合成多肽药物的合成工艺中关键问题分析.pdf

1、Chinese Journal of New D rugs 2010, 19 (2)102 中 国 新 药 杂 志 2010年 第 19卷 第 2期作 者 简 介 王 鹏 ,男 ,主 管 药 师 ,主 要 从 事 化 学 药 品 技 术 审 评 研 究 。联 系 电 话 : (010) 68585566 - 545, E2mail: wangp cde. org. cn。 新 药 申 报 与 审 评 技 术 指 导 原 则 解 读 系 列 专 题 (十 六 )合 成 多 肽 药 物 的 合 成 工 艺 中 关 键 问 题 分 析王 鹏(国 家 食 品 药 品 监 督 管 理 局 药 品 审 评

2、 中 心 ,北 京 100038)摘 要 文 中 主 要 结 合 药 品 注 册 技 术 审 评 过 程 中 遇 到 的 常 见 问 题 对 合 成 多 肽 药 物 药 学 研 究 技 术 指 导原 则 中 合 成 工 艺 部 分 中 的 一 些 关 键 问 题 进 行 归 纳 和 分 析 ,对 本 指 导 原 则 中 的 一 些 技 术 要 求 ,如 起 始 原 料 的要 求 、 合 成 工 艺 申 报 资 料 的 要 求 等 进 行 深 入 和 细 化 的 阐 述 ,同 时 对 指 导 原 则 起 草 过 程 中 存 在 争 议 的 一 些 问 题进 行 了 说 明 。关 键 词 合 成

3、多 肽 ;指 导 原 则 ;合 成 工 艺 ;技 术 要 求中 图 分 类 号 R95 文 献 标 志 码 C 文 章 编 号 1003 - 3734 (2010) 02 - 0102 - 04Ana lysis of key problem s on syn thesis of syn thetic peptide drugsWANG Peng(Center for D rug Evaluation, S ta te Food and D rug A dm inistration, B eijing 100038, Ch ina) Abstract Based on Guidance on

4、Chem istry, Manufacturing and Controls Studies for Synthetic Pep tide D rugsand the common issues about drug registration, this paper summarized and analyzed key p roblem s on synthesis of pep2tide drugs. A number of technical requirements, such as the requirements for starting materials and synthes

5、is informa2tion, were deep ly clarified, and controversial issues in the p rocess of drafting the guidance were described. Key words synthetic pep tide; guidance; synthesis; technical requirement有 关 合 成 多 肽 药 物 的 结 构 确 证 和 质 量 研 究 ,在指 导 原 则 解 读 系 列 专 题 (十 五 )中 已 有 论 述 ,本 文 主要 是 结 合 药 品 技 术 审 评 过 程 中

6、 遇 到 的 一 些 共 性 问 题就 合 成 多 肽 药 物 的 合 成 工 艺 研 究 中 的 几 个 关 键 问 题对 合 成 多 肽 药 物 药 学 研 究 技 术 指 导 原 则 做 进 一步 解 读 。1 合 成 工 艺 的 选 择在 日 常 审 评 工 作 中 会 遇 到 一 些 研 究 者 提 出 这 样的 问 题 :多 肽 合 成 是 采 用 固 相 合 成 工 艺 好 呢 ? 还 是液 相 工 艺 好 ? 国 家 食 品 药 品 监 督 管 理 局 药 品 审 评 中心 (CDE)更 倾 向 于 哪 种 工 艺 ?液 相 和 固 相 合 成 工 艺 是 多 肽 化 学 合

7、成 的 两 种 主要 合 成 工 艺 。 尽 管 随 着 技 术 、 设 备 的 不 断 发 展 、 完善 ,多 肽 的 固 相 合 成 工 艺 越 来 越 成 熟 并 逐 渐 占 据 了多 肽 化 学 合 成 的 主 导 地 位 ,但 液 相 法 是 经 典 的 多 肽合 成 方 法 ,具 有 产 物 纯 度 高 等 优 点 ,目 前 仍 然 是 制 备多 肽 甚 至 蛋 白 质 的 重 要 方 法 。 因 此 ,无 论 是 在 实 际的 药 物 研 究 工 作 中 还 是 在 指 导 原 则 中 都 不 可 能 简 单地 区 分 两 种 工 艺 的 好 与 坏 。 研 究 者 必 须 在

8、充 分 了 解两 种 工 艺 优 缺 点 的 基 础 上 ,根 据 目 标 肽 的 特 点 、 合 成的 实 际 需 要 以 及 研 究 者 自 身 的 研 制 条 件 、 经 验 等 选择 合 适 的 制 备 工 艺 。 其 中 有 3点 需 要 特 别 关 注 :第 一 ,研 究 者 必 须 充 分 了 解 固 相 和 液 相 两 种 工 艺的 优 缺 点 。 指 导 原 则 对 此 有 相 对 比 较 详 细 的 表 述 ,总结 起 来 :液 相 工 艺 的 优 点 是 每 步 中 间 体 均 可 以 纯 化 ,可 以 得 到 高 纯 度 的 产 品 ,缺 点 是 费 时 费 力 ,自

9、动 化 程度 不 高 ;固 相 工 艺 恰 好 相 反 ,其 优 点 是 能 够 实 现 自 动化 ,缺 点 是 由 于 每 步 的 中 间 体 不 能 纯 化 ,粗 品 的 纯 度不 如 液 相 合 成 产 物 ,需 要 有 可 靠 的 分 离 、 纯 化 手 段 。第 二 ,基 于 合 成 方 法 的 不 同 ,通 常 认 为 液 相 合 成法 较 适 于 合 成 短 肽 ,固 相 合 成 法 更 适 于 合 成 中 、 长 肽 。但 是 这 也 并 不 绝 对 ,例 如 随 着 固 相 合 成 工 艺 的 成 熟 和普 及 ,现 在 很 多 只 有 4, 5个 氨 基 酸 的 短 肽 也

10、 采 用 固 相法 制 备 ,一 些 长 肽 为 解 决 困 难 序 列 、 纯 度 等 问 题 则 先采 用 液 相 方 法 合 成 短 肽 片 断 ,然 后 将 该 片 断 应 用 到 固Chinese Journal of New D rugs 2010, 19 (2)103 中 国 新 药 杂 志 2010年 第 19卷 第 2期相 合 成 中 。 因 此 ,研 究 者 需 根 据 目 标 肽 的 特 点 和 自 身试 验 条 件 、 试 验 经 验 等 选 择 合 适 的 制 备 工 艺 。第 三 ,过 去 曾 认 为 液 相 合 成 法 可 以 大 规 模 合 成 ,而 固 相 合

11、 成 法 受 树 脂 载 量 等 因 素 的 影 响 ,合 成 规 模一 般 不 大 。 但 近 年 来 随 着 固 相 合 成 技 术 、 设 备 的 不断 提 高 、 完 善 ,固 相 合 成 法 的 产 量 也 可 以 达 到 公 斤 级甚 至 更 高 ,合 成 规 模 的 问 题 正 在 逐 步 得 到 解 决 。2 合 成 策 略表 面 上 看 ,肽 键 的 形 成 只 是 一 个 简 单 的 羧 酸 与胺 之 间 形 成 酰 胺 键 的 过 程 。 但 是 由 于 每 一 个 氨 基 酸既 含 有 氨 基 同 时 又 含 有 羧 基 ,如 果 活 化 一 种 氨 基 酸 ,则 其

12、可 以 与 同 一 种 或 另 一 种 氨 基 酸 分 子 的 氨 基 反应 ,此 外 一 些 氨 基 酸 (如 Ser, Thr, Tyr, A sp等 )的 侧链 官 能 团 也 能 够 参 与 反 应 ,这 使 得 肽 合 成 变 得 更 加复 杂 。 因 此 ,合 成 策 略 的 选 择 是 多 肽 合 成 工 艺 研 究的 核 心 工 作 ,很 多 情 况 下 需 要 深 思 熟 虑 地 进 行 规 划 。多 肽 的 合 成 策 略 通 常 是 指 目 标 肽 肽 链 的 组 装 方法 以 及 肽 键 形 成 的 步 骤 顺 序 和 保 护 方 法 ,其 中 需 要关 注 的 技 术

13、 问 题 非 常 繁 杂 ,如 N 2氨 基 、 C 2羧 基 以及 侧 链 官 能 团 的 保 护 与 脱 除 ,常 见 的 保 护 基 及 特 点 ,保 护 基 的 匹 配 ,如 何 控 制 副 反 应 和 消 旋 化 等 。 鉴 于本 指 导 原 则 定 位 于 “ 原 则 性 要 求 ” ,因 此 指 导 原 则 只是 强 调 了 “ 多 肽 合 成 的 研 究 中 不 仅 需 要 关 注 活 化 方法 、 偶 联 方 法 等 ,更 要 关 注 保 护 /脱 保 护 策 略 的 选择 ” ,而 没 有 涉 及 过 多 的 技 术 细 节 。 但 是 作 为 药 品注 册 研 究 来 说

14、 ,研 究 者 需 重 点 关 注 如 下 几 方 面 内 容 : 从 战 略 角 度 ,要 根 据 目 标 肽 的 序 列 等 情 况 研 究 、选 择 肽 链 的 组 装 方 法 ,例 如 是 采 用 线 性 合 成 还 是 选择 片 段 缩 合 的 方 法 ,研 究 者 需 充 分 了 解 这 两 种 方 法各 自 的 优 缺 点 。 限 于 篇 幅 本 文 不 做 详 细 的 介 绍 。 选 择 适 当 的 缩 合 方 法 。 在 室 温 下 ,一 个 氨 基 酸 的羧 基 与 另 一 个 氨 基 酸 氨 基 的 反 应 产 物 是 铵 盐 而 不 是酰 胺 ,因 此 事 先 需 要

15、对 羧 基 组 分 进 行 活 化 。 目 前 ,可用 于 肽 键 缩 合 的 试 剂 和 缩 合 方 法 较 多 ,常 见 的 有 酰基 叠 氮 物 法 、 酸 酐 法 、 碳 二 亚 胺 法 、 活 化 酯 法 、 磷 鎓 盐试 剂 法 、 脲 鎓 盐 试 剂 法 等 。 这 些 缩 合 方 法 及 缩 合 试剂 均 具 有 各 自 的 特 点 ,例 如 :叠 氮 法 通 常 被 认 为 是 消旋 化 倾 向 最 小 的 缩 合 方 法 ;碳 二 亚 胺 化 合 物 中 的DCC相 对 便 宜 曾 经 是 优 选 的 缩 合 剂 ,但 其 具 有 较 高的 消 旋 化 和 C端 差 向 异

16、 构 化 倾 向 ;而 DCC与 辅 助 试剂 HOB t等 联 合 应 用 能 够 有 效 地 抑 制 消 旋 化 等 问题 ,再 度 得 到 了 广 泛 应 用 ;磷 鎓 盐 试 剂 中 的 BOP是一 种 非 常 有 效 的 缩 合 剂 ,但 反 应 中 易 产 生 具 有 强 毒性 和 致 癌 性 的 HMPA;脲 鎓 盐 试 剂 中 的 TBTU 和HBTU的 缩 合 产 率 高 ,并 且 能 够 减 少 甚 至 排 除 消 旋和 副 反 应 的 发 生 。 研 究 者 需 要 充 分 了 解 这 些 缩 合 方法 的 特 点 ,再 结 合 目 标 肽 的 具 体 情 况 (包 括

17、氨 基 酸侧 链 的 情 况 )选 择 适 宜 的 缩 合 方 法 ,研 究 资 料 中 应明 确 缩 合 方 法 的 选 择 依 据 。 保 护 /脱 保 护 策 略 。官 能 团 的 保 护 和 脱 保 护 是 多 肽 化 学 合 成 的 基 础 ,是决 定 多 肽 合 成 成 功 与 否 的 关 键 因 素 。 对 于 C端 N端 合 成 策 略 来 说 需 要 对 N 2氨 基 、 C 2羧 基 (液 相 合成 法 或 固 相 合 成 连 接 臂 )以 及 多 种 侧 链 官 能 团 等 大量 官 能 团 进 行 保 护 ,同 时 由 于 对 选 择 性 的 要 求 不 同 ,必 须

18、区 分 临 时 性 保 护 (如 下 一 步 要 反 应 的 氨 基 或 羧基 )和 半 永 久 性 保 护 (侧 链 官 能 团 ) ,临 时 性 保 护 基的 脱 除 要 保 证 不 干 扰 已 形 成 的 肽 键 和 侧 链 的 半 永 久性 保 护 基 ,而 最 终 去 除 半 永 久 性 保 护 基 也 要 保 证 组合 起 的 肽 链 不 受 影 响 ,此 外 还 需 关 注 的 是 保 护 基 的引 入 和 脱 除 存 在 发 生 消 旋 的 可 能 。 因 此 ,尽 管 目 前已 经 有 优 选 的 Boc /Bzl和 Fmoc / tBu策 略 ,保 护 /脱保 护 策 略

19、仍 然 是 多 肽 化 学 合 成 中 最 为 复 杂 和 困 难 的问 题 之 一 ,任 何 一 部 关 于 合 成 多 肽 的 专 著 中 都 会 用大 量 篇 幅 重 点 介 绍 保 护 /脱 保 护 策 略 。本 指 导 原 则 由 于 指 导 思 想 和 篇 幅 的 所 限 并 未 对保 护 /脱 保 护 策 略 的 技 术 问 题 进 行 深 入 探 讨 ,但 是 作为 药 品 注 册 研 究 ,保 护 /脱 保 护 策 略 的 研 究 和 选 择 是必 不 可 少 的 部 分 ,申 报 资 料 中 必 须 予 以 体 现 。 研 究 者应 重 点 说 明 保 护 基 的 匹 配

20、问 题 ,要 求 每 一 类 保 护 基(临 时 保 护 基 和 半 永 久 性 保 护 基 )的 脱 除 互 不 相 干 。目 前 , Boc /Bzl和 Fmoc / tBu策 略 已 成 为 优 选 的保 护 /脱 保 护 策 略 ,据 统 计 80%以 上 多 肽 合 成 应 用 了这 两 种 方 法 ,很 多 研 究 者 认 为 采 用 这 两 种 策 略 就 不 必再 进 行 研 究 。 实 则 不 然 ,因 为 至 今 还 没 有 一 种 普 遍 适用 的 、 理 想 的 保 护 基 ,而 且 Boc /Bzl和 Fmoc / tBu策 略本 身 都 有 各 自 鲜 明 的 优

21、缺 点 。 在 合 成 长 肽 或 含 困 难序 列 的 肽 时 常 常 还 会 将 两 种 策 略 结 合 应 用 。除 上 述 内 容 外 ,多 肽 的 合 成 策 略 还 涉 及 诸 如 固相 合 成 中 树 脂 的 选 择 、 连 接 臂 的 选 择 、 二 硫 键 形 成 方法 等 很 多 领 域 ,这 些 都 需 要 开 展 针 对 性 的 研 究 工 作 。需 要 特 别 说 明 的 是 ,本 部 分 内 容 由 于 篇 幅 所 限并 未 区 分 固 相 和 液 相 合 成 方 法 。3 消 旋 化 的 控 制“ 消 旋 化 ” 在 有 机 化 学 中 是 指 单 个 光 学 异

22、 构 体完 全 转 变 为 消 旋 体 ,而 在 肽 化 学 中 “ 消 旋 化 ” 也 常 常用 于 表 示 1个 手 性 中 心 部 分 或 全 部 差 向 异 构 化 ,而不 管 反 应 中 生 成 的 是 非 对 映 异 构 体 混 合 物 还 是 对 映异 构 体 混 合 物 。Chinese Journal of New D rugs 2010, 19 (2)104 中 国 新 药 杂 志 2010年 第 19卷 第 2期尽 管 本 指 导 原 则 未 对 控 制 多 肽 合 成 中 的 消 旋 化提 出 明 确 的 要 求 ,但 是 鉴 于 消 旋 化 对 于 多 肽 合 成 和

23、纯 化 工 艺 的 重 要 性 ,从 化 学 药 物 合 成 工 艺 控 制 的 一般 原 则 来 说 ,研 究 者 必 须 对 多 肽 合 成 工 艺 中 的 消 旋化 问 题 进 行 研 究 并 提 出 明 确 的 控 制 方 法 。 这 是 由 于除 甘 氨 酸 外 的 2氨 基 酸 均 为 手 性 分 子 ,参 与 多 肽 合成 的 官 能 团 均 连 接 在 手 性 中 心 上 ,它 们 参 与 的 所 有反 应 (如 保 护 基 的 引 入 和 脱 除 、 羧 基 的 活 化 反 应 等 )都 存 在 消 旋 化 的 可 能 。 对 于 一 个 10肽 ,如 果 每 个 氨基 酸

24、仅 发 生 1%的 差 向 异 构 化 ,则 合 成 终 产 物 的 光学 纯 度 就 只 有 90. 4% ,而 对 于 一 个 50肽 ,其 光 学 纯度 则 仅 有 60. 5% ,从 而 会 影 响 到 肽 的 生 物 活 性 。 由于 将 差 向 异 构 体 从 终 产 物 中 有 效 分 离 是 一 个 非 常 繁琐 的 事 情 ,因 此 在 肽 合 成 过 程 中 就 必 须 采 取 相 应 措施 、 加 强 过 程 控 制 ,将 消 旋 化 降 至 最 低 。 通 常 需 关 注缩 合 方 法 、 保 护 /脱 保 护 策 略 的 选 择 ,加 强 对 缩 合 试剂 、 投 料

25、 比 、 反 应 条 件 等 的 考 察 研 究 。 此 外 ,还 应 注意 合 成 原 料 各 种 保 护 氨 基 酸 的 控 制 ,建 议 采 用有 效 手 段 控 制 其 光 学 纯 度 。4 分 离 和 纯 化与 普 通 化 学 合 成 药 物 相 比 ,多 肽 合 成 工 艺 中 产生 的 杂 质 来 源 非 常 广 泛 ,如 缺 失 肽 、 断 裂 肽 、 氧 化 肽 、差 向 异 构 体 、 侧 链 酰 基 化 、 二 硫 键 交 换 的 产 物 等 ,而很 多 杂 质 与 目 标 肽 本 身 的 性 质 非 常 接 近 ,因 而 分 离和 纯 化 工 艺 的 可 行 性 就 显

26、 得 尤 为 重 要 。 为 此 ,本 指导 原 则 用 了 相 对 比 较 多 的 篇 幅 对 “ 分 离 和 纯 化 ” 的方 法 、 研 究 内 容 等 进 行 了 阐 述 。 而 在 实 际 工 作 中 ,我们 发 现 很 多 研 究 者 对 多 肽 的 分 离 纯 化 工 艺 不 够 重 视 ,提 供 的 资 料 非 常 简 单 ,尤 其 是 很 多 申 报 资 料 未 提 供 分离 纯 化 方 法 的 验 证 资 料 ,或 者 是 研 究 得 不 充 分 ,从 而导 致 无 法 对 该 分 离 纯 化 方 法 的 可 行 性 进 行 评 价 。事 实 上 ,指 导 原 则 已 经

27、明 确 要 求 研 究 者 在 注 册 申报 资 料 中 必 须 提 供 : 详 细 的 纯 化 工 艺 。 相 关 的工 艺 参 数 。 详 细 的 纯 化 工 艺 的 验 证 资 料 。 这 其 中纯 化 工 艺 的 验 证 资 料 最 为 重 要 ,是 说 明 多 肽 纯 化 工 艺可 行 性 的 关 键 环 节 。 纯 化 工 艺 的 验 证 一 般 可 通 过 比较 纯 化 前 后 样 品 的 纯 度 来 进 行 ,申 报 资 料 中 需 要 提 供样 品 纯 化 前 后 的 纯 度 研 究 图 谱 和 相 应 的 纯 度 数 据 。需 要 强 调 的 是 : 纯 化 前 后 样 品

28、 纯 度 的 对 比 研究 需 要 以 可 行 的 杂 质 分 析 方 法 为 基 础 。 纯 化 前多 肽 粗 品 的 纯 度 应 符 合 合 成 多 肽 的 一 般 规 律 。 例如 ,一 个 接 近 40个 氨 基 酸 残 基 的 多 肽 采 用 固 相 工 艺合 成 ,研 究 者 提 供 HPLC图 谱 显 示 纯 化 前 粗 肽 的 纯度 高 达 80%以 上 。 然 而 ,采 用 固 相 合 成 工 艺 制 备 含有 40个 氨 基 酸 残 基 的 多 肽 ,要 使 总 收 率 达 到 80% ,其 每 一 步 得 率 均 需 超 过 99. 5% ,这 在 实 际 生 产 中 是

29、很 难 做 到 的 ,这 种 情 况 会 提 示 粗 品 纯 度 检 查 方 法 的专 属 性 不 够 理 想 ,不 能 充 分 检 出 粗 品 中 存 在 的 各 种杂 质 。 正 是 基 于 此 ,合 成 多 肽 杂 质 研 究 方 法 通 常 也会 用 粗 肽 来 对 方 法 的 专 属 性 进 行 验 证 。总 之 ,分 离 纯 化 工 艺 验 证 研 究 的 目 的 是 要 说 明所 采 用 的 工 艺 能 够 有 效 地 分 离 、 去 除 合 成 中 产 生 的各 种 杂 质 和 副 产 物 ,注 册 申 报 资 料 应 围 绕 该 目 的 提供 翔 实 的 试 验 数 据 。5

30、 合 成 所 用 氨 基 酸 的 要 求氨 基 酸 及 其 衍 生 物 (通 常 是 保 护 氨 基 酸 )作 为多 肽 合 成 的 起 始 原 料 ,其 质 量 对 合 成 多 肽 的 质 量 有重 要 影 响 ,例 如 保 护 氨 基 酸 的 纯 度 如 果 为 99% ,那么 合 成 一 个 10肽 ,纯 化 前 仅 由 起 始 原 料 引 入 的 杂 质就 会 高 达 10% ,因 此 研 究 者 应 特 别 关 注 氨 基 酸 及 其衍 生 物 的 来 源 、 质 控 方 法 等 。 申 报 资 料 中 ,一 是 要 提供 氨 基 酸 的 来 源 及 相 关 证 明 文 件 ,二 是

31、 要 提 供 氨 基酸 的 质 量 标 准 和 检 验 报 告 。 指 导 原 则 对 氨 基 酸 的 质量 标 准 有 明 确 的 要 求 “ 作 为 起 始 原 料 的 氨 基 酸 及 其 衍生 物 的 质 量 标 准 一 般 应 包 括 性 状 、 熔 点 、 比 旋 度 、 化 学纯 度 、 色 谱 纯 度 及 光 学 纯 度 、 含 量 等 ,其 中 对 于 起 始 原料 的 化 学 纯 度 和 光 学 纯 度 的 控 制 尤 为 重 要 。 ”需 要 特 别 关 注 保 护 氨 基 酸 光 学 纯 度 的 控 制 问题 。 在 本 指 导 原 则 征 求 意 见 阶 段 ,关 于

32、是 否 要 求 控制 合 成 所 用 氨 基 酸 的 光 学 纯 度 的 问 题 就 存 在 较 多 争论 ,企 业 界 的 代 表 认 为 实 施 起 来 难 度 较 大 。 课 题 组经 多 次 讨 论 并 充 分 征 求 国 内 权 威 专 家 意 见 ,认 为 合成 起 始 原 料 氨 基 酸 的 光 学 纯 度 对 终 产 品 质 量 具 有 明显 影 响 ,同 时 也 参 考 了 FDA, EMEA的 相 关 技 术 要 求并 充 分 考 虑 到 国 内 目 前 保 护 氨 基 酸 的 质 量 情 况 ,最终 在 本 指 导 原 则 的 定 稿 中 还 是 保 留 了 相 关 要

33、求 。 在实 际 工 作 中 ,国 内 多 数 研 究 者 采 用 测 定 比 旋 度 的 方法 控 制 氨 基 酸 的 光 学 纯 度 ,但 是 受 专 属 性 、 灵 敏 度 等的 限 制 ,比 旋 度 无 法 有 效 控 制 氨 基 酸 的 光 学 纯 度 ,尤其 是 对 于 比 旋 度 数 值 较 小 的 保 护 氨 基 酸 更 是 如 此 ,如 Fmoc2Glu (O tBu) 2OH为 + 1. 2 , Fmoc2Gln ( Trt) 2OH为 - 1. 0 。 因 此 ,建 议 采 用 手 性 HPLC法 控 制 起始 原 料 的 光 学 纯 度 。6 注 册 申 报 资 料 中

34、 的 常 见 问 题从 实 际 审 评 工 作 来 看 ,在 合 成 多 肽 注 册 申 报 资料 的 合 成 工 艺 部 分 除 了 前 文 所 述 的 工 艺 研 究 和 工 艺验 证 工 作 不 充 分 之 外 (例 如 未 对 纯 化 工 艺 等 进 行 研究 、 验 证 ,未 提 供 保 护 /脱 保 护 策 略 、 缩 合 方 法 的 选 择Chinese Journal of New D rugs 2010, 19 (2)105 中 国 新 药 杂 志 2010年 第 19卷 第 2期依 据 和 必 要 的 研 究 资 料 等 ) ,最 常 见 的 问 题 就 是 提供 的 合

35、成 工 艺 不 够 详 细 ,主 要 表 现 为 提 供 的 工 艺 步骤 和 操 作 过 程 过 于 简 单 、 工 艺 参 数 不 够 全 面 、 过 程 控制 方 法 不 够 详 细 。以 固 相 合 成 制 备 生 长 抑 素 为 例 ,有 些 合 成 工 艺表 述 为 :以 树 脂 起 始 ,按 照 多 肽 的 氨 基 酸 序 列进 行 固 相 合 成 ,顺 序 连 接 Ser, Thr A la,以 20%六氢 哌 啶 /二 氯 甲 烷 为 脱 保 护 剂 , 为 缩 合 试 剂 ;用 为 切 割 剂 ,将 直 链 肽 从 树 脂 上 切 割 下 来 ;在 中 ,直 链 肽 经 氧

36、 化 生 成 二 硫 键 形 成 环 肽 ,得 到 生 长 抑 素 粗 品 这 样 的 工 艺 资 料 看 似 包 含 了合 成 工 艺 的 整 个 过 程 ,但 事 实 上 评 价 者 很 难 对 该 工艺 的 可 行 性 做 出 准 确 判 断 ,因 为 它 缺 少 太 多 的 细 节 ,例 如 没 有 说 明 树 脂 的 用 量 及 溶 胀 洗 涤 方 法 、 脱 保 护 、缩 合 反 应 的 具 体 方 法 等 。根 据 相 关 指 导 原 则 的 要 求 ,结 合 多 肽 合 成 的 具体 特 点 ,多 肽 的 固 相 合 成 工 艺 资 料 应 包 括 : 如 果各 个 氨 基 酸

37、 缩 合 工 艺 完 全 一 致 ,应 至 少 要 提 供 一 个合 成 循 环 的 详 细 合 成 工 艺 及 工 艺 参 数 ,包 括 氨 基 酸的 用 量 、 树 脂 的 用 量 及 处 理 方 法 、 脱 保 护 的 详 细 方 法(次 数 、 时 间 、 洗 涤 情 况 等 )、 缩 合 反 应 的 详 细 方 法(缩 合 剂 用 量 、 反 应 时 间 、 洗 涤 情 况 等 )等 。 如 果某 个 氨 基 酸 的 缩 合 方 法 有 所 变 化 ,如 缩 合 时 间 等 具体 的 工 艺 参 数 不 同 、 需 要 进 行 二 次 或 三 次 缩 合 、 由 于一 些 困 难 序

38、 列 需 要 进 行 封 闭 等 ,申 报 资 料 中 必 须 明确 说 明 。 如 果 第 一 个 氨 基 酸 需 要 通 过 酯 键 、 酰 胺键 或 酰 肼 键 等 与 树 脂 连 接 ,应 提 供 该 步 骤 的 详 细 合成 工 艺 。 应 提 供 详 细 的 裂 解 、 二 硫 键 形 成 、 纯 化 、干 燥 过 程 的 工 艺 及 工 艺 参 数 ,如 纯 化 工 艺 应 提 供 柱填 料 种 类 及 粒 径 、 色 谱 柱 的 直 径 、 流 动 相 组 成 、 上 样量 、 检 测 波 长 、 流 速 、 色 谱 条 件 ,并 详 细 说 明 组 分 收 集的 选 择 标

39、准 、 其 他 组 分 的 处 理 方 式 等 。 提 供 详 细的 过 程 控 制 方 法 。 如 缩 合 反 应 、 二 硫 键 连 接 等 反 应终 点 的 监 控 。对 于 液 相 合 成 工 艺 ,由 于 在 合 成 中 会 用 到 不 同的 缩 合 方 法 及 脱 保 护 技 术 ,因 此 应 详 细 说 明 合 成 中的 每 一 步 操 作 以 及 反 应 终 点 监 控 等 过 程 控 制 方 法 ,尤 其 是 分 离 纯 化 工 艺 。7 结 语由 于 组 成 的 特 殊 性 ,合 成 多 肽 药 物 的 合 成 工 艺具 有 与 普 通 化 学 药 物 明 显 不 同 的

40、特 殊 之 处 ,本 文 只是 根 据 指 导 原 则 起 草 过 程 中 遇 到 的 一 些 问 题 并 结 合药 品 技 术 审 评 过 程 中 的 一 些 体 会 尝 试 对 合 成 多 肽药 物 药 学 研 究 技 术 指 导 原 则 以 及 合 成 多 肽 药 物 合成 工 艺 研 究 中 的 部 分 关 键 问 题 进 行 解 读 ,希 望 能 够使 这 部 指 导 原 则 更 好 地 服 务 于 研 究 者 。最 后 还 需 要 说 明 的 是 ,与 其 他 指 导 原 则 一 样 ,本指 导 原 则 不 可 能 穷 尽 合 成 多 肽 药 物 合 成 工 艺 研 究 领域 内

41、的 所 有 问 题 ,研 究 者 还 需 根 据 药 品 研 究 的 一 般规 律 、 针 对 各 自 品 种 的 特 点 开 展 全 面 的 研 究 工 作 。 参 考 文 献 1 国 家 食 品 药 品 监 督 管 理 局 . 合 成 多 肽 药 物 药 学 研 究 技 术 指 导原 则 S. 2007. 2 N. 休 厄 德 , H. D. 贾 库 布 克 . 肽 :化 学 与 生 物 学 M . 北 京 :科学 出 版 社 , 2005. 3 彭 师 奇 . 多 肽 药 物 化 学 M . 北 京 :科 学 出 版 社 , 1993. 4 NA IL SL, AKERSMJ. 蛋 白

42、质 药 物 开 发 与 生 产 M . 北 京 :化 学 工 业 出 版 社 , 2006. 5 王 军 志 主 编 . 生 物 技 术 药 物 研 究 开 发 和 质 量 控 制 M . 北 京 :科 学 出 版 社 , 2003.编 辑 :王 宇 梅 /接 受 日 期 : 2009 - 10 - 09(上 接 第 97页 )于 哪 类 化 合 物 ,有 助 于 剂 型 的 选 择 和 化 合 物 特 性 的认 知 ,有 利 于 对 药 物 进 行 综 合 评 价 。 晶 型 、 粒 度的 研 究 。 在 药 物 研 发 中 常 常 会 忽 视 ,对 于 水 溶 性 不好 的 药 物 ,晶

43、型 和 粒 度 对 药 物 的 毒 性 和 疗 效 有 一 定的 影 响 ,对 此 进 行 深 入 的 研 究 有 助 于 药 物 的 开 发 。 灭 菌 工 艺 条 件 。 药 物 的 灭 菌 工 艺 对 药 物 的 安 全性 影 响 很 大 ,因 此 在 进 行 药 物 工 艺 研 究 应 对 灭 菌 工艺 条 件 进 行 全 面 深 入 的 研 究 ,确 保 药 物 的 质 量 。 杂 质 限 度 的 依 据 。 如 何 确 定 杂 质 的 限 度 ,是 创 新药 物 开 发 的 关 键 环 节 ,需 要 结 合 药 物 安 全 性 的 数 据 ,并 结 合 化 合 物 的 特 点 ,综

44、 合 判 断 以 确 定 合 理 的 限 度 ,可 参 考 相 关 的 指 导 原 则 。 稳 定 性 研 究 。 应 关 注影 响 产 品 质 量 的 包 装 密 封 系 统 方 面 的 变 化 ,这 是 保证 药 物 质 量 的 重 要 方 面 。4. 4 上 市 后 阶 段药 品 批 准 上 市 后 ,鉴 于 种 种 原 因 ,药 品 的 处 方 、工 艺 ,原 辅 料 的 来 源 、 规 格 等 方 面 会 发 生 相 应 的 变更 ,具 体 要 求 参 照 即 将 发 布 的 已 上 市 化 学 药 品 变更 研 究 的 技 术 指 导 原 则 。以 上 是 笔 者 在 创 新 药 物 CMC审 评 中 的 一 些 思考 ,希 望 能 对 药 物 的 研 究 有 一 定 的 参 考 作 用 ,如 果 有不 妥 之 处 也 希 望 批 评 指 正 。编 辑 :王 宇 梅 /接 受 日 期 : 2009 - 03 - 18