紫叶加拿大紫荆组培快繁技术规程.doc

1、ICS 点击此处添加中国标准文献分类号DB 41河 南 省 地 方 标 准DB 41/T XXXXXXXXX紫叶加拿大紫荆组培快繁技术规程（征求意见稿）XXXX - XX - XX 发布 XXXX - XX - XX 实施河 南 省 质 量 技 术 监 督 局 发 布DB41/T XXXXXXXXXI前 言本标准按照 GB/T1.12009 给出的规则起草。本标准由河南省林业标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位：河南省农业科学院园艺研究所。本标准主要起草人：李艳敏、王利民、董晓宇、王慧娟、张和臣、符真珠、蒋卉。本标准参加起草人：高杰、张晶、师曼、毛瑞丽、王耀堂、崔巍。DB41/T XXX

2、XXXXXX2紫叶加拿大紫荆组培快繁技术规程1 范围本标准规定了紫叶加拿大紫荆组培快繁技术相关的术语及定义、培养基配制、组培快繁程序、炼苗移栽等内容。本标准适用于河南省境内紫叶加拿大紫荆组培快繁技术。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程3 术语及定义下列术语和定义适用于本文件。3.1 紫叶加拿大紫荆紫叶加拿大紫荆（Cercis canadensis Forest Pansy）是加拿大紫荆变种，属豆科（Legumin

3、osae）紫荆属（Cercis）的落叶小乔木或灌木，叶片心形，春夏秋三季均呈鲜亮的紫红色。3.2 植物组培快繁把植物材料放在试管内，给予人工培养基和合适培养条件，达到高速增殖，又叫植物离体快繁。4 培养基配制按照 LY/T 1882 的规定执行。基本培养基采用木本培养基（WPM）和 Murashigehe Skoog(MS)，成分及用量见附录 A 和附录 B。培养基中添加的植物生长调节物质的浓度及配制参见附录C。5 组培快繁程序5.1 外植体采集与消毒选择生长健壮、无病虫害植株的春梢作为外植体。将春梢剪成 1 cm2 cm 的带腋芽茎段，按下列程序消毒：自来水下冲洗 20 min，之后转移至超

4、净工作台上操作，75的乙醇灭菌 30 s1的次氯酸钠灭菌 10 min无菌水冲洗 1 遍0.5的次氯DB41/T XXXXXXXXX3酸钠灭菌 10 min13 min无菌水冲洗 3 遍4 遍。5.2 启动培养将外植体接种至启动培养基：WPM+6-BA0.5 mg/L +蔗糖 30 g/L+琼脂 6 g/L。5.3 增殖培养将启动培养诱导形成的幼芽切下，并转接至增殖培养基：WPM6-BA 1.52.5 mg/LNAA 0.1 mg/L蔗糖 30 g/L。5.4 两步生根培养将高度超过 4 cm 的无根幼苗进行两步生根培养基，第一步转入 1/2MS+IBA5 mg/L+NAA0. 5 mg/L+

5、蔗糖 20 g/L+琼脂 6.5 g/L，黑暗培养 11 d 进行根诱导，第二步转入 MS+蔗糖 30 g/L+琼脂 6 .5 g/L继续生根培养。5.5 培养条件温度 25 2 ，光照强度 25 mol m -2s-1，光照周期 12 h12h。6 炼苗移栽6.1 炼苗生根培养30 d后，幼苗基部长出3条5条长1 cm的新根即可进行炼苗。将生根瓶苗在温室内放置5 d，然后半开瓶口1 d2 d，使瓶苗逐步适应外界的环境。6.2 基质处理6.2.1 基质配制移栽基质选用草炭和珍珠岩的混合基质，二者的比例为 31。6.2.2 基质消毒移栽前用 50%多菌灵可湿性粉剂 500 倍液喷匀基质，充分搅拌

6、后用薄膜密封，堆置 7 d 后揭开薄膜，晾 24 h 即可使用。6.3 移栽取出培养瓶中的生根组培苗，用清水洗净根系粘附的培养基，栽入 6.5 cm6.5 cm 的营养钵中，整齐摆放在塑料拱棚内，并立即浇透水。6.4 移栽后管理6.4.1 温、湿度管理移栽后立即搭小拱棚密闭保湿。移栽初期10 d15 d，保持小苗的生长温度25 28 ，相对湿度90%以上。当移栽苗长出新根后，逐渐揭膜，透气通风，直至完全适应外界的环境。6.4.2 光照管理DB41/T XXXXXXXXX4组培苗移栽后，用遮光率为 50%75%的遮阳网遮阴。苗木长出新根并开始生长新叶后，及时撤去遮阳网。6.4.3 施肥当新根开始

7、生长，新叶出现时进行首次施肥，以后每隔 2 周3 周追肥一次，施用 N-P2O5-K2O 比例为 20-20-20 的水溶性平衡肥，稀释 1000 倍1200 倍喷施叶面。DB41/T XXXXXXXXX5A A附 录 A（规范性附录）WPM 基本培养基母液配制WPM基本培养基母液配制见表A.1。表A.1 WPM基本培养基母液配制类别 成分 配方用量mg/L称取量mg配 1L 培养基吸取量mLNH4NO3 400 8000K2SO4 990 19800KH2PO4 170 3400MgSO47H2O 370 7400Ca(NO3)24H2O 556 11280大量元素母液CaCl22H2O 9

8、6 192050MnSO4H2O 22.5 4500ZnSO47H2O 8.6 1720H3BO3 6.2 1240Na2MoO42H2O 0.25 50微量元素母液CuSO45H2O 0.25 505FeSO47H2O 27.8 5560铁盐母液Na2-EDTA 37.3 7460 5肌醇 100 20000烟酸 0.5 100盐酸硫胺素 1.0 200盐酸吡哆醇 0.5 100有机物母液甘氨酸 2.0 4005DB41/T XXXXXXXXX6B B附 录 B（规范性附录）MS 基本培养基母液配制MS 培养基母液的配制见表 B.1。表 B.1 MS 培养基母液配制类别 成分 配方用量mg/

9、L配制母液称取量mg/L配 1 升培养基吸取量mL硝酸铵 1650 33000硝酸钾 1900 38000磷酸二氢钾 170 3400硫酸镁 370 7400大量元素母液氯化钙 440 880050硫酸锰 22.3 4460硫酸锌 8.6 1720硼酸 6.2 1240碘化钾 0.83 166钼酸钠 0.25 50氯化钴 0.025 5微量元素母液硫酸铜 0.025 55硫酸亚铁 27.8 5560铁盐母液乙二胺四乙酸二钠 37.3 7460 5肌醇 100 20000烟酸 0.5 100硫胺素 0.1 20吡哆醇 0.5 100有机物母液甘氨酸 2 4005DB41/T XXXXXXXXX7

10、C C附 录 C（资料性附录）植物生长调节物质的浓度及配制植物生长调节物质的浓度及配制参见表 C.1。表 C.1 植物生长调节物质的浓度及配制名称 浓度 mg/mL 配制方法6-苄胺基腺嘌呤（6-benzyladenine，简称 6-BA） 1称取 0.1 g 药品，先用 0.1 mol/L 的 HCl 溶解，然后用蒸馏水定容至 100 mL。-萘乙酸（-naphthaleneacetic acid，简称 NAA）1称取 0.1 g 药品，先用 0.1 mol/L 的 NaOH 溶解，然后用蒸馏水定容至 100 mL。吲哚丁酸（indolebutyric acid，简称IBA）1称取 0.1 g 药品，先用 95%的酒精溶解，然后用蒸馏水定容至 100 mL。