1、 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http:/患 者 其 他 状 况 特 别 是 肝 、 肾 功 能 和 营 养 状 况 相 似 ,故对 实 验 结 果 不 应 有 决 定 性 影 响 。致 谢 :普 外 科 张 小 化 副 主 任 医 师 帮 助 实 验 。参 考 文 献1 Gu SN ,Li AH ,Han J M. TPN in abdominal surgical patients. MedJ PL A ,1984 ,9 (5) :364.2 Gaglc
2、 N , Rennie R , Kiss I , et al . Blinded investigetor comparisonof ticarcillin clavulanic acid netilmicin2metronidazole as prophylaxisin surgery for acute chlecystitis. Curr Ther Res , 1989 , 45 ( 3) :460.3 Roscioni C ,Pennelli GM ,Monaco G. Indications of netilmicin andtobramycin for urinary tract
3、infections. Farm Clin , 1988 ,27 (23) :31.4 周 玮 ,刘 文 英 ,安 登 魁 . 高 效 液 相 色 谱 间 接 光 度 检 测 法 及 其 应用 . 国 外 医 学 药 学 分 册 ,1997 ,2 (2) :269.5 袁 成 ,王 景 祥 ,薛 作 英 . 高 效 液 相 色 谱 2间 接 光 度 检 测 法 测 定 血清 中 硫 酸 奈 替 米 星 浓 度 . 中 国 药 学 杂 志 ,1998 ,33 (4) :235.(收 稿 :1997211203)氯 雷 他 定 血 药 浓 度 HPLC测 定 方 法 建 立 和 生 物 利 用 度
4、江 志 强 蒋 新 国 奚 念 朱 陈 桂 良 1 刘 倩 1 张 顺 妹 1 (上 海 200032 上 海 医 科 大 学 药 学 院 生 物 药 剂 学 研 究 室 ; 1 上 海 200233上 海 市 药 品 检 验 所 化 学 室 )摘 要 目 的 :建 立 一 种 灵 敏 的 HPLC 测 定 氯 雷 他 定 血 药 浓 度 的 方 法 ,以 评 价 氯 雷 他 定 片 的 相 对 生 物 利 用 度 。 方 法 :固 定 相 Bondapak C18 ,流 动 相 为 甲 醇 2乙 腈 20. 01mol L - 1p H7. 5 磷 酸 盐 缓 冲 液 (35 35 30)
5、,内 标 为 盐 酸 萘 唑 啉 ,检 测 波 长 为 275nm ;12个 健 康 志 愿 者 采 用 交 叉 给 药 进 行 氯 雷 他 定 片 的 生 物 利 用 度 评 价 。 结 果 : HPLC 测 定 的 线 性 范 围 为 0. 2 30ng ml - 1 ;最 低 检 测浓 度 为 0. 1ng ml - 1 ;方 法 回 收 率 为 97. 39 % 103. 96 %。 人 体 生 物 利 用 度 试 验 结 果 表 明 ,试 验 片 与 对 照 片 间 的 A UC , tmax ,cmax 和 t1/ 2 无 显 著 性 差 异 ( P 0. 05) ,相 对 生 物
6、 利 用 度 为 (105. 60 20. 76) %( n = 12) 。 A UC 经 单 双 侧 t 检 验 示 为 生 物 等 效 。结 论 :两 种 制 剂 生 物 等 效 。关 键 词 氯 雷 他 定 ;生 物 利 用 度 ;高 效 液 相 色 谱 法Determination of loratadine in human plasma by a sensitive HPLC method and evaluation of its bioavailabilityJiang Zhiqiang (Jiang ZQ) ,Jiang Xinguo (Jiang XG) , Xi Nian
7、zhu ( Xi NZ) , et al ( Division of Biopharm aceutics ,School of Pharm acy , S hanghai Medical U niversity , S hanghai200032)ABSTRACT OBJECTIVE :To establish a sensitve HPLC method for the determination of loratadine in plasma and to evaluate itsbioavailability. METHODS :A HPLC system consisted of a
8、Bondapak C18 column and a mobile phase of methanol2acetone20. 01molL - 1 phosphate buffer (p H7. 5) (35 35 30) . The detector was set to 275nm. Naphthozoline hydrochloride was selected as an internalstandard. A crossover relative bioavilability study for two loratadine tablets was carried out in 12
9、healthy volunteers. RESULTS :TheHPLC method had a linearity over the range of 0. 2 30ng ml - 1 . The limit of quantity was 0. 1ng ml - 1 . The average recoveries var2ied from 97. 39 % 103. 96 %. The results showed that A UC , cmax , tmax and t1/ 2 of two formulations had no significant difference (
10、P 0. 05) . Relative bioavailability was (105. 60 20. 76) % ( n = 12) . CONCL USION :Two formulations of loratadine were bioequiva2lent.KEY WORDS loratadine ,bioavailability ,HPLC氯 雷 他 定 是 一 种 三 环 类 抗 组 胺 药 物 ,通 过 选 择性 拮 抗 外 周 H1 受 体 而 起 作 用 ,几 乎 没 有 明 显 的 神经 系 统 副 作 用 ,可 有 效 治 疗 季 节 性 、 慢 性 鼻 炎 和 荨
11、麻症 1 3 。 氯 雷 他 定 的 血 药 浓 度 测 定 方 法 国 外 已 有文 献 报 道 ,如 采 用 放 射 免 疫 法 、 气 相 色 谱 法 4 及 用化 学 发 光 检 测 器 的 HPLC5 等 。 应 用 HPLC 测 定 时其 最 低 检 测 浓 度 为 0. 5ng ml - 1 。 本 研 究 建 立 灵 敏的 氯 雷 他 定 血 药 浓 度 HPLC 测 定 方 法 并 对 其 人 体内 药 代 动 力 学 进 行 研 究 ,可 为 该 药 物 的 血 药 浓 度 监测 和 临 床 应 用 提 供 参 考 。1 材 料 与 方 法1. 1 材 料试 验 片 :氯
12、雷 他 定 片 (10mg ,批 号 : CI26D2RxFI201 ,上 海 A 药 厂 ) ;对 照 片 : Clarityne ( 10mg ,批 号 :93E1217 ,美 国 B 药 厂 ) ;氯 雷 他 定 标 准 品 (上 海 A 药厂 ) ;内 标 (盐 酸 萘 唑 啉 ,上 海 C 药 厂 ) ;其 它 溶 剂 为光 学 纯 或 分 析 纯 。1. 2 色 谱 条 件757中 国 药 学 杂 志 1999 年 11 月 第 34 卷 第 11 期 Chin Pharm J , 1999 November , V ol . 34 No. 11 1994-2010 China A
13、cademic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http:/岛 津 LC - 10A 高 效 液 相 色 谱 仪 ; 色 谱 柱(416mm 300mm) ;固 定 相 : Bondapak C18 (10 l) ;流 动 相 :甲 醇 2乙 腈 20. 01mol L - 1磷 酸 氢 二 钾 (35 35 30 ,以 磷 酸 调 p H 至 7. 5 ;流 速 :2ml min - 1 ;检 测 波长 :275nm ;柱 温 :50 ) 。1. 3 血 样 的 测 定 方 法取 血 样 1. 0ml ,精
14、密 加 入 内 标 溶 液 ( 0. 5 gml - 1) 50 l ,混 合 后 加 入 1mol L - 1 氢 氧 化 钠 溶 液011ml ,加 入 甲 基 叔 丁 基 醚 2正 己 烷 (1 1) 3ml ,漩 涡 混合 5min ,离 心 4000r min - 1 10min ,取 上 清 液 (有 机层 ) ,水 层 用 2ml 甲 基 叔 丁 基 醚 2正 己 烷 (1 1) 同 上 再提 取 一 次 ,合 并 有 机 层 ,置 离 心 管 中 加 入 1. 0molL - 1盐 酸 溶 液 3 ml ,漩 涡 混 合 、 离 心 取 水 层 ,加 入 10mol L - 1
15、氢 氧 化 钠 溶 液 0. 5ml ,摇 匀 ,加 入 甲 基 叔 丁基 醚 2正 己 烷 (1 1) 3ml ,振 摇 3min ,离 心 10min ,取 上清 液 ,60 水 浴 中 氮 气 吹 干 。 残 渣 加 流 动 相 50 l ,漩涡 振 摇 1min ,高 速 离 心 12000r min - 110min ,取 上 清液 20 l 作 HPLC 分 析 。2 结 果2. 1 HPLC 测 定 方 法 评 价2. 1. 1 线 性 范 围 取 空 白 血 浆 1. 0ml ,精 密 加 入 一定 量 的 氯 雷 他 定 标 准 溶 液 ,使 血 浆 中 氯 雷 他 定 的
16、浓度 分 别 为 30 ,15 ,10 ,5 ,2 ,0. 5 和 0. 2ng ml - 1 。 分 别加 入 内 标 溶 液 50 l ,以 下 同 血 样 预 处 理 项 下 方 法 处理 后 作 HPLC 分 析 。 以 血 浆 中 氯 雷 他 定 浓 度 ( X) 对氯 雷 他 定 与 内 标 的 峰 面 积 比 ( Y) 作 线 性 回 归 ,回 归方 程 为 : Y = 0. 09931 + 0. 03630 X ( r = 0. 9964) 。HPLC测 定 血 浆 氯 雷 他 定 浓 度 方 法 的 线 性 范 围 为0. 2 30ng ml - 1 。 最 低 检 测 浓
17、度 为 0. 1ng ml - 1 。2. 1. 2 方 法 回 收 率 取 1. 0ml 空 白 血 浆 数 管 ,定 量加 入 氯 雷 他 定 标 准 液 ,使 其 浓 度 分 别 为 2 ,10 ,30ngml - 1 。 按 血 样 测 定 方 法 进 行 HPLC 分 析 。 测 定 值除 以 理 论 值 即 为 本 测 定 方 法 回 收 率 。 结 果 见 表 1。表 1 HPLC 测 定 氯 雷 他 定 血 药 浓 度 回 收 率 . x s , n = 5理 论 浓 度 / ng ml - 1 测 定 浓 度 / ng ml - 1 方 法 回 收 率 / %2. 03 1.
18、 9771 0. 0490 97. 3910. 16 10. 5623 0. 2155 103. 9630. 48 30. 8153 1. 4237 101. 102. 1. 3 精 密 度 取 1. 0ml 空 白 血 浆 数 管 ,定 量 加 入氯 雷 他 定 标 准 液 ,使 氯 雷 他 定 浓 度 分 别 为 2 , 10 ,30ng ml - 1 。 按 血 样 测 定 方 法 进 行 HPLC 分 析 。 第1 天 测 定 5 份 ,以 后 每 天 测 定 3 份 ,共 测 定 5d。 统 计第 1 天 以 及 5d 内 测 定 数 据 的 相 对 标 准 偏 差( RS D) %
19、 ,以 评 价 测 定 方 法 的 日 内 精 密 度 和 日 间 精密 度 。 结 果 见 表 2。表 2 血 浆 中 氯 雷 他 定 HPLC 测 定 的 精 密 度 . x s , n = 5理 论 浓 度 / ng ml - 1 测 定 浓 度 / ng ml - 1 RSD/ %日 内 精 密 度 2. 03 1. 9771 0. 0490 2. 4810. 16 10. 5623 0. 2155 2. 0430. 48 30. 8153 1. 4237 4. 62日 间 精 密 度 2. 03 2. 2406 0. 2160 9. 6410. 16 11. 1293 0. 4863
20、 4. 3730. 48 31. 7728 1. 3662 4. 302. 1. 4 HPLC 测 定 氯 雷 他 定 血 药 浓 度 血 浆 杂 质对 测 定 无 干 扰 。 见 图 1。图 1 氯 雷 他 定 血 药 浓 度 测 定 图 谱a 空 白 血 浆 的 HPLC图 谱 ; b 血 样 测 定 的 HPLC 图 谱 ;A 内 标 (盐 酸 萘 唑啉 )保 留 时 间 约 6. 460min ;B 样 品 (氯 雷 他 定 )保 留 时 间 约 2. 999min2. 2 人 体 生 物 利 用 度男 性 健 康 志 愿 受 试 者 12 名 ,年 龄 (21. 5 1. 2)岁 ,
21、体 重 (62. 3 6. 4) kg ;身 高 ( 175. 4 6. 1) cm。肝 、 肾 功 能 和 心 电 图 均 正 常 。 受 试 者 随 机 分 成 两 组 。分 别 po 试 验 片 或 对 照 片 各 40mg ,1 周 后 交 叉 。 受试 者 在 试 验 前 1d 晚 餐 后 禁 食 。 服 药 4h 后 进 统 一 低脂 肪 餐 ,试 验 期 间 禁 烟 、 酒 和 茶 ,并 禁 服 任 何 其 它 药物 。 服 药 前 取 空 白 血 ,服 药 后 在 0. 25 ,0. 5 ,0. 75 ,1 ,1. 5 ,2 ,3 ,4 ,6 ,8 和 10h 取 静 脉 血
22、3ml 于 含 肝 素 钠 的洁 净 试 管 中 ,离 心 取 血 浆 ,依 血 样 测 定 方 法 测 定 血 浆中 药 物 浓 度 。 12 个 志 愿 者 体 内 经 时 血 药 浓 度 平 均数 据 见 表 3。 受 试 者 服 用 氯 雷 他 定 试 验 片 或 对 照 片后 的 血 药 浓 度 平 均 数 据 经 时 曲 线 几 乎 重 叠 。表 3 氯 雷 他 定 片 po 后 经 2时 血 药 浓 度 数 据 . x s , n = 12取 血 时 间 / h 试 验 片 / ng ml - 1 对 照 片 / ng ml - 10. 25 0. 3878 0. 2805 0.
23、 3726 0. 09740. 5 5. 6604 1. 9432 5. 9630 2. 10010. 75 14. 3017 1. 4857 13. 9408 3. 70551 21. 7450 3. 1028 22. 4051 2. 58891. 5 22. 0025 3. 6308 21. 6475 2. 99992 16. 0825 2. 0659 15. 9317 1. 10423 8. 5999 2. 6197 7. 9043 1. 21294 3. 0379 2. 0031 3. 5480 1. 77946 1. 1052 0. 7489 1. 6093 1. 24318 0.
24、4826 0. 4587 0. 4732 0. 457610 0. 3459 0. 2748 0. 2757 0. 1379受 试 者 的 血 药 浓 度 经 时 数 据 经 3P87 软 件 处857 Chin Pharm J , 1999 November , V ol . 34 No. 11 中 国 药 学 杂 志 1999 年 11 月 第 34 卷 第 11 期 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http:/理 ,数 据 符 合 二 室 模 型 。 主
25、要 药 动 学 参 数 见 表 4。表 4 受 试 者 服 用 氯 雷 他 定 后 的 药 代 动 力 学 主 要 参 数 . x s , n = 12试 验 片 对 照 片 相 对 生 物 利 用 度cmax/ ng ml - 1 21. 69 1. 50 22. 04 2. 04tmax/ h 1. 20 0. 09 1. 22 0. 08t1/ 2 / h 1. 09 0. 40 0. 97 0. 45A UC/ ng h ml - 1 53. 57 9. 62 50. 97 4. 04105. 60 % 20. 76 %表 中 数 据 经 交 叉 试 验 方 差 分 析 ,试 验 片
26、与 对 照片 相 比 , cmax , tmax和 A U C 均 无 显 著 性 差 异 ( P 0105) 。 A U C 经 单 双 侧 t 检 验 示 为 生 物 等 效 。 平 均相 对 生 物 利 用 度 为 (105. 60 20. 76) %。3 讨 论本 研 究 建 立 的 HPLC 只 需 1ml 血 浆 即 可 测 定血 浆 中 氯 雷 他 定 的 浓 度 ,与 文 献 报 道 的 RIA 和HPLC 测 定 氯 雷 他 定 血 药 浓 度 需 2ml 血 浆 相 比 可 使取 血 量 减 少 一 半 。 因 此 ,本 方 法 用 于 测 定 氯 雷 他 定血 药 浓 度
27、 时 ,适 用 性 强 。 同 时 ,建 立 的 测 定 方 法 血 药浓 度 从 0. 2 30ng ml - 1 范 围 内 线 性 良 好 ( r =019964) 。 最 低 检 测 浓 度 为 0. 1ng ml - 1 。 优 于 文 献报 道 的 HPLC 测 定 最 低 检 测 浓 度 为 015ng ml - 1 。该 HPLC 是 一 种 快 速 测 定 氯 雷 他 定 血 药 浓 度 的 有效 方 法 ,适 合 于 生 物 利 用 度 研 究 和 临 床 血 药 浓 度 监测 。试 验 片 和 对 照 片 的 主 要 药 代 动 力 学 参 数 之 间 无显 著 性 差
28、异 ( P 0. 05 ) 。 相 对 生 物 利 用 度 为105160 % 20. 76 %( n = 12) 。 同 时 A U C 经 单 双 侧t 检 验 示 :试 验 片 和 对 照 片 为 生 物 等 效 。参 考 文 献1 Batenhorst R ,Batenhorst A , Graves D , et al . Pharmacologic evalu2ation of loratadine ( SCH 29851) ,chlorpheniramine and placebo.Eur J Clin Pharmacol ,1986 ,31 :247.2 Barnett A ,
29、 Iorio LC , Kreutner S , et al . Evaluation of the CNSproperties of SCH 29851 , a potential non2sedating antihistadine.A gents Actions ,1984 ,14 :590.3 Hibert J , Radwanski E , Weglein R , et al . Pharmacokinetics anddose proportionality of loratadine. J Clin Pharmacol , 1987 , 27 :694.4 Johnson R ,
30、Christensen J ,Lin CC. Sensitive gas2liquid chromatogr2phic method for the determination of loratadine and its major activemetabolite ,descarboethoxyloratadine ,in human plsasma using a ni2trogen2phosphorus detector. J Chromatogr B ,1994 ,657 :125.5 Holeman JA , Danielson ND. Liquid chromatography o
31、f antihis2tamines using post2column tris ( 2 , 2 2bipyridine ) ruthenium chemiluminescence detection. J Chromatogr A ,1994 ,679 :277.(收 稿 :1997211203)色 满 卡 林 和 舒 喘 灵 在 体 内 外 舒 张 支 气 管 作 用 比 较罗 雅 玲 彭 道 波 段 娥 英 刘 久 山 古 秀 萍 (广 州 510515 第 一 军 医 大 学 南 方 医 院 呼 吸 科 )摘 要 目 的 :证 实 色 满 卡 林 (cromakalim)可 治 疗 哮
32、 喘 ,比 较 色 满 卡 林 和 舒 喘 灵 在 体 内 外 的 支 气 管 舒 张 作 用 。 方 法 :研 究 了 色 满卡 林 和 舒 喘 灵 在 人 离 体 气 管 平 滑 肌 的 松 弛 效 能 和 吸 入 色 满 卡 林 和 舒 喘 灵 对 哮 喘 患 者 气 道 的 舒 张 作 用 。 结 果 :在 人 离 体 气 管平 滑 肌 ,色 满 卡 林 和 舒 喘 灵 对 组 胺 或 前 列 腺 素 F2 引 起 的 收 缩 产 生 的 舒 张 反 应 没 有 显 著 差 异 ( P 0. 05) ,但 对 乙 酰 胆 碱 引 起 的收 缩 产 生 的 舒 张 反 应 有 显 著 差
33、 异 ( P 0. 05) ,but significantlydifferent for acetylcholine ( P 0. 01) . Cromakalim and salbutamol were able to produce an additional relaxation response. After inhal2ing Cromakalim and salbutamol ,FEV 1 ,V50 and PD20 of 16asthmatics rose significantly ( P 0. 01) . The changes of PD20 showed sig2nificant correlation ( r = 0. 87 , P 0. 01) . CONCL USION :Cromakalim represents a new drug that may have a useful clinical applica2tion in the treatment of asthma.957中 国 药 学 杂 志 1999 年 11 月 第 34 卷 第 11 期 Chin Pharm J , 1999 November , V ol . 34 No. 11
