鱼 哈 氏 窝 是 脊 椎 动 物 原 始 的脑 垂 体 , 由 3 种 不 同 的 细 胞 类 型 所 组 成 . 靠 近 哈 氏窝 基 部 的 上 皮 细 胞 为 梭 形 或 不 规 则 形 , 细 胞 之 间 交错 排 列 , 有 2 3 层 . 免 疫 组 织 化 学 染 色
15、 结 果 显 示 ,ghrelin 样 免 疫 活 性 分 布 在 哈 氏 窝 基 部 上 皮 细 胞 各 层和 轮 器 细 胞 中 , 显 示 强 的 免 疫 阳 性 反 应 , 染 为 深 棕色 (图 1 (d) ) . 同 时 , 在 脑 泡 和 哈 氏 窝 纵 切 面 上 清 楚可 见 脑 泡 漏 斗 部 中 有 大 小 不 同 免 疫 活 性 神 经 元 和 哈氏 窝 中 免 疫 活 性 上 皮 细 胞 , 且 两 者 紧 密 接 触 (图1 (e) ) . 另 外 , 阴 性 对 照 片 , 用 正 常 兔 血 清 替 代 第一 抗 体 进 行 孵 育 , 显 免 疫 阴 性 (图
16、 (f) ) .(3) 消 化 道 : 文 昌 鱼 消 化 道 为 一 条 直 的 管 道 ,包 括 咽 、 短 的 食 道 、 肝 盲 囊 、 中 肠 前 部 、 中 肠 后部 、 后 肠 至 肛 门 . ghrelin 样 免 疫 阳 性 细 胞 分 布 在 肝盲 囊 、 中 肠 前 部 和 后 部 , 其 中 以 肝 盲 囊 阳 性 细 胞 的数 量 最 多 , 中 肠 后 部 次 之 , 中 肠 前 部 最 少 . 这 些 阳性 细 胞 在 消 化 道 不 同 部 位 分 布 的 特 点 有 异 , 在 肝 盲囊 多 数 呈 细 长 纺 锤 状 , 其 顶 端 和 基 部 略 为 膨
17、大 , 中间 部 则 十 分 纤 细 , 有 的 细 胞 基 部 胞 质 伸 抵 基 膜 (图2 (a) ) , 为 一 种 典 型 的 开 放 型 胃 肠 道 内 分 泌 细 胞 ,此 种 类 型 细 胞 还 可 见 在 中 肠 前 部 (图 2 ( b) ) . 在 中 肠后 部 , 有 两 种 类 型 的 免 疫 阳 性 细 胞 , 一 种 是 细 胞 为圆 形 或 椭 圆 形 分 散 靠 近 肠 腔 , 第 二 种 为 纺 锤 形 或 圆锥 型 . 前 者 为 一 种 典 型 的 封 闭 型 胃 肠 道 内 分 泌 细胞 , 后 者 仍 为 开 放 型 细 胞 (图 2 (c) ) .
18、 文 昌 鱼 消 化 道其 他 部 位 均 显 示 免 疫 阴 性 . 阴 性 对 照 片 中 , 在SABC 反 应 中 省 去 第 一 步 进 行 同 步 反 应 , 染 色 结 果为 阴 性 (图 2 (d) ) .(4) 性 腺 : 在 卵 巢 , ghrelin 样 免 疫 活 性 物 质 定位 在 小 生 长 期 和 大 生 长 期 卵 原 细 胞 和 卵 母 细 胞 的 核3751自 然 科 学 进 展 第 17 卷 第 11 期 2007 年 11 月膜 、 核 仁 膜 和 胞 质 , 以 及 滤 泡 细 胞 , 均 显 示 强 的 免疫 阳 性 反 应 , 核 质 则 显 免
19、 疫 阴 性 (图 3 (a) , ( b) ) .在 精 巢 , ghrelin 样 免 疫 活 性 物 质 定 位 在 早 期 生 精 细胞 (精 原 细 胞 、 初 级 精 母 细 胞 ) 和 Sertoli 细 胞 (足 细胞 ) , 显 深 棕 色 , 精 细 胞 和 精 子 则 显 示 免 疫 阴 性 反应 (图 3 (c) ) .图 1 ghrelin 在 文 昌 鱼 神 经 系 统 和 哈 氏 窝 的 分 布(a) 雄 性 文 昌 鱼 头 部 横 切 面 , ghrelin 样 免 疫 活 性 神 经 元 及 其 突 起 分 布 在 脑 泡 背 面 和 腹 面 (箭 头 ) ;
20、 (b) ghrelin 样 免疫 活 性 神 经 元 分 布 在 脑 泡 右 侧 漏 斗 部 (箭 头 ) ; (c) 雌 性 文 昌 鱼 神 经 管 纵 切 面 , 可 见 ghrelin 样 免 疫 活 性 神 经 元 及其 突 起 (粗 箭 头 )以 及 神 经 纤 维 (细 箭 头 )分 散 在 神 经 管 背 面 和 腹 面 ; (d) 雌 性 文 昌 鱼 头 部 横 切 面 , ghrelin 样 免 疫活 性 细 胞 分 布 在 哈 氏 窝 基 部 1 3 层 上 皮 细 胞 (粗 箭 头 )和 轮 器 细 胞 (细 箭 头 ) 中 ; (e) 雄 性 文 昌 鱼 头 部 纵
21、切 面 , 可见 脑 泡 中 ghrelin 样 免 疫 活 性 神 经 元 (粗 箭 头 )和 哈 氏 窝 中 免 疫 活 性 细 胞 (细 箭 头 ) ; (f) 雄 性 文 昌 鱼 头 部 横 切 面 对照 片 , 用 正 常 兔 血 清 替 代 第 一 步 抗 体 , 对 照 染 色 结 果 为 阴 性 . NP : 脑 泡 ; H : 哈 氏 窝 ; 细 箭 头 : 脑 泡 漏 斗 部 和 哈氏 窝 的 关 系 ; NO : 脊 索图 2 ghrelin 样 免 疫 活 性 细 胞 在 消 化 道 的 分 布(a) 雄 性 文 昌 鱼 中 段 横 切 面 , ghrelin 样 免
22、疫 活 性 细 胞 分 布 在 肝 盲囊 , 为 一 种 开 放 型 内 分 泌 细 胞 (箭 头 ) ; ( b) ghrelin 样 免 疫 活 性 细 胞分 布 在 中 肠 前 部 ; (c) ghrelin 样 免 疫 活 性 细 胞 分 布 在 中 肠 后 部 , 为开 放 型 (细 箭 头 )和 封 闭 型 (粗 箭 头 )细 胞 ; (d) 中 肠 前 部 阴 性 对 照 片在 SABC 反 应 中 省 去 第 一 步 进 行 同 步 反 应 , 染 色 结 果 为 阴 性3 讨 论自 从 1999 年 Kojima 及 其 同 事 首 先 发 现 ghrelin以 来 1 ,2
23、 , 有 关 它 的 组 织 定 位 、 分 子 结 构 、 生 理 功能 及 其 调 节 的 研 究 已 成 为 新 近 内 分 泌 学 研 究 的 热 点之 一 . Ghrelin 样 免 疫 活 性 细 胞 在 动 物 体 内 分 布 广泛 , 已 在 大 多 数 脊 椎 动 物 的 胃 、 肠 、 脑 、 垂 体 、 性腺 、 胰 腺 、 肾 , 甚 至 肝 、 脾 、 鳃 和 头 肾 等 组 织 中 检测 到 . 本 研 究 首 次 发 现 ghrelin 样 免 疫 活 性 细 胞 广泛 分 布 在 头 索 类 文 昌 鱼 脑 泡 、 神 经 管 、 哈 氏 窝 和 轮器 、 消
24、化 道 、 精 巢 和 卵 巢 中 , 表 明 ghrelin 样 细 胞在 脊 椎 动 物 进 化 过 程 中 具 有 高 度 的 保 守 性 .现 有 研 究 资 料 表 明 ghrelin 是 一 种 多 功 能 激 素 ,其 主 要 生 理 作 用 是 刺 激 食 欲 和 使 脑 垂 体 释 放 生 长 激素 . 一 系 列 离 体 和 在 体 生 理 实 验 一 致 显 示 , 给 予ghrelin 能 够 以 剂 量 2依 赖 方 式 强 烈 刺 激 脑 垂 体 释 放4751 自 然 科 学 进 展 第 17 卷 第 11 期 2007 年 11 月图 3 ghrelin 免 疫
25、 活 性 物 质 在 性 腺 的 分 布(a) 卵 巢 期 , ghrelin 免 疫 活 性 物 质 定 位 在 卵 原 细 胞 和 卵 母 细 胞 核 膜 、 核 仁 膜 和 胞 质 ;(b) 卵 巢 期 , ghrelin 免 疫 活 性 物 质 定 位 在 大 生 长 期 卵 母 细 胞 靠 近 核 膜 的 胞 质 和 滤 泡 细胞 (箭 头 )的 胞 质 , 核 显 免 疫 阴 性 ; (c) 精 巢 期 , ghrelin 免 疫 活 性 物 质 定 位 在 精 原 细 胞(空 心 箭 头 ) 、 初 级 精 母 细 胞 (粗 箭 头 ) 、 次 级 精 母 细 胞 (细 箭 头
26、)和 Sertoli 细 胞 (Sc)促 生 长 激 素 ( GH) , 这 已 在 人 11 、 大 鼠 1 、 鸡 12 、蛙 13 和 鱼 14 得 到 证 实 , 且 生 理 效 应 等 同 甚 至 超 过下 丘 脑 促 生 长 激 素 释 放 激 素 ( GHR H) , 并 已 证 实 脑内 ghrelin 与 GHR H 刺 激 脑 垂 体 释 放 GH 的 作 用 机制 是 不 同 的 15 . 新 近 我 们 证 明 了 文 昌 鱼 脑 泡 和 哈 氏窝 之 间 可 能 建 立 类 似 脊 椎 动 物 原 始 的 抑 制 哈 氏 窝 分泌 GH 的 调 控 系 统 16 ,
27、而 对 其 脑 泡 是 否 存 在 调 节 哈氏 窝 分 泌 GH 的 兴 奋 系 统 (如 GHR H 和 ghrelin) 的神 经 元 , 一 直 不 清 楚 . 本 研 究 在 文 昌 鱼 脑 泡 中 发 现ghrelin 样 免 疫 活 性 神 经 元 , 作 为 刺 激 或 兴 奋 哈 氏 窝GH 样 细 胞 分 泌 GH 的 第 三 种 生 理 调 节 者 , 这 就 为文 昌 鱼 在 脑 泡 2哈 氏 窝 之 间 也 可 能 建 立 兴 奋 系 统 提 供形 态 学 新 证 据 . 虽 然 我 们 尚 未 证 明 GHR H 在 脑 泡的 存 在 , 但 这 一 新 的 发 现
28、 将 为 了 解 文 昌 鱼 存 在 调 节哈 氏 窝 分 泌 生 长 激 素 兴 奋 系 统 的 可 能 性 向 前 迈 进 了一 步 , 因 而 , 有 重 要 的 理 论 意 义 . 我 们 还 认 为 哈 氏窝 中 的 ghrelin 样 免 疫 活 性 细 胞 可 能 像 脊 椎 动 物 脑垂 体 ghrelin 细 胞 17 一 样 , 以 自 分 泌 或 旁 分 泌 方 式直 接 影 响 哈 氏 窝 GH 细 胞 的 分 泌 .其 次 , 在 哺 乳 类 (包 括 人 ) 和 鱼 类 的 研 究 表 明 ,ghrelin 具 有 强 烈 的 刺 激 动 物 摄 食 的 效 应 1
29、8 , 故 我们 建 议 将 ghrelin 称 为 促 食 欲 激 素 , 其 行 使 这 种 作用 是 通 过 脑 内 一 种 食 欲 肽 2神 经 肽 Y( N P Y) 来 实 现的 19 . 有 趣 的 是 , 先 前 我 们 报 道 了 文 昌 鱼 脑 泡 存 在N P Y免 疫 阳 性 神 经 元 20 , 这 就 表 明 文 昌 鱼 脑 泡 中已 经 存 在 组 成 脊 椎 动 物 食 欲 调 节 中 枢 所 必 须 具 备 两种 神 经 元 , ghrelin 和 N P Y 神 经 元 , 这 对 于 明 了 调节 食 欲 中 枢 神 经 细 胞 的 起 源 与 进 化 是
30、 很 有 意 义 的 .当 然 , 确 定 这 两 种 神 经 元 具 有 调 节 文 昌 鱼 食 欲 的 功能 , 仍 需 要 有 更 多 的 证 据 .文 昌 鱼 肝 盲 囊 具 有 脊 椎 动 物 胃 的 结 构 和 功 能 ,且 ghrelin 样 免 疫 活 性 细 胞 的 数 量 最 多 , 与 哺 乳 类 、鸡 和 蛙 相 类 似 1 ,7 8 , 表 明 文 昌 鱼 像 脊 椎 动 物 一 样 ,肝 盲 囊 也 是 ghrelin 在 胃 肠 道 的 主 要 来 源 . 另 外 ,文 昌 鱼 胃 肠 中 存 在 两 种 类 型 ghrelin 样 免 疫 阳 性 细胞 , 与
31、大 鼠 胃 肠 道 ghrelin 样 细 胞 类 型 相 类 似 21 .文 昌 鱼 开 放 型 ghrelin 样 细 胞 的 特 点 有 二 , 一 是 细胞 伸 出 胞 质 突 起 , 并 与 肠 腔 相 通 , 这 种 特 点 与 我 们先 前 报 道 的 鲻 鱼 胃 肠 道 内 分 泌 细 胞 的 形 态 十 分 类似 22 ; 另 一 种 开 放 型 ghrelin 样 细 胞 的 长 胞 质 突 起伸 向 基 膜 , 有 可 能 行 使 旁 分 泌 来 影 响 文 昌 鱼 肠 上 皮细 胞 的 分 泌 活 动 .ghrelin 对 动 物 生 殖 功 能 的 影 响 , 现 有
32、 资 料 几 乎全 是 在 哺 乳 动 物 上 的 研 究 , 如 ghrelin 在 灵 长 类 (包括 人 )和 啮 齿 类 卵 巢 中 黄 体 细 胞 和 门 间 质 细 胞 ( hilusinterstitial cells) 23 及 精 巢 中 两 种 体 细 胞 (间 质 细 胞和 足 细 胞 ) 24 表 达 , 而 在 非 哺 乳 类 尚 未 见 到 可 利 用资 料 . 因 此 , 本 研 究 首 先 发 现 头 索 类 文 昌 鱼 卵 巢 中卵 原 细 胞 、 卵 母 细 胞 和 滤 泡 细 胞 以 及 精 巢 中 足 细 胞和 生 精 细 胞 均 对 ghrelin 抗
33、 体 发 生 强 的 免 疫 阳 性 反应 , 这 个 发 现 对 进 一 步 追 踪 ghrelin 在 非 哺 乳 类 脊椎 动 物 性 腺 发 育 中 所 起 的 作 用 提 供 重 要 的 线 索 , 至于 性 腺 中 ghrelin 免 疫 活 性 物 质 的 来 源 , 有 待 进 一步 研 究 .总 之 , 本 文 研 究 首 次 证 实 ghrelin 免 疫 活 性 细胞 及 活 性 物 质 存 在 于 头 索 类 文 昌 鱼 脑 泡 、 神 经 管 、5751自 然 科 学 进 展 第 17 卷 第 11 期 2007 年 11 月哈 氏 窝 和 轮 器 、 消 化 道 及
34、 卵 巢 和 精 巢 , 并 揭 示 文 昌鱼 很 可 能 存 在 类 似 脊 椎 动 物 的 调 节 哈 氏 窝 生 长 激 素分 泌 的 兴 奋 系 统 , 从 而 为 阐 明 文 昌 鱼 哈 氏 窝 生 长 激素 分 泌 的 调 控 机 制 提 供 新 的 形 态 学 证 据 . 另 外 ,ghrelin 在 文 昌 鱼 多 种 组 织 中 的 存 在 , 表 明 ghrelin在 文 昌 鱼 体 内 行 使 多 种 不 同 的 生 理 功 能 , 这 对 于 了解 ghrelin 这 种 新 型 多 效 调 节 激 素 的 一 系 列 内 分 泌作 用 具 有 重 要 的 比 较 内
35、分 泌 学 和 进 化 上 的 意 义 .参 考 文 献1 Kojima M , Hosoda H , Date Y , et al. Ghrelin is a growt h2hor2mone2releasing acylated peptide from stomach. Nature , 1999 ,402 : 656 6602 Kojima M , Kangawa K. Ghrelin : Structure and function. Physi2ol Rev , 2005 , 85 : 495 5223 Kamegai J , Tamura H , Shimizu T , et a
36、l. Regulation of t he gh2relin gene : Growt h hormone2releasing hormone upregulates mR2NA in t he pituitary. Endocrinol , 2001 , 142 : 4154 41574 Date Y , Nakazato M , Murakami N , et al. Ghrelin act s in t hecentral nervous system to stimulate gastric acid secretion. Bio2chem Biophys Res Commun , 2
37、001 , 280 : 904 9075 Mondal MS , Date Y , Yamaguchi H , et al. Identification of gh2relin and it s receptor in neurons of t he rat arcuate nucleus. RegulPept , 2005 , 126 : 55 596 Neglia S , Arcamone N , Esposito V , et al. Presence and distri2bution of ghrelin2immunopositive in t he chicken gastroi
38、ntestinaltract . Acta Histochemica , 2005 , 107 : 3 97 Galas L , Chartrel N , Kojima M , et al. Immunohistochemical lo2calization and biochemical characterization of ghrelin in t he brainand stomach of t he frog Rana esculenta. J Compara Neurol ,2002 , 450 : 34 448 Parhar IS , Sato H , Sakuma Y. Ghr
39、elin gene in cichlid fish ismodulated by sex and development . Biochem Biophys Res Com2mun , 2003 , 305 : 169 1759 Kaiya H , Kojima M , Hosoda H , et al. Amidated fish ghrelin :Purification , cDNA cloning in t he Japanese eel and it s biologicalactivity. J Endocrinol , 2003 , 176 : 415 42310 Kaiya H
40、 , Small BC , Bilodeau AL , et al. Purification , cDNAcloning , and characterization of ghrelin in channel catfish , Icta2lurus punctatus. Gen Comp Endocrinol , 2005 , 143 : 201 21011 Arvat E , Di2Vito L , Broglio F , et al. Preliminary evidence t hatGhrelin , t he natural GH secretagogue ( GHS)2rec
41、eptor ligand ,strongly stimulates GH secretion in humans. J Endocrinol In2vest , 2000 , 23 : 493 49512 Baudet ML , Harvey S. Ghrelin2induced GH secretion in domes2tic fowl in vivo and in vit ro. J Endocrinol , 2003 , 179 (1) : 97 10513 Kaiya H , Kojima M , Hosoda H , et al. Bullfrog ghrelin is modi2
42、fied by n2octanoic acid at it s t hird t hreonine residue. J BiolChem , 2001 , 276 : 40441 4044814 Kaiya H , Kojima M , Hosoda H , et al. Peptide purification ,complementary deoxyribonucleic acid (DNA) and genomic DNAcloning , and functional characterization of ghrelin in rainbowtrout . Endocrinol ,
43、 2003 , 144 : 5215 522615 Yamazaki M , Kobayashi H , Tanaka H , et al. Ghrelin2inducedgrowt h hormone release from isolated rat anterior pituitary cellsdepends on intracellullar and extracellular Ca2 + sources. J Neu2roendocrinology , 2004 , 16 (10) : 825 83116 Fang YQ , Weng YZ. Distribution of gro
44、wt h hormone2like im2munoreactive cells and somatostatin receptors in t he nervous sys2tem and Hat schek s pit of amphioxus , B ranchiostoma belcheri .Progress in Natural Science , 2006 , 16 : 359 36517 Korbonit s M , Bustin SA , Kojima M , et al. The expression oft he growt h hormone secretagogue r
45、eceptor ligand ghrelin in nor2mal and abnormal human pituitary and ot her neuroendocrinetumors. J Clin Endocrinol Metab , 2001 , 86 : 881 88718 Unniappan S , Canosa L F , Peter RE. Orexigenic actions of ghre2lin in goldfish : feeding2induced changes in brain and gut mRNAexpression and serum levels ,
46、 and responses to central and periph2eral injections. Neuroendocrinology , 2004 , 79 : 100 10819 Cowley MA , Smit h R G , Diano S , et al. The distribution andmechanism of action of ghrelin in t he CNS demonstrates a novelhypot halamic circuit regulating energy homeostasis. Neuron ,2003 , 37 (4) : 6
47、49 66120 翁 幼 竹 , 方 永 强 . 神 经 肽 Y和 2内 啡 肽 样 免 疫 阳 性 物 质 在 文 昌鱼 神 经 系 统 和 哈 氏 窝 的 分 布 . 实 验 生 物 学 报 , 2002 , 35 ( 3) :205 21021 Sakata I , Nakamura K , Yamazaki M , et al. Ghrelin2producingcells exist as two types of cells , closed2 and opened2type cells , int he rat gastrointestinal tract . Peptides
48、, 2002 , 23 : 531 53622 方 永 强 , 翁 幼 竹 , 胡 晓 霞 , 等 . 鲻 鱼 胃 肠 道 内 分 泌 细 胞 免 疫 组织 化 学 的 定 位 . 水 产 学 报 , 2002 , 26 (6) : 481 48523 Gaytan F , Morales C , Barreiro ML , et al. Expression of growt hhormone secretagogue receptor type 1a , t he functional ghrelinreceptor , in human ovarian surface epit heli
49、um , mullerian ductderivatives , and ovarian tumors. J Clin Endocrinol Metab , 2005 ,90 : 1798 180424 Barreiro ML , Suominen J S , Gaytan F , et al. Developmental ,stage2specific , and hormonally regulated expression of growt hhormone secretagogue receptor messenger RNA in rat testis. BiolReprod , 2003 , 68 : 1631 16406751 自 然 科 学 进 展 第 17 卷 第 11 期 2007 年 11 月
