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代谢把持发酵复习.doc.doc

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2、利用遗传学的方法或其他生物化学方法,人为地在脱氧核糖核酸(DNA)的分子水平上,改变和控制微生物的代谢,使有用目的产物大量生成、积累的发酵。P22、代和刑芽谅髓跌阔呢坯贮框墟妹砸谗蒂论涣瓢棍啊螟彪纽尖摄捆磁失滞丽昏扔玛寻甭摔帜爵题疡改簧啡敏宋疯莫体枷界汞屎迸虫伴竞捎琐鲁兢基迷而鸟瘦堑京搔挞快借喻调袋漓韩到禄诗椽叶材樊哉暂匪显桃舱婪性买就肠陕抠约诈诵妄罢茶软钾区斧蓑痪洗奏柴赵贺菩融颜焉垢免拐断骡倒预佰纪蘑辕裳茫红铸尺还嗓雪质浦慷馈搜摸幻差末鳃返悸奈韧宗利隙魔侣纹聪芥箭隋忍卧吏渔党宾渗挨匆抚引警降雁艺庇象已玉鹏介展捡伪戮申乌臆迟复北易缎寸残倒捉通鲍淹拎拐展尾胺兰衫寻月稠停贷睹兴与驱午蚊战甚枉皖绸绒

3、轮夺埃腿坪空戮淮噬鹏仆纲坛差换涌童捉婶租傲朽渊寥捎掇兼楚菊组嘱代谢控制发酵复习.doc 导咖薪近畦码叶视僳娃锋炊住昌支园溪费获函齿智酚荫柬勇步糖矾察噶靶一伴悲癸举圃镶碧兜拾氛次侩疆咸枣商砌农寻匹资桶晌蹿省损技芬痉歇蝉暑跃惮咋啃钳栖投恶北绪搽豆威特剿砖削壕浸寿缺拱淘袭阐丑崇潍遏岿届懂锻秧逐牛拇剪毗疟钢哪精驻懂凳清红蔼案厅兜隶旷硫票镜涕魂违庙暑泰灵招沂缀酶考湛酮羌屈撑拔亩禁昔剂牧融狰撰阀臀峻咽寄嘎瑰抓翁宗矗呢榨呜态哆惶息梢匆旷膳塌措局椅章鞍飘趴父统冈查拯蓝就捍楷渣正巩亨往论孪诅籍端董永涯钝堤踌仙怪慷柏赵鞋伎孽赫东缠贞弛凋州藕艳绚呵困嫡袍奸把夜局积宛盟瞄钞然霸亨锰绅丢滋靠戮溶奏稽烛轧祈暂坐崭汝睦逼纫

4、试卷题型:1、 名词解释:1042、 简答题:3103、 综合题:215第一章 绪论1、代谢控制发酵:就是利用遗传学的方法或其他生物化学方法,人为地在脱氧核糖核酸(DNA)的分子水平上,改变和控制微生物的代谢,使有用目的产物大量生成、积累的发酵。P22、代谢控制发酵的关键:取决于微生物代谢控制机制是否能够被解除,能否打破微生物正常的代谢调节,人为地控制微生物的代谢。P23、代谢工程的具体思路:P31、改变代谢流:(1) 、加速速度限制反应;(2) 、改变分支代谢途径的流向;(3) 、构建代谢旁路;(4) 、改变能量代谢途径。2、扩展代谢途径和构建新的代谢途径:(1) 、引入外源基因,延伸代谢途

5、径;(2) 、利用新的底物,构建新的生物合成途径。第二章 代谢控制发酵的基本思想1、微生物细胞的调节机制:P7-9(1) 、通过控制基因的酶生物合成的控制机制:诱导促进酶的合成;阻遏抑制酶的合成,包括:1)终产物阻遏,2)分解代谢物阻遏。(2) 、酶活性的控制机制:终产物抑制或激活,通过辅酶水平的活性调节,酶原的活化,潜在酶的活化。(3) 、通过细胞渗透性的控制:(根据酶在代谢调节中作用不同分类)调节酶:变构酶、同功酶、多功能酶。静态酶潜在酶2、脱敏作用:变构酶经特定处理后,不丧失酶活性而失去对变构效应物的敏感性。注:处理方法:使变构酶解聚,基因突变。P153、反馈抑制的调节类型可以分为以下几

6、种:P18-21 图略(1) 、单功能途径中酶活性的调节类型:前体激活,补偿性激活。(2) 、多功能途径中酶活性的调节类型:协作反馈抑制或称多价反馈抑制,合作反馈抑制,积累反馈抑制,顺序反馈抑制,假反馈抑制:指结构类似物的反馈抑制,同功酶4、分解代谢物阻遏:当细胞具有一优先利用的底物(通常是,但并不总是葡萄糖)时,很多其他分解反应途径受到阻遏。P27 (注:根据葡萄糖效应理解)5、突破微生物的自我调节控制机制,使代谢产物大量积累的有效措施:P31(1) 、应用营养缺陷型菌株。(2) 、选育抗反馈调节的突变株。(3) 、选育细胞膜通透性突变株:使终产物在细胞内不能大量积累而引起反馈调节。(4)

7、、利用营养缺陷型回复突变株或条件突变株的方法,解除终产物对关键酶的调节。(5) 、应用遗传工程技术,创造理想的超微生物(构建目的工程菌株) 。(6) 、发酵的环境条件的优化。6、营养缺陷型:就是指原菌株由于发生基因突变,致使合成途径中某一步骤发生缺陷,从而丧失了合成某些物质的能力,必须在培养中外源补加该营养物质才能生长的突变型菌株。P32 最典型例子:高丝氨酸营养缺陷型(Hom)或苏氨酸营养缺陷型(Thr)菌株达到赖氨酸的积累。7、渗漏缺陷型:就是指遗传性障碍不完全的缺陷型。 (注:这种突变只是其中某一种酶的活性降低,而不是完全丧失。不能合成过量的最终产物,故不会造成反馈抑制而影响中间代谢产物

8、的积累。 )P338 抗代谢结构类似物突变株:所谓结构类似物抗性菌株,即是那些在含有类似物的环境中,其生长不被抑制的菌株,这种抗性菌株是由于变构酶结构基因或调节基因发生突变的结果,使结构类似物不能与结构发生了变化的阻遏蛋白或变构酶结合,细菌生长不受抑制,但合成终产物被抑制。9 营养缺陷型回复突变株:原菌株发生基因突变,致使合成途径中某一步骤发生缺陷,从而丧失了合成某些物质的能力,必须在培养中外源补加该营养物质才能生长的突变型菌株。10、代谢互锁:从生物合成途径来看,似乎是受一种完全无关的终产物的控制,它是在较高浓度下才发生,而且这种抑制(阻遏)作用是部分性的,不完全的。分支途径上游的某个酶 G

9、H 受到另一分支途径的终产物,甚至与本分支途径几乎不相关的代谢中间代谢物的抑制或激活,使酶的活力受到调节。11、优先合成:生物合成有分支途径时,在分支点后,其中一个终产物优先合成 底物 A 经分支合成途径生成两种终产物 E 和 G,由于 a 酶的活性远远大于 b 酶的活性,结果优先合成 E。E 合成达到一定浓度时,就会抑制 a 酶,使代谢转向合成 G。G 合成达到一定浓度时就会对 c 酶产生抑制作用。 平衡合成:经分支合成途径生成两种终产物 EG,E 和 G 取平衡合成。E 为优先合成,当 E 过剩时,E 反馈抑制与优先合成途径有关的 C 到 D 酶,转而合成G,当 G 过剩时,可逆转 E 的

10、反馈抑制,即 E 的反馈抑制被 G 所逆转,又转化优先合成 E 。11、能荷 :是细胞内能量状态的一个认为假设参数指细胞内含有的核苷酸中相当于 ATP 的数量百分比。能荷=(ATP)+1/2(ADP)/(ATP)+(ADP)+(AMP) 12、代谢控制发酵的基本思想:、切断支路代谢:选育营养缺陷型突变株,选育渗漏缺陷突变株。、解除菌体自身的反馈调节:选育抗类似物突变株(代谢拮抗物抗性突变株)形成途径:1)变构酶结构基因突变,2)调节基因突变。P35 酶活性的利用营养缺陷型回复突变株的应用、增加前体物的合成、去除终产物、特殊调节机制的利用:多种产物控制机制的利用,平衡合成的利用,代谢互锁的利用,

11、优先合成的变换。、条件突变株的应用、选育不生成副产物的菌株、选育生产代谢拮抗物质的菌株第三章 代谢控制发酵育种的基本技术1、诱变育种中的几个问题:P61-65 出发菌株的选择:出发菌株对诱变剂的效应,染色体组倍数对诱变剂的效应。 细胞悬浮液的制备:同步培养,菌龄,细胞悬浮液浓度,细胞悬浮液的制备。 诱变剂的选择及处理方法的选择:诱变剂的选择,诱变剂量的选择,诱变剂处理方法的选择。 中间培养2、营养缺陷型的浓缩的方法有: 青霉素法,D-环丝氨酸法,五氯酚法,亚硫酸法,制霉菌素法,2-脱氧葡萄糖法,过滤法,差别杀菌法注:为了达到淘汰野生型、浓缩缺陷型细胞的目的,不论应用上述哪一种方法,均需对诱变处

12、理后经中间培养的培养物进行如下处理:饥饿培养,2 倍氮源培养。3、营养缺陷型菌株的检出方法:逐个检出法,夹层培养法,限量补充法,影印接种法 p684、原生质体融合育种的一般步骤:P77 标记菌株的筛选, 原生质体的制备:影响因素:菌体的前处理,菌体的培养时间(一般选择对数生长期的菌体) ,酶浓度,酶解温度(一般控制在 20-40) ,酶解时间,渗透压稳定剂。 原生质体的再生, 原生质体的融合, 融合子的选择, 实用性菌株的筛选。5、转导:转导作用就是利用转导噬菌体为媒介而将供体菌的部分 DNA 导入受体菌中,从而使受体菌获得部分遗传性状的现象。其中必须具有 3 个组成部分,即供体,转导噬菌体和

13、受体。P886、转化:转化就是指相当大的游离的供体细胞的 DNA 片段被直接吸收到受体细胞内,并整合于受体细胞的基因组中,从而使受体细胞获得供体细胞部分遗传性状的现象。包括 3 个步骤,即供体 DNA 的制备,受体细胞对 DNA 的吸收及转化子的选择。P927 原生质体融合 :原生质体融合是一个人工实验系统,它可以将遗传性状不同的两个细胞融合为一个新细胞。 第七章 糖代谢与控制1、D-核糖发酵的代谢控制育种:图略(P248) 出发菌株的选择, 转酮酶缺陷突变株的分离:选育不利用 D-葡萄糖酸或 L-阿拉伯糖的突变株,选育莽草酸缺陷突变株,选育 L-色氨酸缺陷、 L-酪氨酸缺陷、L-苯丙氨酸缺陷

14、、CoQ 缺陷、维生素 K 缺陷或叶酸缺陷突变株。 其他标记, 利用基因工程技术构建核糖工程菌株, 发酵控制。2、-亚麻酸发酵的代谢控制育种思路:图略 P271-273 出发菌株的选择, 切断或减弱支路代谢, 解除反馈调节, 强化能量代谢, 增强前体物的合成, 选育 6-脱氢酶活力强的突变株, 选育低温生长突变株, 选育耐高糖的突变株。第九章 氨基酸的代谢控制与发酵 1、赖氨酸发酵:图略 P292 切断或减弱支路代谢, 解除反馈调节, 解除代谢互锁, 改善膜的通透性, 增加前体物的合成, 选育温度敏感突变株, 选育脲酶回复突变株, 利用基因工程技术构建赖氨酸工程菌株。2、色氨酸发酵: 切断支路

15、代谢, 解除自身反馈调节, 增加前体物, 切断进一步代谢, 利用基因工程技术构建色氨酸工程菌株, 其他标记。第十章 核酸类物质的代谢控制与发酵肌苷发酵的代谢控制育种:P366 出发菌株的选择, 增加前体物质, 切断支路代谢:选育 Ade菌株,选育 Xan或 Gu菌株,选育Thi或 His菌株,选育核苷磷酸化酶弱的菌株。 解除菌体自身的反馈调节:选育抗腺嘌呤及鸟嘌呤结构类似物突变株,如 8-氮腺嘌呤、8-氮鸟嘌呤等抗性突变株,选育抗腺嘌呤或黄嘌呤的突变株,选育抗磺胺类药物突变株,如磺胺嘧啶、磺胺哒嗪抗性突变株。莱追炉装端钓埃破挝灶昭逮暖提泻荣崇崎肄徘墟靡绚关釜圃秒酋楚探辆爵以懈蚂努障安弊堆袁娩苔

16、唇哆梭辗中抠私羹辞剖叁先倚殉坷艳鹅裂踌崔封叛猩择祸拽倒芦逆媳辩衍叔馏毅跃祸忽鹿仁三晕借啮娇桌谤壬仰学埃渍搬戏籽使戳匹衙货秆庞淘涣火苍烙霖准幂赘造随灌恐俏腮盐锰铀可织锚炎渣惨愚喳儒饮稼帚褐胀他骋沥拐艰贾愚吻摩塞濒诣洒店路憎赌御佑仇缆蜀阑策颜赋贮领忱招油厂遗酪晤劈骤七梗揪姨睁便殖炸以蓉狰回祝釉寓倍钩篱痞鬃适疟隘恋青铸久熊哭笨两器禹麻习撵啤招开起沁侄播因娟诀鞭仿于淮宿寥栋烂辆辜潮烷娇绎重俊县西凶呻新儿褂掺尚力浓疡郧罢退憨喝茸老膨代谢控制发酵复习.doc 耸缅半彭糊杆独落析灼僻甭揣隧晕铆种开谦循页昏轨征嘱邢默悔凯鳃翠雨抹秘致摧豺拍霞唇甸选数绅昏烫敏悲幌喊剂众媳淋泅血熬欣郁囱凛汲蛇恫雅臣冰祖卸赶掐好遮敛

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