1、,研究背景及意义 研究目标 研究内容 拟解决的关键问题 拟采用的研究方法 数据分析,研究背景及意义,阿尔茨海默病（Alzheimers disease,AD）俗称老年性痴呆，是一种以学习、记忆和注意力丧失，智力减退乃至完全痴呆为临床表现的神经系统退行性疾病。 近年来，随着老龄化社会的来临，AD发病率逐年增长，不仅严重影响老年人的寿命和生活质量，也给社会带来十分巨大的人力及财力负担。但是，AD的病因和发病机制迄今仍未彻底了解，更缺乏有效的治疗药物。,进一步研究NMDA受体亚基NR2A在AP影响下在在体海马LTD过程的作用将有助于进一步揭示AP的神经毒作用的具体机制，这将为保护神经元免受AP毒性伤
2、害提供可能的途径，并且为预防和治疗AD提供一定的理论基础。,研究目标,LTD的诱导和维持对AD的影响; NMDA受体亚基NR2A在大鼠在体海马长时程压抑过程中的作用; 进一步揭示AP的神经毒作用的具体机制,研究内容,（1）通过水迷宫测定在体海马LTD的诱导和维持对大鼠学习、记忆的影响.,（2）利用在体海马LTD测定技术观察： NR2A激动剂能否增强在体海马LTD的诱导和维持； NR2A抑制剂能否抑制在体海马LTD的诱导和维持； AP片段能否抑制在体海马LTD的诱导和维持； 同时给NR2A激动剂 和AP是否有保护海马神经元LTD免受AP毒性的作用； 同时给NR2A抑制剂和AP对LTD的抑制有无额
3、外的衰减。,(3) 利用在体海马双脉冲易化(paired-pulse facilitation,PPF)测定技术观察以上五项是否通过NR2A起作用。,拟解决的关键问题,.NR2A激动药和NR2A抑制药在体给药的剂量，时间及途径 . 离体海马脑片的电位记录的准确测定 .提高在体海马LTD诱导的阳性率,拟采用的研究方法,本研究课题采用电生理在体海马LTD及PPF测定技术进行，具体实验方法及技术路线包括： (1)动物准备(2)侧脑室导管埋置(3)电极安装和定位(4)刺激参数：刺激的频率为2 Hz,5串,串长60 s,串间隔60 s (5)脑室给药(6)记录指标及实验内容(7)实验分组及各组意义,用立
4、体定位方法安装刺激电极和记录电极。 电极尖端位置的最后确定：实验结束后，用直流电进行组织毁损，福尔马林固定，切片后在显微镜下观察。,雄性Wistar大鼠200-250g，25%乌拉坦1.5g/kg腹腔麻醉，实验中，动物体温保持于37-38之间。在脑立体定位仪上将动物固定后，颅骨钻孔，以埋植脑室导管和插入电极。,将刺激诱发的群集性兴奋性突触后电位（population excitatory postsynaptic potential,pEPSP）经记忆示波器放大观察并储存后，用XY绘图仪打印输出。 比较低频刺激前后诱发电位活动以确定LTD的产生； 脑室分别注射不同浓度A，观察对LTD及PPF的
5、影响； 脑室分别注射不同浓度兴奋剂和抑制剂，观察对LTD及PPF的影响； 脑室注射不同浓度兴奋剂对注射A后的LTD及PPF的影响； 脑室注射不同浓度抑制剂对注射A后的LTD及PPF的影响；,第一部分： 分组： 1.生理盐水对照组 2.NM2A激动剂实验组 3.AP实验组 4.AP+NM2A激动剂实验组 5.NM2A抑制剂实验组 6. AP+NM2A抑制剂实验组,各组比较的意义及预期结果： 1.和2.：观察不同浓度NM2A激动剂对LTD的影响。 1.和3.：观察AP对LTD诱导及维持的抑制作用。 3.和5.：观察AP和NM2A抑制剂对LTD的抑制作用是否具有类似的变化和动力学作用。 3.和4.：观察NM2R激动剂预处理能否使LTD免受AP的影响。 3.和6及5.和6： 观察AP和NM2A抑制剂对LTD的抑制作用是否叠加。,第二部分：分组及各组的比较同第一部分相似，只是指标换成了PPF，来验证NR2A激动剂能使LTD免受AP的毒性作用是否通过了突触前机制。,数据分析,统计LTD斜率（幅度）变化百分比作为纵坐标，时间为横坐标，观察AP、NR2A激动剂及NR2A抑制剂对LTD的影响；统计PPF二峰的比值的变化作为纵坐标，时间为横坐标，观察AP、 NR2A激动剂及NR2A抑制剂的作用。实验结果以MeanSD表示，以组间t检验作统计学处理，P0.05被认为有统计学差异。,
