1、工作标准 编号：SOP-QC-000-1.0XXX 中药饮片有限公司 控制菌检查用培养基适用性检查操作规程执行日期：第 1 页 共 6 页1 目的建立一个控制菌检查用培养基检查操作程序。2 适用范围控制菌检查中用的培养基。检查项目包括培养基的促生长、指示和抑制特性能力。3 发放范围质量部4 职责5 内容5.1 菌种和菌液制备5.1.1 控制菌检查用培养适用性检查试验用菌株。大肠埃希菌（Escherichia coli) CMCC(B0 44102金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) CMCC(B0 26003乙型副伤寒沙门菌铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeru
2、ginosa) CMCC(B) 10104生孢梭菌(Clostridium sporgenes) CMCC(B) 64941白色念珠菌 Candida albicans) CMCC(B) 980015.1.2 将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、沙门菌分别接种于胰酪大豆胨液体培养基中或在胰酪大豆胨琼脂培养基上，30-35培养 18-24 小时，将白色念珠文件批准表职责 部门及职责 姓名 签名 日期起草 部相关部门审核QA 审核 质量管理部部门审核 部批准 质量负责人文件复审日期责 任 人 职 责质量部 负责起草执行该文件。工作标准 编号：SOP-QC-000-1.0XXX 中药饮片有限
3、公司 控制菌检查用培养基适用性检查操作规程执行日期：第 2 页 共 6 页菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上或沙氏葡萄糖液体培养基中，20-25培养 2-3 天，将生孢梭菌接捉于梭菌增菌培养基中置厌氧条件下 30-35培养 24-48 小时或接种于硫乙醇酸盐液体培养基中 30-35培养 18-24 小时。5.2 各种培养基需要测试的能力及判断指标5.2.1 液体培养基促生长能力检查，取不大于 100cfu 的试验菌分别接种于被检查培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及不大于规定的最短培养时间下培养。增菌培养基多澄清液体培养基，与对照培养基比较，被检查培养基中试验菌应生长良好，表现为
4、液体培养基浑浊。固体培养基促生长能力检查：取试验菌液（含菌数不大于 100cfu）分别涂布于被检查培养基和对照培养基上，在相应控制菌检查规定的培养温度及不大于规定的最短时间下培养，与对照培养基比较，被检查培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形态特征应一致。若被检查培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落数的比值应在50-200%，且菌落形态、大小与对照培养基上的菌落 一致，则判断该培养基的适用性检查促生长能力符合规定。5.2.2 培养基抑制能力检查：取不少于 100cfu 的试验菌分别接种于被检查培养基和对照培养基，在相应控制菌检查规定的培养温度及不不小于规定的最长培养基时间下培养，试验菌应不
5、得生长。5.2.3 液体培养基指示能力检查：取不大于 100cfu 的试验菌分别接种于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及不大于规定的最短培养时间下培养。与对照培养基比较，被检查培养基中试验菌应生长情况/指示剂反应等应与对照培养基一致。固体培养基指示能力检查：取试验菌液（含菌数不大于 100cfu）分别涂布于被检查培养基和对照培养基上，在相应控制菌检查规定的培养温度及不大于规定的时间下培养，与对照培养基比较，被检查培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形态特征、菌落颜色及指示剂反应等应一致。5.3 控制菌检查用培养基能力测试列表控制菌检查涉及的 14 种培养基特点各异味，表
6、中概述培养基检查的具体项目，具体操作在其后说明。工作标准 编号：SOP-QC-000-1.0XXX 中药饮片有限公司 控制菌检查用培养基适用性检查操作规程执行日期：第 3 页 共 6 页表 1 控制菌检查用培养基的促生长能力、抑制能力和指示特征控制菌的检查 培养基 特征 试验菌株促生长能力 大肠埃希菌、铜绿假单胞菌耐明盐革兰阴性菌肠道菌增菌液体培养基抑制能力 金黄色葡萄球菌紫红胆盐葡萄糖 琼脂培养基促生长能力+指示特征大肠埃希菌、铜绿假单胞菌促生长能力 大肠埃希菌大肠埃希菌 麦凯康液体培养基抑制能力 金黄色葡萄球菌麦凯康琼脂培养基 促生长能力+指示特征大肠埃希菌促生长能力 乙型副伤寒沙门菌RV
7、 沙门菌增菌液体培养基 抑制能力 金黄色葡萄球菌木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基促生长能力+指示特性乙型 副伤寒沙门菌三糖铁琼脂培养基 指示能力 乙型 副伤寒沙门菌促生长能力 铜绿假单胞菌溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基 抑制能力 大肠埃希菌促生长能力+指示特性金黄色葡萄球菌甘露醇氯化钠琼脂培养基抑制能力 大肠埃希菌梭菌增菌培养基 促生长能力 生孢梭菌哥伦比亚琼脂培养基 促生长能力 生孢梭菌沙氏葡萄糖液体培养基 促生长能力 白色念珠菌沙氏葡萄糖琼脂培养基 促生长能力+指示特性白色念珠菌念珠菌显色培养基 促生长能力+指示能力白色念珠菌工作标准 编号：SOP-QC-000-1.0XXX 中药饮片有限公司
8、 控制菌检查用培养基适用性检查操作规程执行日期：第 4 页 共 6 页抑制能力 大肠埃希菌5.4 控制菌培养基适用性检查的具体操作过程：5.4.6 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基：新鲜配制对照木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基，121灭菌 15 分钟，备用。取含沙门菌的 RV 沙门增菌液体培养物划线接种于木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基平板上 30-35培养 18-48 小时，被检培养基同法操作。培养 18 小时，被检培养基菌落大小、形态特征及颜色应与对照培养基上的菌落 一致，培养 48 小时，空白平板和接种金黄色葡萄球菌的平板应不得生长。5.4.7 三糖铁琼脂培养基 新鲜配制对照三糖铁琼脂培养基，
9、121灭菌 15 分钟，制成高底层（2-3cm）短斜面，备用，用接种针挑取在木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基平板上生长的疑似菌落于三糖铁琼脂培养基高层斜面上进行斜面和高层穿刺接种，培养18-24 小时，被检培养基同法操作。培养 18 小时，被检培养基菌落大小、形态特征及颜色与对照培养基上的菌落一致;培养 24 小时，空白平板应无菌落生长。5.4.8 溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基 新鲜配制对照溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基，121灭菌 15 分钟，备用。冷却至 60倾注平皿，35培养箱预培养 8 小时后备用。取 7 个无菌琼脂平板，分别涂布接种铜绿假单胞菌和大肠埃希菌各 3 皿，接种菌液 0.1ml
10、（含 菌 50-100cfu） ，另一平板不接种菌作为空白对照 ，涂布均匀后于规定温度 30-35倒置培养 18-72 小时，被检培养基同法操作。培养 18 小时，被检培养基菌落大小、形态特征及颜色应与对照培养基上的菌落 一致，培养 72 小时，空白平板和接种大肠埃希菌的平板应无菌落生长。5.4.9 甘露醇氯化钠琼脂培养基 新鲜配制对照甘露醇氯化钠琼脂培基，121灭菌 15分钟，冷却至 60冷却至 60倾注平皿，35培养箱预培养 8 小时后备用。取 5 个无菌琼脂平板，分别涂布接种金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌各 2 皿，接种菌液0.1ml（含 菌 50-100cfu） ，另一平板不接种菌作为空白
11、对照 ，涂布均匀后于规定温度 30-35倒置培养 18-72 小时，被检培养基同法操作。培养 18 小时，被检培养基菌落大小、形态特征及颜色应与对照培养基上的菌落 一致，培养 72 小时，空白平板和接种大肠埃希菌的平板应无菌落生长。5.4.10 梭菌增菌培养基 新鲜配制对照梭菌增菌培养基 2 瓶，121灭菌 15 分钟，备用，接种生孢梭菌 1 瓶，接种菌液 1ml(不大于 100cfu),另一瓶不接种菌株作为空白对工作标准 编号：SOP-QC-000-1.0XXX 中药饮片有限公司 控制菌检查用培养基适用性检查操作规程执行日期：第 5 页 共 6 页照，置规定温度 30-35厌氧条件下培养 4
12、8 小时，检培养基同法操作。培养 48 小时，空白培养瓶应不得浑浊，与对照培养基比较， ，被检培养基中试验菌应生长良好，表现为液体培养基变浑浊。5.4.11 哥伦比亚琼脂培养基 新鲜配制对照哥伦比亚琼脂培养基，121灭菌 15 分钟，冷却至 60倾注平皿，35培养箱预培养 8 小时后备用。取 3 个哥伦比亚琼脂平板，涂布接种生孢梭菌各 2 皿，接种菌液 0.1ml（含 菌 50-100cfu） ，另一平板不接种菌作为空白对照 ，涂布均匀后于规定温度 30-35的厌氧条件倒置培养 48-72 小时，被检培养基同法操作。培养 48 小时，被检培养基菌落大小、形态特征及颜色应与对照培养基上的菌落 一
13、致，培养 72 小时，空白平板和接种大肠埃希菌的平板应无菌落生长。哥伦比亚琼脂培养基营养丰富 ，适宜多数需氧菌的生长，为了消除其它杂菌生长对检查结果的影响，可在每升灭菌后培养基中按无菌操作添加含有相当于 20mg 庆大霉素的硫酸庆大霉素。添加庆大霉素的哥伦比亚琼脂可参照 上述方法进行培养基适用性考察。5.4.12 沙氏葡萄糖液体培养基 新鲜配制对照 沙氏葡萄糖液体培养基 2 瓶，21灭菌 15 分钟，备用，接种白色念珠菌 1 瓶，接种菌液 1ml(不大于 100cfu),另一瓶不接种菌株作为空白对照，置规定温度 30-35培养 3-5 天，检培养基同法操作。培养 3天，与对照培养基比较，被检培
14、养基中试验菌应生长良好，表现为液体培养基变浑浊。培养 5 天，空白培养瓶和接种大肠埃希菌的培养瓶应不得浑浊。5.4.13 沙氏葡萄糖琼脂培养基 新鲜配制对照沙氏葡萄糖琼脂培养基，121灭菌 15分钟，冷却至 60倾注平皿，35培养箱预培养 8 小时后备用。取 3 个沙氏葡萄糖琼脂平板，涂布接种白色念珠菌各 2 皿，接种菌液 0.1ml（含 菌 50-100cfu） ，另一平板不接种菌作为空白对照 ，涂布均匀后于规定温度 30-35倒置培养 24-48 小时，被检培养基同法操作。培养 24 小时，被检培养基菌落大小、形态特征、颜色及气味应与对照培养基上的菌落 一致，培养 48 小时，空白平板和接
15、种大肠埃希菌的平板应无菌落生长。5.4.14 念珠菌显色培养基 新鲜配制对照念珠菌显色培养基，加热充分溶解，冷却至60倾注平皿，35培养箱预培养 8 小时后备用。念珠菌显色平板使用前避光保存，工作标准 编号：SOP-QC-000-1.0XXX 中药饮片有限公司 控制菌检查用培养基适用性检查操作规程执行日期：第 6 页 共 6 页取 5 个无菌念珠菌显色平板，分别涂布接种白色念珠菌和大肠埃希菌各 2 皿，接种菌液 0.1ml（含 菌 50-100cfu） ，另一平板不接种菌作为空白对照 ，涂布均匀后于规定温度 30-35倒置培养 24-48 小时，被检培养基同法操作。培养 24 小时时，被检培养基菌落大小、形态特征及颜色应与对照培养基上的菌落 一致，培养 48 小时，空白平板和接种大肠埃希菌的平板应无菌落生长。6 相关文件及记录 培养基管理规程 需 氧菌、霉菌和酵母菌计数检查操作规程培养基配制记录7 培训范围部门 质量部培训岗位 全体人员8 附录 无9 变更历史文件版本号文件起草人文件执行日期修订摘要1.0 新订文件
