1、生物化学实验基本操作,一. 玻璃仪器的洗涤在生化实验中，玻璃仪器洁净与否，是获得准确结果的重要环节。洁净的玻璃仪器内壁应十分明亮光洁，无水珠附着在玻壁上。 常用的洗涤方法：1.一般仪器，如烧杯、试管等可用毛刷蘸肥皂液、合成洗涤剂仔细刷洗。然后用自来水反复冲洗，最后用少量蒸馏水冲洗23次，倒置在器皿架上晾干或置于烘箱烤干备用。,2.容量分析仪器如吸量管、容量瓶、滴定管等，不能用毛刷刷洗。用后应及时用自来水多次冲洗，细心检查洁净程度，根据挂不挂水珠采取不同处理方法。（1）如不挂水珠，用蒸馏水冲洗、干燥，方法同上； （2）如挂水珠，则应沥干后用重铬酸钾洗液浸泡46小时，然后按上法顺序操作，即先用自来
2、水冲洗，再用蒸馏水冲洗，最后干燥。,二.刻度吸量管刻度吸量管的种类： 按容量规格来分，有0.1、0.2、0.25、0.5、1、2、5、10ml等数种。其精密度按不同的容积可达移取量的0.11%。通常将管身标明的总容量分刻为100等分。因此，10ml的吸量管一格代表0.1ml；1ml的吸量管一格代表0.01ml,其余类推。,刻度吸量管的正确使用方法：用右手拇指和中指夹住管身，将吸量管的尖端伸入试液深处，左手持洗耳球把试液吸入管内至高过刻度以上时，迅速用右手食指按住吸量管的上口，以控制试液的泄放。吸液后应尽量使吸量管保持垂直，使右眼与刻度等高，稍微轻抬食指或轻轻转动吸量管，使试液面缓慢降落，至管内
3、试液弯月面的最低点与吸量管的刻度线相齐为止。然后将吸量管插到需加试剂的容器中，让尖端与容器内壁靠紧，松开食指让液体流出。液体流完后再等15秒钟，捻动一下吸量管后移去（如需吹的吸量管，则吹出尖端的液体后再捻转一下吸量管移去）。,三. 溶液的混匀 混匀的目的：使反应体系内的各种物质分子很好地互相接触，充分进行反应； 使欲稀释的溶液成为浓度均一的溶液。, 混匀的方法通常有以下几种：使盛器作离心运动。左手持试管上端，用右手指轻击试管下半部，使管内溶液作旋转运动。, 混匀的注意事项：防止盛器内的液体溅出或被污染。严禁用手指堵塞管口或瓶口震荡混匀。,实验报告的书写,1.实验目的2.实验原理3.实验步骤4.
4、实验结果5.实验分析,影响酶作用的因素,一、实验目的,通过对唾液淀粉酶活性的观察，验证温度、pH、激活剂、抑制剂等对酶活性的影响。,二、实验原理,唾液淀粉酶存在于唾液中，其作用的底物是淀粉。,淀粉 I2：蓝色,淀粉酶,糊精（大分子，小分子） 紫红色、暗褐色或红色,淀粉酶,麦芽糖+少量葡萄糖 棕黄色，碘本身颜色,淀粉水解过程中与碘反应，其颜色的变化，可以指示淀粉的水解程度，也可以由此判断淀粉酶活力强弱。,三、实验试剂及器材,1.试剂 1%淀粉溶液 碘液 pH5.0、pH6.8、pH8.0磷酸盐缓冲液 1% CuSO4溶液 1% NaCl溶液 Na2SO4溶液,2. 器材 恒温水浴锅 电炉 比色板
5、,四、实验操作,1.唾液淀粉酶的制备 取干净的纸杯，盛上蒸馏水。 用蒸馏水漱口。 口含约20ml蒸馏水，2-3分钟后，吐入一干净试管中，棉花过滤。,2分钟后做碘液检查：在比色板上滴上碘液，于二管各取一滴加入，看是否开始水解，以后每隔2分钟再取一滴加以检查，约6-10分钟后实验管水解过程由蓝紫 红棕 无色，此时水解完成。但对照管仍蓝色。,观察两管淀粉在水解后的乳样光泽,分别取两管溶液5滴，加入班氏试剂0.5ml，加热煮沸，观察有何现象发生。,2.pH对唾液淀粉酶活性的影响,一、实验目的 了解pH对酶活性的影响及最适pH的定义。二、原理 酶的催化活性与环境pH有密切关系，通常各种酶只在一定pH范围
6、内才具有活性，酶活性最高时的pH，称为酶的最适pH，高于或低于此pH时酶的活性都逐渐降低。不同酶的最适pH不同。酶的最适pH不是一个特征性的物理常数，对于一个酶，其最适pH因缓冲液和底物的性质不同而有差异。,摇匀，置于常温下，立即自PH6.8的一管中取出一滴置于比色盘中，以后每隔2分钟左右检查一次，观察与碘液的显色反应，当出现淡红褐色时，向每管滴加碘液1滴，比较各管颜色。,取试管3支，按下表操作,3. 温度对唾液淀粉酶活力的影响,一、实验目的 了解温度对酶活性的影响并了解最适温度的定义。二、原理 对温度敏感是酶的一个重要特性，酶作为生物催化剂，和一般催化剂一样呈现出温度效应，提高温度可以提高酶
7、促反应速度，但另一方面又会加速酶蛋白的变性速度，所以在较低的温度范围内，酶反应速度随温度升高而增大，但是超过一定温度后，反应速度反而下降。酶反应速度达到最大时的温度称为酶的最适温度。酶的最适温度不是一个常数，它与作用时间的长短有关系。,取3支试管，按下表操作：,1.在上述温度情况下，保温10分钟,2.从上3管各取水解液少许用碘液试之。有何变化？,3.将2、3管从水中取出，放入37水浴中保温10 分钟，再以碘液试之，有何变化？,4.激活剂和抑制剂对唾液淀粉 酶活性的影响,一、实验目的 了解激活剂和抑制剂对酶活力的影响。二、原理 酶的活性受某些物质的影响，能使酶活性增加的称为激活剂，能使酶活性降低的称为抑制剂。很少量的激活剂和抑制剂就会影响酶的活性，而且常具有特异性，但激活剂和抑制剂不是绝对的，浓度的改变可能使激活剂变成抑制剂。,置于常温下，同时向各管中加入等量唾液1ml，立即混匀，并立即从第二管中用滴管取出液体，检查与碘液所呈反应的颜色，当呈红黄色时，即向各管加入4滴碘液，观察其变化。,取试管4支，按下表操作,
