1、,精液常规分析的步骤 及注意事项,简介,精子（5%） 精液组成 精囊腺液（60%）凝固因子、果糖精浆（95%） 前列腺液（20%）液化因子尿道球腺液（3%）睾丸液、附睾液 精子,精液的两个主要量化指标： 1精子总数，反应睾丸的生精状况和睾丸后管道系统的通畅程度。 2体积反应腺体的分泌能力。,精液质量分析的主要影响因素,1样本收集是否完整。射精时前面富含精子部分的精液避免丢失，后面部分精液主要是由精囊腺的分泌物构成，所以，前面部分精液的丢失比后半部分丢失对精液分析结果影响更大。 2在射精时，附属腺体分泌物冲淡含高度浓度精子的附睾液。精子浓度不能直接反应睾丸的精子产量，因为还受其他生殖器官功能的影
2、响，而精子密度对于年轻人和老年人没有区别，但精子总数（精子密度X精液体积）可能存在差异，至少人群中有部分人存在随着年龄增大而精液体积和精子下降的现象。 3精子的活力和染色体不受禁欲时间长短的影响，除非附睾功能受到影响。由于前次射精不彻底，附睾没完全排空，有部分精子残存，精子老化会影响精子质量，其程度很难确定，所以也很少做考虑。 4睾丸体积的大小不仅能反应睾丸的生精水平还影响到每次射精的精子总数和精子形态。,结论,1、精液质量的巨大生理变化是上述所列多种因素的反映，因而同精液相关的所有分析都要精确全面。 2、仅凭一次精液检查不能确定精子质量。 3、检查两到三次有助于获得可靠的基本数据。（WHO5
3、版精液分析要求） 4、虽然对整个精液样本进行了分析，但其结果并不能确定那些少数到达受精部位精子的受精能力，精液分析能为临床提供有关患者个人状况的一些重要信息。 5、样本的采集和检查都按照规范化程序进行，其结果才有价值。,基本步骤,1、将精液样本容器放置在温控台或水浴箱里（37）等待液化。 2、在30到60分钟期间，评估精液的液化情况和物理性状。 3、测量精液体积。 4、检测精液的pH值。 5、准备湿片观察显微镜下精子的活动情况，评估精子活动率。 6、制作精液涂片评估精子形态。 7、对精液进行稀释后做精子密度评估。 8、对精子进行计数。 9、如需检测精浆生化指标则对精液进行离心。,标本的采集,采
4、集注意事项,1、手淫法采集标本，精液射入一清洁广口的塑料或玻璃容器内。2、减少外界温度和样本收集到检测期间过长对精液检测结果的影响,3、标本接收要求：,禁欲2-7天，如需复查每次禁欲的天数应尽可能恒定。 标本要完整，如果不完整，需在禁欲2-7天后重新采集标本检测。 标本采集到检测不能超过3小时。,4、采集容器上标记受检者姓名、编码、采集日期和时间。,标本的采集,家中采集样本,1、对于除了在自家以外的环境下取精的确困难者，可以在家中进行样本采集。 2、给患者以明确的书面或口头形式的有关精液样本的采集和转运指导说明。 3、应强调采集样本必须完整，如有部分丢失应在报告中加以说明。 4、对已标上姓名和
5、身份证号的容器进行称重，然后交给患者。 5、患者应记录采集的时间，并在一小时内送至实验室。 6、在送至实验室途中样本应保持在2037的环境中。 7、报告中应注明样本采集的地点是在家还是在其他实验室以外的地方。 8、一定不可使用普通避孕套收集精液，因为它们一般含有干扰精子活力的成分。,采集容器的要求,标本的采集,选择数份精子浓度高和活力好的精液标本，将每份标本的一半放在已知无毒性的容器内（对照组），另一半放在待检测的容器内，在4小时内、室温或者37下每间隔1小时重复评估1次精子活力。如果每个时间点在对照组与测试组之间没有差异（配对t检验，P0.05)，即可认为待检测的容器对精子是无毒性的，达到精
6、液采集的要求。,采集容器需对精子无毒性,采集容器保持在2037环境中，避免精子射入容器后，大的温度变化对精子产生影响。,标本保温,采集后的标本需放在37保温,标本的保温,标本的液化,肉眼观察,精液送检15分钟后观察其液化状态，看其是否变得均质和稀薄， 若未液化，则在60分钟之内继续观察。若标本60分钟后不液化，则需对标本进行处理并作记录。,观察液化方法： 肉眼观察：标本变得均质和稀薄，不见异 质性混合团块。 显微镜观察：显微镜镜下观察精子不动。,液化期间，置37孵箱中，在二维遥控器上，不断地轻轻混匀样本容器，有助于产生均质的精液标本。,精液液化延迟的处理方法,1、用带有规格为18或19号注射针
7、头的注射器对精液进行反复抽吸610次。,肉眼观察,2、加入与精液体积相等的菠萝蛋白酶液或者生理培养液(如杜氏磷酸盐缓冲液）即对标本进行1：2（1+1）稀释。,精液液化延迟的处理方法,肉眼观察,注释：这些处理可能会影响到精浆的生化性质，精子活力以及精子外形，如有使用必须记录。用菠萝蛋白酶以1+1（1:2）的方式稀释精液必须在评估了精子浓度后以其结果作为说明。,1、精液液化后，采用塑料吸液管吸取精液，评估标本的黏稠度，使精液借助重力滴下，观察其拉丝的长度。正常精液为液滴不间断的从吸液管口滴下。 2、如果黏稠度异常，液滴会形成超过2cm的拉丝。 3、不完全液化标本呈均质黏性，且黏稠度不随时间而变化。
8、,精液黏稠度的评估方法,肉眼观察,将一玻璃棒插入标本，提起玻璃棒，观察拉丝长度。,精液黏稠度的评估方法,肉眼观察,精液外观,肉眼观察,肉眼观察,正常液化精液标本呈现均质性，灰白色的外观。如果精子密度非常低，精液可显得透明一些。如有红细胞，精液可呈红褐色；病人如有黄疸或服用某些维生素，精液可呈黄色。,空样本容器可能具有不同的重量，所以每一容器必须提前分别称重。将空白采集管放置电子天平上，按下“去皮键”，则此时重量显示为零。,肉眼观察,精液体积,精确测量精液体积是任何精液评价的基础,精液体积测量,肉眼观察,精液体积,将盛有精液的采集管放入已去皮的电子天平上，此时显示的为精液标本的重量。由重量计算出
9、精液体积（精确到0.1ml), 假设精液的密度为1g/ml。,不推荐将精液从移液管吸到量杯中测量 体积，因为不能完全回收精液，会低估精液体积。,精液pH,肉眼观察,1、精液液化后要在0.5-1h内检测，因为pH值会受射精后精液中CO2逸出的影响。 2、选用6.0-10.0的pH试纸。 3、充分混匀精液标本。 4、在pH试纸上均匀地涂上一滴精液。 5、等待浸渍区的颜色变得均匀（30秒）。 6、与标准比色卡比对，读数。 注：pH试纸的准确性应该按照已知标准进行检测。对于粘稠的样本，可取小份样本用专为测量粘稠溶液设计的pH量尺进行检测。,标本的混匀,标本混匀,可通过向样本中插入一个宽孔的一次性无菌塑
10、料吸液管，抽吸10次来达到混匀标本的目的。也可上下颠倒混匀10次，注意力度要轻柔。或采用专用仪器混匀。不可用高速涡旋器，以免对精子造成损伤。如果标本未混匀，则两次测量结果将出现明显偏差。,标本混匀,上下颠倒，轻轻的混匀10次,标本的取样,充分混匀后立即取样，吸取5l,标本取样,标本滴加,标本的滴加,1、移液器吸取约5l标本置于点样区域（图A） 2、轻轻地从标本上方压下盖玻片，使盖玻片的边缘刚好盖住标本（图B和C）。滑动盖玻片至图D所示的位置。这样可以消除计数区域内的气泡。,B,A,C,D,标本镜下初检,镜下初检,1、观察精子是否分布均匀，有无气泡。有气泡重滴 2、观察精子是否聚集或凝集。聚集或
11、凝集记录 3、观察有无精子。无精子离心镜检 4、观察浓度是否适宜。过高稀释,100倍镜下,无精子症,隐匿精子症和可疑无精子症,无精子症,1、充分混匀精液标本。 2、取1ml精液，以3000g离心15分钟。 3、弃去大部分上清液，在剩下约50ul精浆里重新混匀精子沉淀物。 4、在两张玻片上，各加入10ul沉淀团悬液，覆盖22mm 22mm盖玻片。 5、200倍镜下Z字形观察玻片。,x轴,y轴,任一重复样本观察到精子,两张重复玻片中均未观察到精子,离心过程中作用于精子的力（相对离心力，RCF）取决于旋转速度（N，每分钟的转数，r. p. m)和从转子中心到被力测量点（通常是离心管底部）之间的距离（
12、半径，R，cm).,RCF: 1.118 10-5 R N2,无精子症,离心机,15ml离心管的台式离心机一般达不到3000g，可使用配有1.5-2.0ml离心管的速度更高的离心机。,标本稀释,标本稀释,1、3000g离心10min取精浆做稀释液或者用生理培养液做稀释液。 2、使用正向置换式移液器将适量的固定液加入两个稀释小瓶。 3、充分混匀精液标本。 4、混匀后用移液器立即吸出适量的精液标本。 5、将精液移到固定液里，抽吸、吹打固定液。 6、再次充分混匀精液。,仪器检测浓度超过100 106/ml，建议稀释,标本镜下初检,如果标本浓度适中，计数池内精液不再漂移，则转换成20倍物镜开始分析。,
13、标本检测,标本检测,智能化仪器检测,1、提前10分钟开启仪器，待恒温加热板加热至指定温度。 2、将滴加的计数板放置仪器中，选择检测模式，仪器自动进行检测。 检测注意事项： 1、一份标本检测两次。 2、每份标本满足200条精子检测需求。,标本检测,精子活力分类, 运动活跃型（PR）：精子运动活跃、线性运动或者在较大的范围内运动（不考虑运动的速度）。 非运动活跃型(NP)：精子运动但不活跃，如精子在较小的范围内运动，精子头部轻微移位或尽有鞭毛摆动。 完全不动型（IM）：精子完全不动。,标本检测,每次计数200个精子，计数两次，取均值。差异大时， 需重新计数。,两次精子计数可接受的误差,相差环的调节
14、,仪器维护与保养,对中调节： 用对中望远镜换下目镜； 转动对中望远镜的上部，调节聚焦，让亮环（环形槽）和暗处在视野中清晰可见； 转动两个对中螺丝，让亮环和暗环同心重叠，如图（c）； 卸下对中望远镜，重新装上目镜，开始相衬观察；,显微镜灯的保养,仪器维护与保养,仪器维护与保养,显微镜灯的保养,灯泡注意事项：1、确认光源亮度处于最小位置，打开显微镜灯光，预热5分钟再开始使用。2、不用时需将灯光调至最小。3、若灯光亮度不能满足相差检测需求，应及时更换灯泡。若仍没有效果，建议更换显微镜。,双池精子计数板,使用要求： 1、深度进行校验，底板盖板配套使用。 2、勿用酒精等有机溶剂浸泡。 3、擦拭需仔细，可
15、通过将盖板放到四个平面上，观察四个接触点彩色边纹(Newton现象)来检查。,Geoffrey,特点： 1、双载物平台设计适用于WHO第5版规定的对同一份标本进行两次抽样检查的需求。 2、采用更为精密的加工工艺，用四个红宝石定位计数池的高度和平行度。,精子计数板,双池精子计数板 盖板使用方法,无网格盖板：仅适合精子分析仪使用。网格盖板：适合仪器与人工同时使用。,左侧为“九宫格”形，在4个角为人工分析区（R），适合人工检测，其他5个空白网格区为仪器分析区（Y），适合仪器检测；右侧为36个0.5mm0.5mm的小格(X)，适合仪器检测，可任意预置5-10个小格（视野）进行检测，提高随机化的程度。标本滴加后，可观察四个网格区内精子分布的大致情况，若四个网格区的精子分布数量有明显差异，提示精子分布不均，需重新抽样滴加标本。,精子计数板,谢 谢！,
