1、山东科源制药有限公司Shandong Keyuan Pharmaceutical Co., Ltd保密文件文件编号：SOP-ZL-006Document No.标题Title 洁净室（区）沉降菌监测操作规程Page 1 of 7起草人：Written by日期：Date 部门：质量管理部Dept.生效日期：Effective Date审核人:Reviewed by日期：Date 部门：质量管理部Dept.替代版本：04Replaced Version批准人:Approved by日期：Date 部门：分管副总Dept.版 本 号：05Version No.分发部门：质量管理部 Distribu
2、tion1 目的确定医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法和标准。2 范围适用于不同洁净室（区）（包括洁净工作台）的沉降菌的测定和环境验证。3 责任QC 微生物室负责洁净室（区）沉降菌的监测。4 内容4.1 参考标准中华人民共和国国家标准 GB/T16294-19962010医 药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法。中华人民共和国卫生部发布的药品生产质量管理规范（2010 年修订）。4.2 监测程序4.2.1 设备高压消毒锅恒温培养箱培养皿：一般采用 90mm15mm 的硼硅酸玻璃培养皿。4.2.2 培养基及平皿制备4.2.2.1 一般采用普通肉汤琼脂培养基或其他药典认可的培养基4.2.2.2 制
3、备过程如下： 将培养皿与用三角瓶装好的培养基在高压消毒锅内置于 121湿热灭菌 20分钟或 180干热灭菌 2 小 时； 将培养基加热溶化，冷至 45时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约 15ml。 待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于 3035 恒温培养箱中培养 48山东科源制药有限公司Shandong Keyuan Pharmaceutical Co., Ltd保密文件文件编号：SOP-ZL-006Document No.标题Title 洁净室（区）沉降菌监测操作规程Page 2 of 7起草人：Written by日期：Date 部门：质量管理部Dept.生效日期：Effectiv
4、e Date审核人:Reviewed by日期：Date 部门：质量管理部Dept.替代版本：04Replaced Version批准人:Approved by日期：Date 部门：分管副总Dept.版 本 号：05Version No.分发部门：质量管理部 Distribution小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采 样用。 制备好的培养基平皿倒置在 28的环境中存放，注意避免污染。4.2.3 采样点和监测频次山东科源制药有限公司Shandong Keyuan Pharmaceutical Co., Ltd保密文件文件编号：S0P-ZL-006Document No.标题Title洁净
5、室（区）沉降菌监测操作规程 版本号 Version No.：05Page 3 of 94.2.3.1 采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域 过于集中，按照洁净区的面积大小，而制定最少采样点数目（附件），在 满足最少采样点数的同时， 还宜满足最少培养皿数和采样点布置（附件）。4.2.3.2 工作区采 样点的位置离地 0.8 米1.5 米左右（略高于工作面）。并在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。4.2.3.3 监测频次：每月一次，特殊情况及时监测。4.2.4 测试规则4.2.4.1 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度必须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定
6、值内。4.2.4.2 测试前被测试洁净室（区）已经过消毒。4.2.4.3 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。4.2.4.4 测试时间： 对单向流（如 A100 级净化房间及层流工作台），测试应在净化空调系统正常运行不少于 10 分钟后开始。 对非单向流，如 10,000B 级、100,000C 级以上的 净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于 30 分钟后开始。4.3 测试步骤4.3.1 采样将已制备好的培养皿按要求放置，使培养基表面暴露 0.5 小时。4.3.2 培养全部采样结束后将培养皿倒置于恒温培养箱中，在 3035 培养，时间不少于48 小时。每批培养基应有 对照试验，
7、每批可 选定 3 只培养皿作对照培养。4.3.3 菌落计数用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，并用 510 倍放大镜检查，有否遗漏。4.3.4 注意事项测试时应注意如下事项： 防止人为对样本的污染。 对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。 般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，应注意培养皿边缘生长的菌落，并注意菌落与培养基沉淀物的区别。 采样时应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔山东科源制药有限公司Shandong Keyuan Pharmaceutical Co., Ltd保密文件文件编号：S0P-ZL-006Document No.标题Title洁净室（区）沉
8、降菌监测操作规程 版本号 Version No.：05Page 4 of 9除。4.3.5 结果计算用计数方法得出各个培养皿的菌落数，按下式计算：平均菌落数 MM1M2-Mn n式中：M11 号培养皿菌落数M22 号培养皿菌落数 Mnn 号培养皿菌落数 n培养皿总数4.3.6 结果评定4.3.6.1 沉降菌最大允 许值（菌数/ 皿）洁净度级别 静 态静 态*A 级 1C 级 10000 33D 级 100000 1010“*”动态标准根据产品及验证 情况修订。4.3.6.2 用平均菌落数判断洁净室（区）空气中的微生物。 洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准。 若某洁净室（区）内的
9、平均菌落数超过评定标准，则必须对此区预先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。4.3.7 警戒限度和纠偏限度沉降菌警戒限度（菌数 /皿）洁净度级别动 态A 级 1C 级 2D 级 5沉降菌纠偏限度（菌数 /皿）洁净度级别动 态山东科源制药有限公司Shandong Keyuan Pharmaceutical Co., Ltd保密文件文件编号：S0P-ZL-006Document No.标题Title洁净室（区）沉降菌监测操作规程 版本号 Version No.：05Page 5 of 9A 级 1C 级 2.5D 级 84.3.8 异常情况的处理4.3.8.1 当连续三次样品测试结果超过
10、警戒警戒标准或单个样品的结果特别高时调查原因，必要时采取相应纠偏措施。4.3.8.2 当空 调系统维修（如更换高效过滤器）或停用超过 30 天时，重新启用空调系统后应及时对洁净室（区）进行环境监测。5 修订记录版本号 主要变更内容描述 变更原因 生效日期 备注 新建文件 2004.03.0101 增加文件版号 文件版本升级 2006.01.0102 变更登记号 文件版本升级 2009.10.2603 洁净区更改洁净级别 客户审计 2010.08.0104 增加异常情况处理的描述 客户审计 2012.06.2005增加了警戒限度和纠偏限度，升级洁净区级别，同时调整文件格式文件版本升级6 附录附件
11、 1 沉降菌监测的最少采样点数目附件 2 沉降菌监测的最少培养皿数附件 3 沉降菌监测的采样点布置附件 4 房间编号一览表SOP-ZL-006-FJ1 洁净室（区）沉降菌监测记录山东科源制药有限公司Shandong Keyuan Pharmaceutical Co., Ltd保密文件文件编号：S0P-ZL-006Document No.标题Title洁净室（区）沉降菌监测操作规程 版本号 Version No.：05Page 6 of 9附件 1 沉降菌监测的最少采样点数目 洁 净 度 级 别面 积 m2A 级 C 级 D 级1010 2020 4040 100100 200200 40040
12、0 10001000 20002000234816408016040080022241020401002002 22236133263注：对于单向流洁净室，是指送风面积。对于非单向流洁净室是指房间面积。附件 2 沉降菌监测的最少培养皿数洁净度级别 所需 90mm 培养皿数（以沉降 0.5 小时计）100A 级1C 级100000D 级1422附件 3 沉降菌监测的采样点布置“ .”为采 样点. . . . . . . .山东科源制药有限公司Shandong Keyuan Pharmaceutical Co., Ltd保密文件文件编号：S0P-ZL-006Document No.标题Title洁
13、净室（区）沉降菌监测操作规程 版本号 Version No.：05Page 7 of 9采样点布置“.” 为采样点山东科源制药有限公司Shandong Keyuan Pharmaceutical Co., Ltd保密文件文件编号：S0P-ZL-006Document No.标题Title 洁净室（区）沉降菌监测操作规程 版本号 Version No.：04 Page 8 of 7附件 4 房间编号一览表山东科源制药有限公司Shandong Keyuan Pharmaceutical Co., Ltd保密文件文件编号：S0P-ZL-006Document No.标题Title 洁净室（区）沉降菌
14、监测操作规程 版本号 Version No.：04 Page 9 of 7盐酸二甲双胍洁净区女二更 101 男二更 102 气闸室（人） 103 洗衣间 104 走廊 105结晶离心室 106 洁具间 107 干燥间 108 待检室 109 粉碎间 110容器清洗间 111 包材间 112 气闸室（包材） 113 内包间 114 气闸室（成品） 115格列齐特洁净区二楼楼梯间（二楼）201 走廊 202 洁具间 203 干燥间 204 结晶离心室 205粉碎间 206 容器清洗间 207 格列齐特洁净区一楼女二更 208 男二更 209 手消毒室 210 气闸室（人） 211 走廊 212洗衣
15、间 213 容器清洗间 214 洁具间 215 包材间 216 内包间 217成品暂存间 218 异氟烷洁净区女一更 301 手清洁间（女） 302 女二更 303 男一更 304 手清洁间（男） 305男二更 306 气闸室（人） 307 洗衣间 308 走廊 309 洁具室 310容器清洗间 311 气闸室（包材） 312 瓶暂存间 313 瓶洗间 314 烘瓶室 315灌装间 316 待检室 317 气闸室（成品） 318 山东科源制药有限公司Shandong Keyuan Pharmaceutical Co., Ltd保密文件文件编号：S0P-ZL-006Document No.标题T
16、itle 洁净室（区）沉降菌监测操作规程 版本号 Version No.：04 Page 7 of 7综合洁净区女二更 401 男二更 402 气闸室（人） 403 洗衣间 404 走廊 405洁具间 406 结晶离心室（北） 407 干燥间 408 结晶离心室（南） 409 粉碎间 410混料间 411 待检室 412 容器清洗间 413 包材间 414 气闸室（包材） 415内包间 416 成品暂存间 417 微生物室二更 01 走廊 02 效价室 03 微生物限度检查 04 阳性对照 05中试洁净区女二更 501 男二更 502 气闸室（人） 503 洗衣间 504 走廊 505洁具间 506 内包间 507 包材间 508 混料间 509 粉碎间 510结晶离心一室 511 干燥一室 512 结晶离心二室 513 干燥二室 514 干燥三室 515结晶离心三室 516 容器清洗间 517
