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实验五 SDS-PAGE蛋白质电泳准备实验.ppt

1、实验五 SDS-PAGE蛋白质电泳准备实验,-溶液的配置,实 验 内 容,一、变性蛋白质电泳系列溶液,1、单体母液 (第一小组) 25 ml丙烯酰胺 7.50 g甲叉双丙烯酰胺 0.20 g去离子水定容至25 ml ,定性中速滤纸过 滤,棕色试剂 瓶4存放。2、 10 (w/v) SDS (第一小组) 10mlSDS 1.0 g去离子水 10 ml,3、分离胶缓冲液(4,pH=8.80,25 ml)(第二小组) Tris-Base(1.5 mol/L) 4.54 g10(w/v)SDS 1 ml用20ml去离子水溶解,再用浓HCl调节pH到8.8,过滤,定容到25ml,4存放。,4、浓缩胶缓冲

2、液(4 ,pH=6.80,50 ml )(第二小组) Tris-Base(0.50 mol/L) 3.03 g10(w/v)SDS 2ml加去离子水40 ml溶解,用浓HCl调pH到6.80,定容到50ml,4存放。,5、10的过硫酸铵(1ml) (现配现用) (第三小组) 过硫酸铵 0.10 g去离子水1.00 ml,4密闭存放。6、电极缓冲液(pH=8.30) 500 ml(1) )(第三小组) Tris-Base 1.5g甘氨酸 6.25 gSDS (10%) 2.5ml去离子水溶解。,7、样品缓冲液储液(2 )(第四小组) 2.5 ml浓缩胶缓冲液(4) 1.25 mlSDS(固体干粉) 0.1 g甘油 0. 5 ml溴酚兰 1 mg加去离子水0.75ml 溶解,加50ul巯基乙醇,室温保存。8、染色液 400ml考马斯亮兰R250 1.0 g甲醇 182ml冰醋酸 36.8 ml水 182 ml,9、脱色液(第四组) 500 ml甲醇 228.00 ml 冰醋酸 36.00 ml水 236.00 ml,表3 分离胶的配制 Table 3 The confect of separating gel,表4 浓缩胶的配制备 Table 4 The confect of concentrating gel,

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