1、2013年11月 第36卷第6期 四川师范大学学报(自然科学版) Journal of Sichuan Normal University(Natural Science) Nov，2013 Vo136，No6 川贝母组培苗快速繁殖研究 王跃华 ， 江明殊 ， 何诗虹 ， 郭翠平 ， 刘 涛 ， 王晓蓉 (1成都大学生物产业学院，四川成都610016；2四川师范大学生命科学院，四川成都610101； 3成都恩威集团(投资)有限公司，四川成都610041) 摘要：建立川贝母组培苗快繁体系，为实现川贝母工业化育苗、保护野生植物资源和发展人工育种技术 提供新的途径研究植物激素对川贝母鳞片叶形成愈伤组
2、织、分化小鳞茎和诱导鳞茎抽苗以及无根苗生根 的影响，筛选出最佳培养基配方结果表明，愈伤组织诱导最佳培养基为Ms+6一BA 10 m L+2，4一D 0 5 mgL，诱导率为8433；诱导产生小鳞茎的最佳培养基为MS+KT 20 m L+NAA 03 mgL，诱导率为 8277；鳞茎抽苗的最佳培养基为MS+6一BA 30 mgL+IBA 03 mgL，抽苗率为8539；无根苗生根 最佳培养基为MS+NAA 03 mgCL，生根率为8320 关键词：川贝母；组培苗；繁殖 中图分类号：R28271 文献标志码：A 文章编号：10018395(2013)06094104 doi：1O3969jissn
3、10018395201306026 川贝母(Fritillaria cirrhosa DDon)为百合科贝 母属多年生草本植物，以其地下鳞茎入药，为名贵 的川产道地药材之一药用植物川贝母生长在海拔 2 8004 700 m的高山灌丛或草地中 J，主要依靠 种子进行有生繁殖，但因其种子存在形态和生理后 熟的特性 J，因此存在J rl贝母种苗培育难度大、花 费时间长和繁殖系数低等问题 本文开展了川贝母组培苗快速繁殖技术的研 究，并对川贝母鳞片叶形成愈伤组织、分化小鳞茎 和诱导鳞茎抽苗以及元根苗生根的过程进行了较 深入的研究，旨在为实现川贝母工业化育苗技术提 供科学依据 1材料与方法 11材料本实验
4、材料选自成都大学组培室培育 的川贝母鳞茎 12 方法 121鳞片叶外植体产生愈伤组织的激素配比研 究选择生长健康的川贝母组培再生鳞茎，在超净 台上迅速将鳞片叶切下，分别接种于附加6一BA和 2，4一D组合的培养基中，激素配比见表I以MS 为基本培养，蔗糖质量浓度为3O L和琼脂质量浓 度为68 L；在光照强度1 000l 500 lx，培养温 度为20的条件下培养45 d后统计愈伤组织诱导 率并记录愈伤组织生长情况 122 小鳞茎诱导的激素配比研究 选取质地较 紧密、生长速度快和颜色为黄色或淡黄色的愈伤组 织，切成适当大小接入附加6一BA、NAA和KT组 合的培养基中，激素配比见表2培养条件与
5、121 相同，在培养45 d后统计小鳞茎的诱导率小鳞茎 诱导率=产生小鳞茎的愈伤组织数接种的愈伤组 织个数X 100 表1不同激素配比对鳞片叶产生愈伤组织的影响 Table 1 Effects of different plant hormones on production of eaus of scale leaf 注：培养45 d统计结果 收稿日期：20130510 基金项目：成都市经济和信息化委员会科研项目(2012)，成都市科技计划项目(12GGYB413SW-001)和四川省科技支撑计划(20I1SZDO07) 资助项目 作者简介：王跃华(1963一)，女，教授，主要从事生药学的研
6、究，Email：1961689636qqcorn 四川师范大学学报(自然科学版) 123鳞茎抽苗的激素配比研究 当小鳞茎直径 生长到06 cm左右时，转入附有6一BA和IBA组 合的培养基中，激素配比见表3；光照强度1 500 2 000 lx，其它培养条件与121相同，培养45 d后 统计鳞茎的抽苗率 124生根待无根苗长至2 cm高左右时，切取 无根苗转入由不同激素配比的培养基中，激素配比 见表4生根培养基采用12 MS为基本培养基，蔗 糖质量浓度为l5 L，其它培养条件与121相 同，在培养60 d统计生根情况 2结果与分析 21 不同激素配比对鳞片叶产生愈伤组织的影响 从 l试验结果可
7、以得知：A 培养基中未添加任何 激素的情况下，在培养45 d后其愈伤组织的诱导率 为0，这可能是因为川贝母外植体本身的内源激素 含量较低，在培养过程中不能使得鳞片叶细胞发生 脱分化作用而产生愈伤组织的缘故；而在A A 培养基中，由于添加了植物外源激素，其愈伤组织 的诱导率呈现出不同程度的明显增加L3j，这说明在 川贝母鳞片叶产生愈伤组织的过程中植物外源激 素起着重要的作用 表2不同激素配比对鳞茎诱导的影响 Table 2 Effects of different plant hormones on bulb induction 生长调节物质 培养基编号 质量浓度(mgL) 6一BA NAA K
8、T B1 20 01 B， 2 0 03 B 01 2 0 B4 03 20 接种数个诱导率 40 4047 40 7501 4() 8O36 40 8277 从表1试验结果显示，添加不同外源激素对其 愈伤组织的诱导率影响也有不同；其中以A 培养 基的激素配比产生的愈伤组织诱导率最高达到 8433由此可见，2，4一D浓度在一定范围内增 高，对其愈伤组织诱导是有促进作用的；但当2，4一 D质量浓度继续增高到08 mgL以上时，愈伤组 织的诱导率呈现出明显地F降，2，4一D质量浓度 继续升高到10 mg1 时，其愈伤组织诱导率最低 仅为3250；这说明低浓度的2，4一D有促进其愈 伤组织生长的作用
9、，而高浓度的2，4一D有抑制愈 伤组织生长的作用，而且过量的2，4一D对愈伤组 第36卷 织产生有毒效应，随着浓度的增加，生长后期加速 衰老，死亡 22愈伤组织分化产生小鳞茎的研究 选取在上 述A 培养基上继代培养2次、颜色为黄色和淡黄 色质地紧密的愈伤组织，切成0508 cm 左右的 大小接入表2培养基中在培养20 d后可观察到愈 伤组织表面长出白色小突起，随后白色突起进一步 生长成为圆形或圆锥形突起的小鳞茎雏体，随着培 养时间的延长，小鳞茎体积逐渐膨大，培养45 d后 统计鳞茎的诱导率 从表2实验结果显示，在B 和B 培养基配方 中6一BA的质量浓度一定时，随着NAA质量浓度 由01 mg
10、L增加到03 mgL时，其鳞茎的诱导率 随之增加；另外，在B 和B 培养基配方中KT质量 浓度一定时，随着NAA质量浓度由01 mgL增加 到03 mgL时，其鳞茎的诱导率也均随之增加；这 说明在细胞分裂素一定的情况下，较高的生长素有 利于诱导率的提高 j具体比较B 和B 以及启 和B 的实验数据可知，当NAA质量浓度一一定时， KT对鳞茎的诱导效果优于6一BA，B 培养基更适 于川贝母愈伤组织分化鳞茎，其鳞茎诱导率最高为 8277 2。3鳞茎抽苗培养基的筛选待小鳞茎直径长至 06 cm左右时，在超净工作台上将34个小鳞茎 为一组进行分割后转入附加6一BA和BA的鳞茎 抽苗培养基中进行培养接入
11、的小鳞茎起初表现出 体积的继续生长膨大，随后出现鳞片叶的快速伸展 生长，使得本身紧密抱合的鳞片叶逐渐张开，并在 张开鳞片叶的顶端产生明显的绿色；在培养45 d左 右，鳞茎抽苗的形态已非常明显见图1，并可观察到 张开鳞片叶中的心芽 表3不同激素配比对鳞茎抽苗的影响 Table 3 Effects of different plant hormones on seedlings bulb pumping 注：培养45 d统计结果 从表3试验结果可知，在【BA质量浓度为03 四川师范大学学报(自然科学版) 第36卷 的形成和生长，但2，4D的诱导效应比NAA强 这与尹明华等- 对黄独组培苗带芽茎段的
12、研究结 果是一致的 本文通过研究植物外源激素对川贝母鳞片叶 形成愈伤组织、分化小鳞茎和诱导鳞茎抽苗以及无 根苗生根的影响，建立了川贝母组培苗快速繁殖技 术体系，很好地解决了当前川贝母种苗出苗率低和 种苗严重缺乏的难题；并且，采用组织培养技术培 育的组培苗进行产生，还可使川贝母的生产周期缩 短2年左右，因此，开展此工作研究具有非常重要 的现实意义 参考文献 1肖培根，姜艳，李萍，等中药贝母的基原植物和药用亲缘学的研究 Jj植物分类学报，2007，45(4)：473487 2 于婧，魏建和，陈士林，等川贝母种子休眠及萌发特性的研究j中草药，2008，39(7)：10811084 3 常美花，金亚征
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14、坎南B B，瞿礼嘉植物生物化学与分子生物学M北京：科学出版杜，2004：690 9j王芳，文峰，武斌，等激素对蝴蝶兰快速繁殖的影响J新疆农业大学学报，2003，26(4)：6871 1Oj周俊辉，叶超红，陈旭高蝴蝶兰原球茎增殖培养的研究J仲恺农业技术学院学报，2002，15(3)：1317 1 1 Ramage C，Williams R RMineral I qutrition and plant morp hogenesisJVitro Cell Dev Biol Plant，2002，38：1 16124 12张红晓，经剑颖木本植物组织培养技术研究进展Jj河南科技大学学报：农学版，2003
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16、GUO Cuiping ，LIU Tao ，WANG Xiaorong (1Department ofBiological Engineering，Chengdu University，Chengdu 610160，Sichuan； 2College ofLife Science，Swhuan Normal University，Chengdu 610101，Sichuan； 3Chengdu Enwei Group Limited Company，Chengdu 610041，Sichuan) Abstract：The establishment of rapid propagation s
17、ystem of tissue culture of Fritillaria cirrhosa is tO provide a new approach of achieving Industfal nursery，protect the wild plant resources and develop the artificial breeding technologyThe effect of plant hormone on formation ofitillaria cihosa DDon Callus，differentiation of btdblets，seedlings ind
18、uced by pumping the bulb and rooting of rootless seedlings is studiedoptimum medium formula is filteredThe best culture medium of callus induction is MS+6-BA 10 mg L+2，4-D 05 mgL，induction rate is 8433；the best eulture medium ofbulbs Induction is MS+KT 20 m#L+NAA 03 mgL， induction rate is 8277：the best culture medium of seedlings induced by pumping the bulb is MS+6-BA 30 mgL+IBA 03 mg 1 ，seeding rate pumping is 8539；the best culture mediurn of rooting of rootless seedlings is MS+NAA 03 mgL，rooting rate is 832O Key words：Fritillaria eirrhosa；tissue culture；propagation (编辑周 俊)
