1、实验三 蛋白质等电点测定,一、原理蛋白质是一种两性电解质。在溶液中存在下列平衡。其解离状态和程度爱溶液的pH值影响。当溶液的pH达到一定数值时，会导致蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，此时，蛋白质不移动，此时溶液的pH值称为该蛋白质的等电点。等电点时，其溶解度最小。,二、操作1. 取4支洁净的试管，按表顺序分别精确加入各试剂，然后混匀。2. 向上述试管中各加入酪蛋白的醋酸钠溶液1ml，随加随摇。观察其混浊度。静置10分钟后，再观察其混浊度。混浊度以的多少来表示。沉淀最多的一管即为酪蛋白的等电点。判断其等电点。,实验四 蛋白质的沉淀反应,一、原理在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层而成
2、为稳定的亲水胶体颗粒，具有胶体的所有性质。在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因推动电荷和脱水而沉淀。 可逆沉淀反应蛋白质分子的结构没有发生变化，仅因为表面的水化层和双电层遭到破坏而沉淀。如蛋白质的盐析作用和低温下乙醇的沉淀作用。除去影响因素，蛋白质又可恢复天然性质。 2. 不可逆沉淀反应影响因素除了破坏蛋白质的两外层之外，还使其内部结构发生了改变，这种沉淀在除去影响因素也不能再溶解于原来的溶剂中。蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在，并不析出。如蛋白质的结絮作用。,二、操作 蛋白质的盐析 不同浓度的盐析出不同的蛋白质。如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液
3、中析出。取一支试管：鸡蛋清液3ml+饱和硫酸铵液3ml，混匀后静置数分钟，观察现象并记录。然后倒出少量混浊液，加少量水，沉淀是否溶解，为什么？向管内添加硫酸铵粉末到不再溶解为止，又有何现象？加水，沉淀是否溶解？记录并解释。,2. 不可逆沉淀反应 重金属离子沉淀蛋白质 取1支试管，加鸡蛋清1ml+硝酸银液1滴，观察现象并记录。加水，沉淀溶解？解释。 有机酸沉淀蛋白质 取1支试管，加鸡蛋清2ml+三氯乙酸1ml，混匀，观察现象并记录。加水，沉淀溶解？为什么？ 乙醇引起的变性与沉淀 取三支试管，编号。按表加入试剂。混匀后，观察各管有何变化，记录现象。放置片刻后，向各管中加水8ml，然后在2、3号管中各加1滴甲基红，再分别用0.1M的醋酸和0.05M的碳酸钠中和。观察各管颜色变化和沉淀的生成并记录。每管再加0.1M的盐酸数滴，有何现象发生？记录并解释全部现象。,
