1、蛋白保存 方法 蛋白保存应根据对活性的要求及蛋白的种类而定：抗体 :除非一些公司特别要求 -20冻存，一般 4可稳定一年（无菌，如加叠氮钠），因为抗体是一种具有非常稳定结构的蛋白；要求具有活性的蛋白 ,最好根据需要小量保存 4 (一周）、 -20 (一个月 )、 -80 (六个月 )、液氮（基本无限期），反复冻融会导致诸多不良后果，如聚集、修饰、降解、污染等（取决于蛋白浓度、缓冲液成分及蛋白本身的特点）；冻干是一种很好的长期保存法（如条件具备），在大多数情况下可以很好地保存蛋白的活性，但不适于某些蛋白（因有些蛋白对冻干重溶时必然产生的盐 离子浓度的急剧变化反应不佳，其活性会永久丧失（应具体对待
2、，尚无规律可循）。 另：蛋白聚集与二硫键形成是两个概念，巯基乙醇只负责维持 -SH的游离状态，形成二硫键是一化学反应，产生纯净物，聚集一般只通过一些离子键、范德华力、疏水力形成，可以用物理方法分开。 较长时间的保存最好用 DTT。在加入缓冲液中 24 小时内，巯基乙醇被氧化，其后可加速蛋白的失活，而 DTT不危及蛋白质的巯基。因此，最好是在制备蛋白质样品的时候用大约 12mmol/L 巯基乙醇，而长期储存则使用 1-5mmol/L 的DTT。（见蛋白质技术手册） 另外，我有印象看产品目录的时候，看到有一种用于 western 的试剂盒，提供的试剂可以在还原二硫键之后在巯 基上烷基化，这样就防止
3、了二硫键的再次生成。 抗体储存容器应由不吸附蛋白质的 材料制成，常用的有聚丙烯，聚碳酸酯和硼硅酸玻璃。如储存的抗体中蛋白浓度很低（ 10-100Mg/L），就应另加隔离蛋白以减少容器对抗体蛋白的吸附，隔离蛋白常用 0.1%-1.0%的牛血清白蛋白。 绝大多数已稀释的抗体应存在 4 -8条件下，以免冻融对抗体蛋白产生有害效应。抗体原液和已分离的免疫球蛋白组分应保存于 -20条件下，并避免反复冻融。冷冻的抗体溶液应置于室温中缓慢地解冻，应绝对避免用高温快速解冻。 被细菌污染的抗体常会出现假阳性结果，应将污染的抗体溶液及其他试剂弃之。为防止细 菌污染，可于抗体溶液中加入 0.01%叠氮钠。抗体经真空
4、冷冻干燥后置 -20以下可保存 3-5年。 保存稀释后的单抗应加入 0.1%叠氮钠浓度。大多数稀释抗体可进行冷冻保存，少数抗体可能会丢失抗原活性。大多数单抗，只要蛋白浓度适当，可在 4下保存数月。 其他注意事项： 分装可以最大程度的降低反复冻融对抗体活性的损害，同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体造成的污染可能性。分装的量以一次实验用完为好，最少不能少于 10ul 每份。因为分装体积越小 ，抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响。 复融后的分装抗体如果一次用不完，将剩余母液保存在 4 ，避免再冻起来！ 抗体工作液应该当天配制当天用完，在 4 尽量不要超过 1天。绝对避免将抗体保存在自动
5、除霜冰箱中。尽量将抗体保存在冰箱里层，而不是门上。 无论是保存还是运输，绝对避免反复冻融！反复冻融会导致抗体变性，导致多聚体形成，从而降低抗体的结合能力！ 蛋白在高浓度时更不容易降解（ 1 mg/ml 或者更高），这就是为什么在抗体中加入 BSA之类作为稳定剂的原因了；另一方面，加入的蛋白也可以减少抗体由于管壁吸附所造成的损失。但是如果抗体要用来标记的话，则不能加入蛋白稳定剂，因为这些稳定剂会和抗体一起竞争结合标记物。 为了防止微生物污染，叠氮化钠经常被加入到抗体中（终浓度 0.02% (w/v)）。 叠氮化钠会干扰任何含有氨基基团的偶联，因此在进行偶联之前，应将叠氮化钠去除。偶联后的抗体可以加入叠氮化钠保存，但是浓度只能是 0.01。对于需要偶联的抗体， thimerosal (merthiolate)可以 替代叠氮化钠作为保护剂！ 注：叠氮化钠的去除方式： 可以通过凝胶电泳或过滤的方式去除！ IgG 的分子量是 150kDa (IgM 是 600kDa); 叠氮化钠的分子量只有 65Da。使用 cut off 14kDa的滤膜即可将叠氮化钠从抗体中去除。 纯化 IgG: 不要保存稀释的抗体 ,高浓度有利于保存。 IgG会粘附于玻璃或塑料，低于 0.1mg/ml的蛋白会很快被吸收并变性失去活性。
