1、SRT-1720, EX527 一定要应用在白血病细胞株起作用的浓度方可比较对 293T 细胞和白血病细胞株的不同影响，请重复实验。实验日期：2015/08/22-2015/08/27实验项目：CCK8 法检测细胞增殖实验地点：广西医科大学药基楼 14 楼生物靶向中心实验人员：高宗燕、宁海萍、李登峰实验目的：检测 SRT-1720/EX527 刺激 293T 细胞后对细胞增殖的影响主要试剂：SRT-1720, EX527,CCK8 试剂盒主要仪器：酶标仪实验步骤：一、制作标准曲线（测定细胞具体数量时）1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞至 96 孔板。2、设置 4
2、个细胞浓度梯度：0，2000，4000，8000，每组 4 个复孔。3、接种后培养 24 小时使细胞贴壁，然后加 CCK 试剂培养 4 小时后测定 OD 值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X 轴） ，OD 值为纵坐标（Y 轴）的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入 CCK 后的培养时间。 ）y = 1262.4x2 - 822.82x + 255.31R2 = 0.978401000200030004000500060007000800090000 0.5 1 1.5 2 2.5 3图一、标准曲线二、细胞增
3、殖检测1、在 96 孔板中配置 100L 的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24 小时（在 37，5% CO 2 的条件下） 。2、向培养板加入 10L SRT-1720（终浓度 3um）, EX527 （终浓度 100um） 。3、将培养板在培养箱孵育约 24h4、每孔加入 10L CCK 溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响 OD 值的读数） 。5、将培养板在培养箱内孵育 2 小时。6、用酶标仪测定在 450nm 处的吸光度。02000400060008000100001200014000160000 1 2 3 4 5 6图二、3um SRT1720 刺激 293T 细胞后的细胞增
4、殖曲线。该曲线呈 S 形，符合细胞正常生长情况。-200002000400060008000100001200014000160000 1 2 3 4 5 6图三、100um EX527 刺激 293T 细胞后的细胞增殖曲线。该曲线前部分呈 S 形，符合细胞正常生长情况，但在进入对数期之后曲线有下滑，之后进入平台期。分析：SRT1720 为 SIRT1 特异性活化剂，在前期实验中对白血病细胞株的生长表现出抑制作用，此次实验中SRT1720 对正常细胞（293T）的生长无明显抑制作用。暗示 SIRT1 的活化对正常细胞的生长可能无明显影响。小剂量 EX527 为 SIRT1 特异性抑制剂，在前期实验中大剂量 EX527 对白血病细胞株的生长表现出抑制作用，而小剂量 EX527 无此效应，此次实验中大剂量 EX527 对正常细胞（293T）的生长可能有轻度抑制作用。但不能以一次实验结果做出肯定的结论，该实验还需重复。
