1、 甘肃省临床检验中心 电泳技术及其在医学中的应用 常若云 1.原理： 血清蛋白电泳是临床实验室了解血清蛋白质全貌的筛选试验。本试验是以一定浓度的琼脂糖凝胶作为介质，基于区带电泳技术的原理，在特定的 PH下，依据不同血清蛋白质带电荷的不同，将血清蛋白质分成主要的五个区带：白蛋白（ ALB）、 1 球蛋白、 2 球蛋白、 球蛋白和 球蛋白，每个蛋白区带包括有一种或多种血清 蛋白质。血清蛋白电泳测定的各组分的量，通常采用各区带的浓度百分比表示。 血清蛋白电泳原理_ _ _加样点 碱性缓冲液介质负电荷蛋白质在碱性缓冲液中+阴极-阳极_ _ _gba2A l bu m i na1 : Or os omu
2、 c oi d, a 1 A n t i t ry ps i n: Hap t o g l o b i n, a2 M ac r o g l o b ul i n, a L i p o p r o t e i n,Ce r ul o p l as m i n: T r ans fer r i n, Hem o p e x i n, C3 Co m p l e m e nt , b L i p o p r o t e i n: I m m u n ogl obu l i n sSer u m pr o t e i n fr acti o n s蛋白质分离方式固体或液体介质 琼脂糖凝胶是现今最常用
3、的固体介质。 液体介质常用在毛细管电泳技术。分析步骤 准备胶片。 加血清样品。 蛋白质在电场下迁移被分离。 染色，脱色 密度测定不同的分析类型 手工操作 凝胶电泳半自动技术 毛细管电泳全自动技术2.标本的采集和处理 非抗凝试管收集静脉血，分离得新鲜血清，不能及时检测的标本可及时存放于 28 保存一周以内，冻存的标本可保存至少一月，冻存时如用 0.02g/dL的叠氮钠可提高保存的稳定性。 注： 保存时避免硼酸；避免溶血标本，溶血可抬高 2和 区带；避免血浆标本，纤维蛋白原条带可被误认为一单克隆免疫球蛋白并抵消相应区带的百分比。复融时由于标本蛋白质和脂蛋白的降解可出现微小条带，在2 8 保存或冻存
4、的标本中 脂蛋白的阳性电荷从 区带向 2或 1区带转移，时间越长转移越多。 3.试剂： 本实验室各种试剂均购与法国 SEBIA公司 琼脂糖凝胶胶片 缓冲条 氨基黑染液 加样梳 薄滤纸 脱色液 冲洗液 毛细管电泳原理加热桥T e m p e r a t u r e co n t r o l l e dby P el t i er el em en t s阳极 +阴极 -监测器 氘灯迁移高电压是采用 8根毛细管通道并行运作，快速电泳分离的全自动、多任务处理的毛细管电泳分离系统。从样品识别、样品稀释、毛细管冲洗、样品进样、电泳、检测、结果处理和网络传输等全部自动化完成。 电泳技术在临检医学中的应用
5、肝脏疾病： 肝硬化 造血系统疾病 : 多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症 中枢神经系统疾病 : 多发性硬化症 遗传性疾病 : 地中海贫血 代谢性疾病 : 糖尿病 心血管疾病 : 心梗、动脉粥样硬化 肾脏疾病： 尿蛋白来源 15/30人份血清蛋白电泳 5.操作 ： 首先将标本血清 10uL用加样器加于加样梳小孔内， 2分钟内加完，加样梳齿向上保湿 5分钟。打开仪器电泳仓，抬起电极悬挂缓冲条；电泳底板加 200uL蒸馏水，平铺凝胶于底板上；将保湿好的加样梳去除齿后置于加样梳架的特定位，盖上电泳仓。 键板上选择 PROTEN15 30或其他电泳程序，确定并按开始键。约 20分钟，电泳仪发出鸣叫，键板显示屏温
6、度显示并停滞于50 时表明电泳已结束。 打开电泳仓取出加样梳和缓冲带并丢弃，取出已烘干的凝胶胶片。从染色仓中取出胶片架，将胶片固定于染色架上并置于染色仓内；键板上选定染色程序确定并开始。灯变绿表示染脱色已完成，取出胶片在扫描仪进行扫描，电脑进行条带分析，完成报告。 6.参考值： 白蛋白 60.3 71.4 1 球蛋白 1.4 2.9 2 球蛋白 7.0 11.0 球蛋白 8.0 13.0 球蛋白 9.0 16.0 7.临床意义 肝脏疾病：急性及轻症肝炎时电泳结果多无异常，慢性肝炎、肝硬化、肝细胞肝癌（常合并肝硬化），白蛋白减少、 1、 2、 球蛋白也有减少倾向； 球蛋白增加，在慢性活动性肝炎和
7、失代偿的肝炎后肝硬化增加尤为明显。 M蛋白血症：如骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症等，白蛋白轻度减低，单克隆 球蛋白明显升高，亦有 球蛋白升高，偶有 球蛋白升高。大部分病人在 区带、 区带或 与 区带之间可见结构均一，基地窄峰高尖的 M蛋白。 肾病综合征、糖尿病肾病：由于血脂增高，可致 2和 球蛋白（是脂蛋白的主要成分）增高，白蛋白及 球蛋白降低。 其他：结缔组织病伴有多克隆 球蛋白增高，先天性低丙种球蛋白血症 球蛋白降低，蛋白丢失性肠病表现为白蛋白及 球蛋白降低， 2球蛋白则增高。 Wilson病 Wilson病即肝豆状核变性 :是一种常染色体隐性遗传病 ,因血浆 CER减少 ,游离铜增加 ,游离铜沉积在肝可引起肝硬化 ,沉积在脑基底节的豆状核则导致豆状核变性 . 实验室检查： CER含量明显下降，血铜降低 ,尿铜增加。 溶血样本单克隆 M 蛋白血症
