1、 Protein G Sepharose Fast Flow 原理 蛋白质 G，来自 G 链球菌组的细胞表面蛋白，是 III Fc-受体型蛋白。蛋白质 G 通过非免疫机制结合抗体的 Fc 区域。蛋白质 G 特异性的结合 IgG 的 Fc 区域，但是对于一些多克隆抗体 IgGs对人源 的 IgG 抗体能够有更强的结合。在标准缓冲液条件下，蛋白质 G 能够结合所有的人源性的 亚类抗体和所有鼠源性的 IgG 亚类抗体，包括鼠的 IgG，或者兔的 IgGa 和 IgGb。 柱床参数 柱床体积 结合能力 推荐工作流速 最大运行背景压力 (MPa/psi) Protein G Sepharose Fast
2、 Flow, 1 ml 人 IgG 20mg/ml 牛 IgG 23mg/ml 山羊 IgG 19mg/ml 豚鼠 IgG 17mg/ml 小鼠 IgG 10mg/ml 大鼠 IgG 7mg/ml 1ml/min 0.3/43 进行一个分离操作 结合缓冲液： 20mM 磷酸纳 ， pH7.0 洗脱缓冲液： 100mM 甘氨酸 ， pH2.7 中和缓冲液： 1M Tris-HCl， pH9.0 1， 用 5 倍柱体积的蒸馏水冲洗柱子。 2， 用 5 倍柱体积的结合缓冲液平衡柱子。 3， 上样，流速为 1-4ml/min（ 1ml 的柱子），或者 5ml/min（ 5ml 的柱子）。收集流穿片段。
3、 4， 用 5-10 倍柱体积的结合 缓冲液平衡分离柱，直到基线，即所有未结 合物质都被冲洗出 柱子 （紫外检测器在 280nm 波长检测） 。 5， 用 5 倍柱体积的洗脱 缓冲液进行洗脱 。 洗脱液立即用中和缓冲液（ 0.06ml0.2ml 1M Tris-HCl， pH9.0 每毫升馏分）中和至中性。 6， 立即 用 5-10 倍体积的结合缓冲液重新平衡柱子 。 使用注意 1， 样品需要离心（ 10000g/20min）去除细胞和细胞碎片。离心下来的上清经过一个 0.45m的滤膜过滤。 2， 来自多数物种的 IgGs 和亚类，在接近生理 pH 值和离子强度的条件下，可以结合到蛋白质 G
4、上。对于特别物种 IgG 的最佳结合条件，应该查阅近期的文献。 3， 当 pH 值为 2.7 或者低于 2.7 时，大多数种类的免疫球蛋白能从蛋白质 G 上被洗脱下来。 4， 洗脱完成后，立即用 5-10 倍体积的结合缓冲液重新平衡柱子非常重要。 填料性质及化学稳定性 产品 组成 配基密度 pH 稳定性 平均颗粒尺寸 Protein G Sepharose 4 Fast Flow 配基通过溴化氢活化能够附着在 Sepharose 4 Fast Flow 2mg/ml 短期 2-10 长期 3-9 90 m 在通 常 使 用 的 水溶 性缓冲液中 都是 稳定 的 。 储存 用 20%的乙醇在中性 pH 值的条件下冲洗介质和柱子，在 4 8条件下 储存。
