1、葡萄糖测定方法原理3,5-二硝基水杨酸（DNS）与还原性糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物，该物质在 520 nm 处有最大吸收峰，且在一定范围内吸收峰的强度（OD 值）与还原糖浓度成线性关系，利用比色法可测得样品的含糖量。该方法是半微量定糖法，操作简便，快速，杂质干扰少。试剂1）3, 5-二硝基水杨酸试剂（ DNS 试剂）甲液：溶解 6.9 g 苯酚于 15.2 mL 10% NaOH 中，并稀释至 69 mL，在此溶液中加入6.9 g NaHSO3；乙液：称取 255 g 酒石酸钾钠，加到 300 mL 10% NaOH 中，再加入 880 mL 1%的 3,5-二硝基水杨酸。甲、乙液混合
2、得黄色试剂，贮存于棕色瓶中，室温放置 7-10 天后备用。2）0.1%葡萄糖标准液（1 g/L）准确称取 100 mg 分析纯的葡萄糖（预先在 105干燥至恒重） ，加少量的蒸馏水溶解后定容至 100 ml，冰箱中保存备用。操作步骤2 mL 样品（稀释）+ 1.5 mL DNS 沸水浴 5 min 流水立即冷却至室温 定容至25 mL 520 nm 处检测 OD 值浓度范围0 0.5 g/L标准曲线葡萄糖母液 1 g/L：称取 1.1 g 葡萄糖，溶于 1000 mL 去离子水。反应体系：试管号项目0 1(0.1 g/L)2(0.2 g/L)3(0.3 g/L)4(0.4 g/L)5(0.5
3、g/L)DNS（mL） 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5葡萄糖母液（mL ）0 0.2 0.4 0.6 0.8 1水（mL） 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1注意事项1）考虑葡萄糖的结晶水；2）可以根据稀释倍数计算加入反应体系的样品量，不足的补水。3）OD 520 在 0.11.0 之间时，葡萄糖的浓度基本上与吸光值呈线性关系，超过该范围，则应当适当稀释。参考文献1 Miller G L. Use of dinitrosalicylic acid reagent for determination of reducing sugars J. Anal. Chem., 1959, 31: 426-428
