1、 ACCESS 化学发光常见问题 Beckman Coulter ACCESS 系列全自动微粒子化学发光 免疫分析系统 常见问题及答疑 ACCESS 化学发光常见问题 目录 第一部分：化学发光基础知识 第 1-17 问 第二部分：仪器应用部分 第 18-76 问 第三部分：项目应用部分 第 77 109问 ACCESS 化学发光常见问题 第一部分： 化学发光基础知识 1 什么是化学发光，与放免、酶免比较有何不同？ 化学发光免疫分析（ Chemiluminescence Immunoassay， CLIA）是将化学发光与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。 化学发光
2、免疫分析比放射免疫，酶联免疫具有更高灵敏度，具备操作简便、快速的特点，易于标准化操作。且测试中不使用有害的试剂，试剂保存期长，应用于生物学、医学研究和临床实验诊断工作，成为非放射性免疫分析法中最有前途的方法之一。 （ 1）与放免（ RIA）产品比较 与放射免疫试剂（ RIA）比较，化学发光避免了放射性核素的污染以及对操作人员的伤害，大大缩短了反应时间，同时兼具高灵敏度的优势。 （ 2）与酶免（ ELISA）产品比较 灵敏度与可测范围远远高于酶免产品，兼具 ELISA 法简便的操作方法与较短的反应时间。 2 什么是标记免疫技术，它的三大要素是什么？ 将 Ag 或 Ab 用标记物 (如荧光素、酶、
3、放射性同位素、化学发光物质等 )进行标记，在与标本中的相应 Ab 或 Ag 反应后，可以不必测定 Ag-Ab 复合物本身，而测定复合物中的标记物， 通过标记物的放大作用，进一步提高了免疫技术的敏感性。 三要素： 通常在检测系统中会使用到一种叫标记物（ labeling）的物质 ,常标记在抗体上 通常会有一个分离（ separation）的过程在最后读取信号前 需要去仔细关注一下分析的模式（ format） 3 标记免疫技术主要有哪几种？ 主要经历了四种标记免疫技术的发展： 荧光素 (Fluorophores) FIA 放射性同位素 (Radioisotopes) RIA 酶 (Enzymes)
4、 EIA 化学发光物质 - CLIA 4 ACCESS 化学发光原理？ 分析方法及过程 ACCESS 系统采用磁性微粒作为固相载体，以 AMPPD 作为发光剂，固相载体的应用扩大了测定的范围。以竞争法、夹心法等免疫测定方法为基础。试剂包装采用特殊的设计，每个试剂包有5 个小室分别把不同的试剂分开，减少了交叉污染，保证了检测质量。 、抗原抗体结合：将包被单克隆抗体的顺磁性微粒和待测标本加入反应管中，标本中的抗原与微粒子表面的抗体结合，再加入碱性磷酸酶标记的抗体，经温育后形成固相包被抗体 -抗原 -酶标记抗体复合物。 、洗涤、分离：在电磁场中进行 3 次洗涤，很快将 未结合的多余抗原和酶标记抗体洗
5、去。 、加入底物 AMPPD 发光剂： AMPPD 被结合在磁性粒子表面的碱性磷酸酶的催化下迅速去磷酸基因，生成不稳定的中介体 AMPD。 AMPD 很快分解，从高能激发态回到低能量的稳定态，同时发射出光子，这种化学发光持续而稳定，可达数小时之久。通过 光量子阅读系统记录发光强度，并从标准曲线上计算出待测抗原的浓度。 ACCESS 化学发光常见问题 5 什么是钩状效应（ hook effect），如何判断及解决？ 免疫测定的实质是抗原抗体反应，抗原抗体反应是按一定的分子比例结合，当二者比例适中时，形成的免疫反应最 强烈，形成复合物或检测的信号与所测的抗原或抗体成比例关系，但当抗原或抗体其中一者
6、过量时，免疫反应将减弱，测定值呈现假性低值。 在化学发光中像二步分析法一般都能避免钩状效应，对于一步夹心法项目说明书中都提到了产生钩状效应的上限如人绒毛膜促性腺激素的钩状效应值是 100万 mIU/ml.在实际工作中如遇到测定值与临床严重不符的结果要考虑到钩状效应，解决办法是稀释此样本。 磁性微相载体，为抗原 提高发光强度、快速达到稳定、持续发光 。 6 什么是嗜异性抗体？ 病人样品中可能自然产生一些针对动物免疫球蛋白的抗体 (通常是鼠 或羊 )，一般来源于暴露于这些动物或接受过动物血清的治疗 ， 分析的干扰 ： 可以在双单克隆夹心法分析模式中引起假阳性，可以在单克隆 /多克隆分析模式中出现假
7、阴性。 厂家在试剂生产中会加入封闭剂，封闭剂可以加在反应基质中或整合在试剂盒内：鼠 (鼠科类 ), 鸟 (鸟科类 ) 和羊蛋白，各个厂家生产的分析试剂都有可能会不同程度的受到任何一个病人血清的影响！当遇到与临床不符的结果时要询问病史看是否有嗜异性抗体的干扰。 7 什么是基质效应？ 基质是 指的是样品中被分析物以外的组分。基质常常对分析物的分析过程有显著的 干扰，并影响分析结果的准确性。 目前最常用的去除基质效应的方法是，通过已知分析物浓度的标准样品，同时尽可能保持样品中基质不变，建立一个校正曲线（ calibration curve）。 8 稀释样品时稀释物不对为何有基质效应？ ACCESS
8、化学发光常见问题 我们在稀释样品时要考虑到基质效应的影响，稀释必须在适当的基质中进行，对于大多数测定而言，适当的基质就是零校准品， 如果分析物稀释基质效应中所含成分浓度不正确，稀释回收率就不能对它们进行准确的测定，因为它们稀释后会与 Bing agent 形成新的平衡。 9 什么是 AMPDD，化学结构，如何 发光？ AMPPD 是一种金刚基二螺 4， 4二氧己烷的磷酸酯。经 ALP 水解生成一种不稳定的阴离子，该阴离子分解时持续发光。发光强度稳定，与 ALP 量成比例。 化学式是 4-甲氧基 -4-（ 3-苯磷酸盐）螺 -（ 1， 2-二螺 4， 4二氧己烷 -3， 2 -金刚烷 10 试剂
9、盒中有哪几种试剂，作用都是什么？ 有五个仓，以 FRT4 为例： R1a: 包被着链霉亲和素的 Dynabeads* 顺磁性微粒溶于 TRIS 缓冲液 含有蛋 白质 ( 鸟类 )、表面活性剂、 0.125% NaN3和 0.125% ProClin* 300。 R1b: 含蛋白质 ( 鸟类 )、表面活性剂、 800000的试剂名称改为 E2;批号为 722861以上的定标液里面有两张卡，黄卡用于 E2（ 243） ,白卡用于 Estrdl（ 203） 以下项目也属于此情况：游离 T3、游离 T4、生长激素、甲状腺球蛋白抗体、癌胚抗原。 详细说明请参阅试剂盒中的 说明。 32 hTSH 定标液里
10、有三张卡，如何使用，有何区别？ 该测定能提供第三代 ( 超敏 hTSH) 和 / 或第二代 (快速 hTSH) 的结果。 Fast hTSH 测定的一个 APF 修改新的检测 ID 为 246 测试名为 fTSH2，修改后的两种版本的 ACCESS FasthTSH protocol 协议都将提供校准卡 . 测试名 测试名 检测号 所用校准卡颜色 AccessFasthTSH（ modified） fTSH2 246 蓝 Fasth TSH Fast hTSH 206 黄 HYPER hTSH TSH 183 白 快速 hTSH与 hTSH区别： 快速 hTSH hTSH 样本量 l 55 1
11、10 反应时间（分钟） 20 45 分析灵敏度 uIU/ml 0.01 0.003 33 PSA 和 fPSA 定标液里有两张卡，如何选择，有何区别？ Access PSA 校 准品 对 PSA 可以提供 Hybritech （白卡）和 WHO（黄卡） 两种溯源定标，供用户自由选择。 Hybritech 校准： Access Hybritech PSA Calibrators 内的分析物可溯源至生产商的工作用校准品。 WHO校准：通过与一组标准化为 PSA (WHO 96/670)第一国际标准品 (1st IS)进行比较，对原参考 校准品 Access Hybritech PSA Calibr
12、ators 内的分析物进行溯源。 Hybritech PSA 检测范围： 0.008-150ng/ml 参考范围 0-4ng/ml WHO PSA 检测范围： 0.008-121ng/ml 参考范围 0-3.1ng/ml 34 TnI 定标都应该注意什么？ 注意收到 TnI 定标液后即冷冻在 -20或 -20以下环境中，使用前要轻轻倒转以彻底混匀成分，防止形成气泡，每次使用完后放在 2-8（稳定期可维持 60 天），不要再冷冻已打开的小瓶。请注意计算 TnI 定标液使用量， S0 与 S1 点定标液都要重复四次，所以计算定标量： 死腔量 +样本量 4 ACCESS 化学发光常见问题 其他 S0
13、 与 S1 都要重复 4 次的项目还有： E2 及 Prog定标液 S0 重复 4 次， S1 重复 3 次。 35 样本值如果超出线性范围，该如何稀释样本？ 具体请查阅“发光项目速查”，“稀释液”部分，样本稀释分为 5 种：冲洗缓冲液（如 TBhCG2，DHE-S） , S0 或样本稀释液 A（ 81908） ,S0（有货号）， S0, 样品稀释液 A（ 81908） ,请按照说明使用正确的稀释液，否则因基质效应会造成实际结果偏差。 36 结果后的异常信息注释如何看？ 详细请参阅 SOP 中异常结果信息注释部分，现就几种常见错误信息代码进行解释： （ 1） UNR 和 IND 是因为该样本光
14、量子值超出 S0或 S5（定标液 最高点）的光量子值 Access Classic Access 2, SYNCHRON LXi, or UniCel DxI 800 UNR: For sandwichassays, which use positive slope curves, the result is at the low dose end of the curve (S0) and cannot be distinguished from a system failure because the relative light unit (RLU) reading is too low
15、. For competitiveassays, which use negative slope curves, the result is at low end of the dose curve (S0) and cannot be distinguished from a system failure because the RLU reading is too high. IND: For sandwichassays, which use positive slope curves, the result is at the low dose end of the curve (S
16、0) and cannot be distinguished from a system failure because the RLU reading is too low. For competitiveassays, which use negative slope curves, the result is at either: The highend of the dose curve and cannot be distinguished from a system failure because the RLU reading is too low or The lowend o
17、f the dose curve and cannot be IND: For competitiveassays only, which use negative distinguished from a system failure because slope curves, the result is at highend of the dose the RLU reading is too high. curve (S5 or highest calibrator) and cannot be distinguished from a system failure because th
18、e RLU reading is too low. ACCESS ACCESS2、 DXI800 UNR：对于 夹心法，样本 RLU 结果太低在 S0RLU值边缘以致仪器不能与系统错误区分。 对于竞争法：样本 RLU 结果太高在 S0RLU值边缘以致仪器不能与系统错误区分。 对于夹心法，样本 RLU 结果太低在 S0RLU 值边缘以致仪器不能与系统错误区分。 对于竞争法： (1)样本 RLU 结果太高在S0RLU 值边缘以致仪器不能与系统错误区分。 （ 2）样本 RLU 结果太低在S5（定标液最高点） RLU 值边缘以致仪器不能与系统错误区分。 IND：只对于夹心法，样本 RLU 结果太低在
19、S0RLU值 边缘以致仪器不能与系统错误区分。 ACCESS 化学发光常见问题 37 如何计算 ACCESS、 ACCESS2 样本量尤其是定标液的量？ 总样本量 =A 样本检测量 +B 样本容器死腔量 +C 样本主探针多吸量 A 样本检测量是指每一个请求测试所需的样本吸取量的总和。要找到每一个检测项目相应的样本吸取量，请查阅化学发光项目速查 吸样量部分。 B 样本容器死液量是指在容器中的不能被仪器分样吸取的样本量。 2ml样品杯死液量为 150ul 0.5ml样品杯死液量为 80ul C 样本主探针多吸量为 20 L 或者 5% 的检测样本量，哪一个数值较 大就以哪一个进行计算。 总定标液量
20、 = A 样本检测量重复次数 +B 样本容器死腔量 +C 样本主探针多吸量 请注意：一般项目重复次数为 2，计算 TnI、 E2定标液使用量， S0 与 S1 点定标液都要重复四次， Prog 定标液 S0 重复 4 次， S1 重复 3 次。 38 如何计算 DXI800 样本量尤其是定标液的量？ 计算足够的样本量 总样本量 =A样本检测量 +B反应管死液量 +样本主探针多吸量 +样本容器死液量 A 样本检测量是指每一个请求测试所需的样本吸取量的总和。要找到每一个检测项目相应 的样本吸取量，请查阅化学发光项目速查 吸样量部分。 B 反应管死液量是指在反应管中的不能被仪器使用的样本量。对于每
21、500 L 样本检测量，其反应管死液量是 60 L。 C 样本主探针多吸量为 20 L 或者 5% 的检测样本量，哪一个数值较大就以哪一个进行计算。 D 样本容器死液量是指在容器中的不能被仪器分样吸取的样本量。 2ml样品杯死液量为 150ul 0.5ml样品杯死液量为 80ul 举例 肌钙蛋白检测的样本吸取量是 40 L， CK-MB 检测的样本吸取量是 55 L。以下举例说 明如果您使用 2 mL 样本杯对上述两个项目进行检测，应该如何计算总的所需样本量。 A 请求测试的总的样本吸取量 (40 L + 55 L) 95 L B 对 A 中数字，每 500 L 需要 60 L 60 L AC
22、CESS 化学发光常见问题 C 20 L 或 5% 的 A 中样本量数字 (5.5 L)，使用较大的一个数字进行计算 20 L D 2 mL 样本杯的死液量 (见表 A-2) 150 L 总的所需样本量 325 L 总定标液量 = A 样本检测量重复次数 + B 反应管死液量 +样本主探针多吸 量 +样本容器死液量 请注意：一般项目重复次数为 2，计算 TnI、 E2定标液使用量， S0 与 S1 点定标液都要重复四次， Prog 定标液 S0 重复 4 次， S1 重复 3 次。 39 、 ACCESS2 和 DXI800 架号设置，规格不同为什么不能混用？ 对于 ACCESS2 样品架 为
23、了容纳大小不同的样品容器，仪器使用三种不同类型的样品架： 13 mm(用于 12 mm 和 13 mm 样品试管 ) 16 mm 抬升 ( 用于 16x75 mm 样品试管 ) 16 mm(用于 16x100 mm 样品试管 ) 系统扫描样品架条形码标签 ，确认样品架上样品容器的类型，然后系统可以此确定吸入样品时使用合适的移液器插入深度。 注意事项： 仅可将样品容器安装在贴有正确条形码编号的样品架上。 Access 2.0 mL/13 mm 样品杯 边缘：暗绿色 样品架编号： 1 - 99 or 400 -499 (仅 400 - 499 带有此图标 ) 死体积： 150 L 样品架： 13
24、mm 对于 DXI800 应按如下程序进行管类型设置。 主菜单下按 F8-系统设置；选择 F1 系统设置 选择 F8架子号设置 选择 F2 Add Racks 选择相应 架子号和相应规格样品杯、试管。 40 定标液储存条件注意事项？ HCG： -20 度保存，每次使用间复溶 Folate/RBC Folate：开瓶前 -20 度保存 Free T3：开瓶前 -20 度保存 Progesterone：开瓶前 -20 度保存 Prolactin：开瓶前 -20 度保存 注意：在定标液盒外表有一温度计标志，提示保存条件。 41 定标液为冻干粉的一些注意事项？ 如 CK-MB Insulin T Up
25、take 冻干粉定标液复溶：复溶水的水质 加样容器的准确度 加样 的技术 混匀 /旋转 复溶后定标液保存： 使用合适的冷冻保存试管 正确标签 无霜冰箱保存 42 有些项目定标失败后如何处理？ 当定标失败时，有以下几种常见的错误代码： ACCESS 化学发光常见问题 （ 1） Insuff Data 由于定标液不够或仪器错误导致某一点浓度定标测试被取消； （ 2） Not Fit 测得足够数据，但软件不能将其拟合为曲线； （ 3） Max Iter 软件能拟合曲线，但不能得出最佳拟合； （ 4） Bad Fit 软件拟合到最佳曲线，但曲线未通过软件的精密度协议文件； （ 5） CV std 0
26、重复测试的 CV%超出范围；（仅用于 TU） 错误原 因分析原则及步骤 （ 1 ） 检查错误信号的内容，看是否有“ QNS”，或系统错误而 导致定标失败； （ 2 ） 观察各点结果精密度；如果精密度良好，错误有可能来自 某些操作失误；再观察 RLU 值是否接近上一次对应的值； （ 3 ） 检查是否作了每日保养及每周保养； （ 4 ） 观察定标得到的目标值浓度是否接近印在定标卡上的值， 如果不是，则可通过系统设置来修改对应的值； （ 5 观察 RLU 值是否随曲线平滑上升（夹心法）或下降（竞争法）， 如果不是，须检查是否把定标液位置摆错，或者某一浓度的定 标液受到污染； （ 6） 如果定标曲线非
27、常平坦，而且 RLU 值很低（夹心法）或 RLU 值很高（竞争法），表明使用了错误的定标液或试剂盒； （ 7） 如果定标曲线平坦，且不论夹心法或竞争法， RLU 值均很低， 则须检查发光剂是否用完或发光剂液路是否正常； （ 8） 如果定标结果精密度较差，原因可能是： 缓冲液或发光剂液路内混入气泡； 采样针太脏； 清洗转盘混匀功能故障； 超声系统故障； 与排液或吸液有关的泵或 阀门故障。 43 化学发光项目是否可以使用血浆等其他样本类型，有无影响 ACCESS 化学发光常见问题 并不是所有的免疫项目都可以使用血浆，具体请参阅项目说明书或项目速查表，样本类型：描述，如 FT3 可以使用血清、血浆（
28、 H）肝素抗凝，对同一患者必须使用同一样本类型监测。 44 样本溶血、脂血对化学发光结果项目有影响吗？ 样本溶血、脂血、黄疸对化学发光项目同样是有影响的，不过影响机制与影响比色等项目不同。如溶血对胰岛素影响是因为样本溶血后红细胞释放一种胰岛素灭活酶而使样本中胰岛素浓度减少。不同项目对样本禁忌要求不同，具体请查阅“化学发光项目速查 样本 禁忌内容”。 45 样本分析前处理都应该注意什么 ? 有以下几点需特别注意： 一、 采血管质量，有无失效，添加剂是否适当，采血员专业水平 二、 采血量是否适当，是否及时进行混匀，血浆应该 8-10 次，血清应该 5 次。 三、 血清凝固时间是否充足，离心是否彻底
29、，离心机是否定期校正。 四、 贮存条件是否适当。 46 对于一些测试发生错误如何分析？ 不同项目发生错误应该按照相应方法去重点分析原因。 2 步分析法 对传送位置 /调整非常敏感 需预处理的项目，如： 衣原体 (Chlamydia) 红细胞叶酸盐 (RBC Folate) 尿可的松 (Urine Cortisol) 需要稀释的项目， 对精密泵较敏感。如： AFP (1/20) Cortisol (1/9.6) Dil-TotBHCG(1/200) Myoglobin (1/50) Rubella IgG (1/10) Toxo IgG (1/40) Most ID/BV assays 高光量子
30、值的测试，如： CK-MB Myoglobin Troponin-I 所有感染性疾病项目 对磁性微粒子粘度敏感的项目，与试剂盒混匀 /调整有关。如： Vit B12 Chlamydia RBC Folate/Folate 47 结果差异处理流程？ （ 1）是否仅发生于病人标本结果？ 是否同时发生于病人标本与质控标本？ ACCESS 化学发光常见问题 （ 2）只发生于病人标本时 ： 检查病人标本处理过程 （ 3）同时发生于病人标本 /质控标本时： 检查其它项目结果是否差异？ 如果是 ， 检查仪器性能状态 （ 4）如果只发生于 1 种项目， 首先须排除该项目敏感的仪器因素 （ 5）如果排除仪器因素
31、后， 进入该特定项目故障排除流程 48 为何有的项目定标通过后试剂盒处仍显示红色未定标？ 这种情况一般发生在 TSH、 PTH、 PSA 等有两种测定模式的项目，下面以 PSA 为例说明： 在 PSA 定标液盒中有 Hybritech （白卡）和 WHO（黄卡） 两种溯源定标，供用户自由选择。 如选择白卡进行定标，请将 PSA-Hybritech （ Test 170）测试激活， 将 PSA-WHO（ Test 231） 项目关 闭， 如两种测试均激活，即使定标通过后试剂盒仍显示红色。 49 ACCESS、 ACCESS2 的耗材能在仪器运行中加载吗？ 对于清洗缓冲液、废液、 RV 管、试剂可
32、以在运行中随时加载，而底物、 RV 废物袋只有在处于 Ready 时才能更换，在运行前请检查并加足耗材。 50 如何查阅仪器的报警信息？ 对于 ACCESS，请按 eventlog 键按钮查询仪器的所有报警信息。 对于 ACCESS2、 DXI800 事件日志（ Event log） 选择来显示事件日志屏幕以获得关于 Access 2、 DXI800系统所中发生事件的信息。 黄色 系统产生了一个注意事项事件。 红色 系统产生了一个警告事件，提示一个严重的故障或错误情况的发生 这些信息包括： 可能引起事件的原因 故障排除指示的要点 与详细步骤的连接。 51 暂停（ Pause）和停止（ Stop
33、）键有何区别？ 暂停 选择该按钮来暂停仪器，系统在完成对当前样品的移液后会停止移液。已在进行中的样品将继续处理。 停止 选择该按钮停止仪器。系统停止运行并取消任何进行中的检测。 52 在保养中何时 运行特殊清洁例行程序？ 如果使用 Access 2、 ACCESS、 DXI800系统来处 理维生素 B12（因试剂粘度较高） 分析，那么在每日工作结束后或者仪器在八小时或更长时间内不处理样品时，都应运行特殊清洁例行程序。 53 样品针通过什么原理检测样本中的 凝块？ 装有压力检测器的仪器通过监测吸取样品所需的压力，能够在吸取样品时探测主探头内的凝块。若吸取样品所需的压力超出了可接受的限度，那么检测
34、将被取消并标记 CLT( 凝块 ) 重大标记，且会记录下此事件。若同一个样品连续发生了两次该错误，任何该样品未完成的检测将被取消。若同一个样品连续发生了五次该错误，那么当正在运行的检测分析完成时，系统将中止预定任何其它检测并进入 未就绪 模式。操作人员此时必须初始化系统并且检查，清洁或必要时，替换探头。 54 如何使用 Reflex（追加测试）？ 以 Dil-hCG2为例说明方法： 主屏幕下 F8设置 F5追加测试 F4添加测试 Reflext Test ：选择需追加测试如 Dil-hCG2，在 Condition中编辑： T hCG2=OVR，点 F1，在 EnableACCESS 化学发光
35、常见问题 处打勾即可。对于 DXI800须进行 保留体积设置或反射体积设置。 55 对于妇产医院经常对 hCG经常先做 152+,如测定值小于 1000再自动进行 15+这 时如何设置条件 ? 这时条件设置公式为 :Dil-hCG=4 AND PSA-Hyb 1000 mIU/mL 总 hCG 的样本进行测定，选择 Dil-hCG2（ 152） 作为测试名。 两种测定可用同一试剂盒和同一定标曲线， 定 量测定含 1000 200000 mIU/mL的样本，选择 Dil-hCG2测试。此测试使用 T hCG2试剂盒。 当需要 Dil-hCG2，系统自动用缓冲液稀释样本并从 T hCG2 校准曲线
36、上读取相应的剂量。这一系统通过乘以软件定义的稀释系数 (200) 来计算最终测试结果。 AFP 与 Dil-AFP也属此情况。 60 如果遇到 T hCG2（ 151+）做出来结果提示 1000 mIU/mL 的标本，我使用 Dil-hCG2（ 152+）重做，结果又提示 =719534 试剂盒可与人血清或血浆（ EDTA）样本一起使用，但在监测病人胰岛素水平时应保持使用相同的样本类型。 84 TSH 为何称之为 HYPERsensitive hTSH,第三代？ ACCESS 化学发光常见问题 贝克曼超敏 hTSH 测定的性能 符 合 hTSH 测定的“第三代”功能灵敏度 规 定的要 求 0.
37、01 0.02 IU/mL(mIU/L) 且 批 间 测定 %CV 20%。而快速 hTSH 测定的性能 符 合 hTSH 测定的“第二代”功能灵敏度 规 定的要 求 0.1 IU/mL (mIU/L) 且 批 间测定 %CV 20%。 85 为何在临床中测定 Tg 必须与 TgAb 同时测定？ 血清甲状腺球蛋白自身抗体 (TgAb) 的存在对甲状腺球蛋白 (Tg) 测定具有干扰作用。所以，只要是含有 TgAb，即使是含非常低水平 TgAb 的血清，都不能用来做 Tg 测试。 86 测定 TT3、 TT4 时应该注意什么？ TT3、 TT4 是检测甲状腺功能的基本指标，但易受 多种因素的影响，
38、总的 TT4（或 TT3）由结合的和游离的两部分构成，后者仅占 0.5%左右， 影响 TBG(甲状腺结合球蛋白 )的因素都可使 TT3、 TT4 升高和下降。 FT3、 FT4 是判定甲功状态的敏感指标，不受 TBG 的影响。 87 对于原发性甲减和继发性甲减，甲状腺激素和 TSH 如何变化？ 原发性甲减： FT3、 FT4均低， sTSH 高；继发性甲减： FT3、 FT4 均低， TSH 低或正常 88 对于 hTSH 临床应用有何注意问题？ 在诊断早期的 /亚临床的甲低或者甲亢状态， TSH 表现更加灵敏，在不稳定状态的个体（正在 接受治疗的患者）， FT4/FT3 的浓度要更加可信，在
39、重新调节 TSH/FT4 的分泌平衡过程中，TSH 的反映要慢一些。尤其是对于甲低的患者，服用 L-T4 要 2 3 个月 TSH 才会表现与 FT4的协调。 89 ACCESS 系统中糖类抗原 CA125、 CA199、 CA153 的名字？ 糖类抗原名称 ACCESS 名称 Test ID CA153 BR15-3Ag 193 CA199 GI19-9Ag 159 CA125 OV125Ag 175 90 心肌标志物如何在心肌细胞内分布和释放的？ 心肌标志物主要包括肌红蛋白， CK-MB 和肌钙蛋白。根据这些蛋白质的尺寸大小和所处位置决定其释放的时间。最小的肌红蛋白存在于细胞质内，首先释放
40、。存在于核子和线粒体内的 CK-MB 随后释放。而存在于收缩器内结构蛋白 cTn 要等细胞完全裂解后才会释放，专家一致认为心肌细胞死亡后，cTn 才释放。 91 肌钙蛋白复合物由哪些亚单位组成？ 肌钙蛋白复合物存在于所有类型的横纹肌细胞中，由三种亚单位组成： I， T 和 C。其中只有 I 和 T 具有心肌特异 性，所以可以作为心肌特异性的指标。肌钙蛋白复合物扮演一个传递 Ca 信号引起肌肉收缩的角色。 92 外周血循环中肌钙蛋白 I 主要以哪些形式存在？ 在外周血循环中， cTnI 可以有多种形式存在，很多是以复合物的形式存在，如二元 TnI-TnC 复合物， TnI-TnT 复合物，或三元
41、 TnI-TnT-TnC 复合物，其中二元 TnI-TnC 复合物为主要ACCESS 化学发光常见问题 部分。另有少量以游离 cTnI，游离 cTnT，降解 /氧化的 cTnI 或磷酸化 /非磷酸化 cTnI 形式存在。 93 肌钙蛋白 I 的分子结构如何组成的？ 肌钙蛋白 -I 分子由 200 个氨基 酸组成，其心肌特异性在 N端的 132AA所提供。肌钙蛋白-I 的分子结构不是很稳定，在体内或体外会被蛋白水解酶所降解，常从 C端开始，甚至 N端，最稳定的部分在 AA 30-110 区段。整个分子结构中含有 2 个丝氨酸，在体内会被蛋白辅酶 A 所磷酸化。磷酸化后的 cTnI 分子结构会发生
42、改变，影响抗原抗体的结合。另外。分子结构中的 2 个半胱氨酸，会被氧化降解，改变结构影响抗原抗体的结合。肌钙蛋白分子表面带强阳电荷，容易干扰 Ab-Ag 的结合。如，肝素，一个带负电荷的分子，与 cTn 结合后干扰免疫检测。 94 为什么抗体的选 择对肌钙蛋白检测的结果正确性十分重要？ 由于肌钙蛋白 -I 分子结构的不稳定性，所以在进行分析设计中对抗体识别位点的选择就由为重要，直接影响到结果的准确性。抗体识别位置必须选择在分子结构的稳定区域 (30-110 AA)；抗体针对所有的 cTnI 形式的识别 (游离的，复合的 IC， ITC) ，实现等分子(Equimolarity)的检测；抗体选择
43、位置不会出现磷酸化和氧化的干扰。 95 引起不同厂家生产的 cTnI 试剂所检测结果不一致的原因是什么？ 造成不同厂家生产的 cTnI 试剂所测结果不一致的主要原因包括：使用不同的 标准品 (可能引起 2-20 倍差距 )；抗体的不同而出现的抗原识别位点的不同，如游离的和 IC 复合物的TnI 或不同抗原位点的抗干扰能力，如：蛋白水解酶，磷酸化，氧化等影响和使用不同的样品类型，如：血清，血浆 (肝素或 EDTA)。 96 如何去选择和判定一个优秀的 cTn 检测试剂？ 一个优秀的 cTn 试剂应符合 NACB/?FCC/ESC/ACC 指南中所提及的对检测试剂的要求，我们了解其相应的一些指标，
44、如： 99%分位值的比值，此值越接近 1 越好 （贝克曼库尔特最接近） ，是反映试剂灵敏度和精密度的一个综合表现 。试剂的抗干扰能力，如减少 HAMA 效应，嗜异性抗体， RF 和其它的分析干扰。降低对样品类型的要求，如可以是血清，血浆 (包括肝素抗凝 )。样品周转时间 (TAT)的要求是否到达 99%分位值和 99%分位值为表示正常人群检测结果的 99%所覆盖的这一点的值，如： AccuTnI为 0.04ng/mL。99%分位值的比值是否更接近 1，此是与临床意义的要求相符合。 100 除心肌缺血引起 cTnI 升高外，还有哪些状况或疾病会引起升高？ 必须十分清楚的认识到除了心肌缺血外，还有
45、一些临床状况会导致心肌受损而引起 cTn 水平的升高。例如：外伤 (包括挫伤、切除、电击伤、心肌活检、心脏手术等 )，充血性心衰 (急性或慢性 )，高血压，低血压伴心率不齐，非心脏手术病人手术后，肾衰，糖尿病，甲状腺机能减退，心肌炎，肺栓塞，脓血症，烧伤，淀粉样变性病，急性神经系统疾病，心肌受损后的横纹 肌溶解，衰竭等。 ACCESS 化学发光常见问题 101 贝克曼 AccuTnI 的正常人群上限值 (URL)是多少？ 对于一个特异性指标如 cTnI，只要有一个正常健康人群的上限值 (URL)，如结果低于 URL 意味没有临床意义。目前，有 2 不同的 URLs 建议值，分别是 97.5 t
46、h 和 99th 分位值，分别由 NACB 和 ESC/ACC 推荐。贝克曼 AccuTnI 的这二个分位值分别是 URL 97.5th： 0.03 ng/mL和 URL 99th： 0.04 ng/mL。 102 切点 (Cut-off)的概念是什么？ 最理想的 切点 是能将二个不同人群完全分开， 例如疾病人群和正常人群。而实际状况是人群之间会有一个交叉，所以 切点 就只能在临床灵敏度和特异性之间寻找一个相对的平衡点，也就是说需符合临床的大多数的需求。 103 如何来应用 AccuTnI 的 切点 ？ 目前， 有 二个 切点 通常被建议使用，分别是 URL 和 AMI 的 切点 。第一个 切
47、点 区分正常人群和非正常人群，而第二个 切点 是区分 AMI 和非 AMI。 AMI 的 切点 是通过 ROC 曲线分析得出，推荐值为 0.50 ng/mL，并可到达 96%临床灵敏度和 94%临床特异性。 104 在进行心肌损伤标志物检测时应该同步检测相关标志物。三种标志 物 Myo、 cTnI、 CK-MB有何意义？ 肌红蛋白（ Myoglobin， Myo）：是目前心肌受损后最早发生异常的心肌蛋白标志物 ,AMI发作 2h 后的血清 Myo 即开始升高， 4-6h达高峰。由于 Myo无心肌特异性， 肌红蛋白的阴性有助于排除 AMI 的诊断 ；使用该标志物的最佳战略是利用它的高阴性预测值和
48、灵敏度以排除心肌梗死。 肌钙蛋白 I(CTn I)：是目前国内外公认的、特异性最高且持续时间最长的诊断心梗的可靠指标和 “ 金标准 ” 。心肌肌钙蛋白一般在心肌损伤后 4-8小时在外周血中逐渐增高，最高值在 12-24小时 出现。在心肌损伤后 7-10天外周血中仍可探测到增高的心肌肌钙蛋白。急性心梗病人的血中 cTnI 浓度可高达 100- 300ng ml。主要用于对心肌损伤 -特别是微小损伤的诊断，还可用于心脏手术时心肌缺血的可靠指标，可用于评价心肌的保护性措施。急性心梗后溶栓治疗的指示物；判断再灌注效果。 CK-MB:是目前临床医生最信赖的心肌酶传统 AMI检测的 “ 金标准 ” ， 特
49、异性较高 。 在进行心肌损伤标志物检测时应该同步检测相关标志物。三种标志物 Myo、 cTnI、 CK-MB 释放的时间是不同的，同时快速测定三 种标志物，较单独测定，更方便，更快速，时间上同步更利于对结果的分析和判断，从而更能够做到快速、准确诊断，是心梗实验诊断的最新要求和趋势。 ACCESS 化学发光常见问题 105 Hybritech 游离 PSA 的临床意义？ 检测游离 PSA 对总 PSA 的百分比，可以提升前列腺肿瘤检测的正确性。 PSA 在血液中以多种形态存在。大多数的 PSA与蛋白结合，但有些以游离模式存在。在 1990 年代早期，人们发现测定 “ 游离 ” 和 “ 总的 ”PSA 的比率可以进一步帮助区分前列腺肿瘤和良性前列腺疾病。 贝克曼库尔特公司 Hybri
