1、输血科试验操作规程一、血型血清学检查的操作规程（一） ABO+RH 血型鉴定常规方法1试剂：单克隆或多克隆抗 A、抗 B 试剂，RhD(IgM)血型单克隆抗体定型试剂，2-5%的反定红细胞悬液2.操作步骤：（1）将病人标本离心（2）反定型：取两只试管分别标明 A、B，加入相应的反定细胞各 1 滴，加入病人的血浆 1 滴，离心（3）将玻片用红蜡笔划分为 3 个区域，各加一滴待测标本红细胞，分别滴加抗A、抗 B、RhD 试剂，轻轻晃动观察结果（4）结果：有凝集为阳性。无凝集无溶血为阴性。正反定型对照得出结果（二）ABO+RH 血型鉴定（卡氏法）操作1.试剂：Ortho Biovue ABO-Rh
2、正反定型血型试剂卡友 6 个微柱组成，每一柱中含有缓冲液，其成分为牛血清蛋白、大分子增强剂以及 0.1%叠氮钠和0.01M 的 EDTA。2.操作步骤：（1）配置 0.8%的反定细胞（一般配成约 1.5%）（2）将试剂卡编号，并打开试剂卡（3）将病人血标本离心（4）将 50ul 的反定细胞 A、B 加入到相应反应腔中（5 号 6 号柱） ，加入50ul 的病人血清。（5）取 50ul 的病人压积红细胞加入 1ml 的盐水中配成 5%的红细胞悬液，分别加入前四柱 10ul 的 5%红细胞悬液。（6）离心，读取结果. 按照下表并结正反定型对照。得出结果报告 试验结果阴性 无溶血及红细胞未凝集1+
3、大部分凝集的红细胞停留在玻璃珠柱床的下半部分，柱的底部有一些红细胞2+ 发生凝集的红细胞分布于整个玻璃珠床，柱的底部有少量的细胞3+ 发生凝集的大部分红细胞玻璃珠床的上半部分4+ 红细胞在柱中玻璃珠的上面凝集，并形成一个环形带（二）改良凝聚胺技术交叉配血试验一.主要组成成份：R1：低离子介质、R2：凝聚胺、R3：假凝集清除液。二.步骤：1. 复检供血者、受血者血型2. 主侧管加入供血者 3%-4%的红细胞悬液 1 滴，加入受血者血清 1 滴或 2 滴3. 次侧管加入受血者 3%-4%的红细胞悬液 1 滴，加入供血者血清 1 滴或 2 滴4. 加低离子介质 3 滴，混匀，静置 30 秒，各管加凝
4、聚胺 1 滴，混匀，3500r/min 离心 15 秒，倒出上清液（残留约 0.1ml）,扣摇，肉眼可见明显的凝集状（如无凝集须重做） ，加假凝集清除液 1 滴于管底，轻摇，凝集1min 内消失呈均匀混悬液，为阴性，凝集 1min 内不能被消除，即为阳性。三.结论：阳性表示受（供）血者红细胞血型抗原相应的抗体（IgG 或 IgM）不相容，阴性表示供受血者相容。（三）卡式交叉配血试验一、工作准备：1.生理盐水2.0.8%-1%样本红细胞配备：10ul 样本压积红细胞加入 1ml 的生理盐水中二.操作步骤：1.1 号管中（主侧）加入 50ul 供血者 1%红细胞悬液， 25ul 受血者血浆或血清。
5、2.2 号管中（次侧）加入 50ul 受血者 1%红细胞悬液， 25ul 供血者血浆或血清。3.37孵育 15min4.离心 5min，判断结果，记录注：1+ 至 4+为抗人球配血不成功， -（0）为配血成功(四）抗体效价测定操作规程操作步骤：一IgG 类1、IgG 类抗体效价滴定，须取适量血清 200ul 加等体积 2Me 溶液混合，封口，置 37水浴箱作用 60 分钟，先稀释血清：200l 病人血清600l 生理盐水备用排列 6 支试管按顺序编号。第二管开始加样枪各加加生理盐水 200，在第一管和第二管中各加入稀释血清 200l，第二管混匀后移出 200l 转至第 3 管，以同样操作稀释至
6、第 6 管，从第 6 管吸出 200l 暂时保留在另一试管中（可作为第7 管） ，以备必要时作进一步稀释。这样从第一管到第 6 管的血清稀释度依次是18，116，1：32，1：64，1：128，1：256；2、加红细胞悬液（自配红细胞悬液同反定型试剂） 每管各加 2%相应红细胞悬液 200l，混匀。 （如待检血清抗体为抗 A，则加入 A 型标准红细胞悬液；如待检血清抗体为抗 B，则加入 B 型标准红细胞悬液；如待检血清中既有抗 A 又有抗 B，则倍量稀释两份血清，一份加入 A 型标准红细胞悬液，另一份加入 B型标准红细胞悬液；3.先直接离心观察结果，之后再每管分别加入凝聚胺试剂盒中的 R1 液
7、 3d，混合 30 S 均匀后，再各加 R2 溶液 1 滴，并混合均匀，离心后再加 R3 液 2 滴，操作方法同凝聚胺交叉配血法，然后判读结果。通常以肉眼观察到的第一个“”的凝集管作为判断的终点，终点血清稀释度的倒数为效价（Titer） ，或称滴度。二 IGM1、 血清连续倍量稀释法 先稀释血清：100l 病人血清700l 生理盐水备用，排列 6 支试管按顺序编号。第二管开始到第六管加样枪各加加生理盐水200ul，从第一管和第二管中各加入稀释血清 200l，第二管混匀后移出 200l转至第 3 管，以同样操作稀释至第 6 管，从第 6 管吸出 200l 暂时保留在另一试管中（可作为第 7 管）
8、 ，以备必要时作进一步稀释。这样从第一管到第 6 管的血清稀释度依次是 18，116，1：32，1：64，1：128，1：256；2、 加红细胞悬液（自配红细胞悬液同反定型试剂） 每管各加 2%相应红细胞悬液 200l，混匀。 （如待检血清抗体为抗 A，则加入 A 型标准红细胞悬液；如待检血清抗体为抗 B，则加入 B 型标准红细胞悬液；如待检血清中既有抗 A 又有抗 B，则倍量稀释两份血清，一份加入 A 型标准红细胞悬液，另一份加入 B型标准红细胞悬液；此为 IgM 类盐水抗体可立即离心后观察。（五）新生儿溶血病检查新生儿溶血病的检测主要有三项试验：直接抗人球蛋白试验、游离抗体试验和抗体释放试
9、验，步骤：1.将患儿标本离心2.直接抗人球蛋白试验 取 10ul 的压积红细胞加入 1ml 生理盐水中配成 1%的红细胞悬液，混匀后取 50ul 加入抗人球蛋白卡中，离心，观察结果。3.游离抗体试验 取患儿血浆 25ul 加入与患儿同型 2%的红细胞 50ul，混匀后取 50ul 加入抗人球蛋白卡中，37孵育 30min,离心，观察结果。4.抗体释放试验 将患儿压积红细胞洗涤 3-5 次，取 0.5ml 加入等量的生理盐水，56水浴震荡 10min 后立即 3500r/min 离心 1min，取 25ul 上清液，加入与患儿同型的红细胞 50ul，混匀后取 50ul 加入抗人球蛋白卡中， 37
10、孵育30min，离心，观察结果。4 结果观察报告 试验结果阴性 无溶血及红细胞未凝集1+ 大部分凝集的红细胞停留在玻璃珠柱床的下半部分，柱的底部有一些红细胞2+ 发生凝集的红细胞分布于整个玻璃珠床，柱的底部有少量的细胞3+ 发生凝集的大部分红细胞玻璃珠床的上半部分4+ 红细胞在柱中玻璃珠的上面凝集，并形成一个环形带（六）不规则抗体检查一概述：不规则抗体检查也称红细胞抗体检查。所谓不规则抗体是抗 、抗 以外的血型抗体，其多为抗体。主要是经输血或妊娠等免疫刺激产生,在盐水介质中不能凝集而只能致敏相应抗原的红细胞,必须通过特殊介质(酶、抗人球蛋白、等),才能使致敏红细胞出现凝集反应。虽然不规则抗体筛
11、选阳性率较低，但是该项阳性的患者一旦输入具有相应抗原的红细胞,抗原、抗体发生免疫性结合，补体的参与下,使输入的红细胞发生溶解,即发生溶血性输血反应。患者出现发热、贫血、黄疸和血红蛋白尿,严重时甚至危及其生命。因此,在输血中要经常警惕这种输血反应发生的可能性。当不规则抗体筛选阳性时,必须进一步作抗体鉴定,确定其特异性后,再输入无相应抗原的红细胞,才能达到安全输血之目的。不规则抗体是引起溶血性输血反应和新生儿溶血病的主要因素之一, 对输血发生溶血性反应所引起肾衰、死亡病例的诊断有临床意义。因此为了保证输血安全,提高输血疗效,减少或杜绝溶血性输血反应的发生,不规则抗体检查必须作为输血前检查的重要项目之一。二步骤：1.将待测标本离心.2.取 50ul、号筛选细胞（2%-3%浓度）分别加入抗人球蛋白卡中，加入待测血清 25ul,37孵育 15min,离心，观察结果三结果观察报告 试验结果阴性 无溶血及红细胞未凝集1+ 大部分凝集的红细胞停留在玻璃珠柱床的下半部分，柱的底部有一些红细胞2+ 发生凝集的红细胞分布于整个玻璃珠床，柱的底部有少量的细胞3+ 发生凝集的大部分红细胞玻璃珠床的上半部分4+ 红细胞在柱中玻璃珠的上面凝集，并形成一个环形带
