1、 1药物分析实验上海工程技术大学制药工程系2目 录实验一 葡萄糖酸钙片的分析 2实验二 葡萄糖的一般杂质检查 5实验三 阿司匹林肠溶片的分析 11实验四 过氧化苯甲酰凝胶的分析 15实验五 盐酸小蘗碱片的分析 17实验六 紫外分光光度法测定对乙酰氨基酚片的含量 24实验七 维生素 AD 滴剂中维生素 A 的鉴别与含量测定 26实验八 牛黄解毒片的鉴别 303实验一 葡萄糖酸钙片的分析【目的要求】1. 掌握葡萄糖酸钙片鉴别实验的原理；2. 掌握滴定法测定葡萄糖酸钙片含量的原理与操作。【基本原理】药物 CO -CHHOHOHCH2OCa2+ 2, H2O本品含葡萄糖酸钙（C 12H22CaO14H
2、2O）应为标示量的 95.0%-105.0%性状 ：本品为白色片。1 原理(1) 鉴别： 与苯肼反应本品在酸性条件下与苯肼反应生成黄色的结晶。 本品与三氯化铁 本品在无色火焰中燃烧，火焰即显砖红色。( 2) 含量测定钙紫红素先与钙离子络合生成紫红色络合物，随着 EDTA 络合剂的加入，由于EDTA 与钙离子的配位能力强于钙指示剂与钙离子的配位能力，而使钙紫红素先与钙离子络合生成紫红色络合物中的钙离子被 EDTA 夺取，将指示剂游离出来，溶液即显示游离指示剂的颜色，从而指示滴定的终点。4【实验操作】（一）鉴别 ：1与三氯化铁反应取本品一片，研细，加温热的水 10mL，振摇，过滤，吸取 5mL 溶
3、液，加 FeCl3溶液一滴，应显深黄色。2燃烧显色取铂丝，用盐酸浸湿后，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，火焰即显砖红色。3与苯肼反应取本品约 0.5g,置试管中，加水 5 mL,微热溶解后，加冰醋酸 0.7mL 与新蒸的苯肼 1mL，置水浴上加热 30 分钟，放冷，用玻璃棒擦试管的内壁，渐生成黄色的结晶。（二）含量测定：取本品 5 片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于葡萄糖酸钙 1g） ，加水50 毫升，微热使葡萄糖酸钙溶解，放冷至室温，移植至 100mL 容量瓶中，再用水稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取滤液 25mL，加水 75mL，加氢氧化钠溶液 15mL 与钙紫红素 0.1
4、g，用 EDTA 溶液滴定至溶液自紫色转变为纯蓝色。每1mLEDTA 溶液（0.05mol/L）相当于 22.42mg 的葡萄糖酸钙。标示量,(%)=V EDTA22.42100W1/(1000W2250.55)100%W1:5 片药品的重量(g)W2: 称重溶解的药品重量VEDTA 滴定消耗的 EDTA 溶液的体积。5实验二 葡萄糖的一般杂质检查一. 目的要求1了解葡萄糖的全检过程；2掌握氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐及炽灼残渣等一般杂质检查原理、操作方法及杂质限量计算；3掌握旋光法 216 定葡萄糖注射液含量的基本原理、操作方法及结果计算；4正确使用纳氏比色管、检砷器、高温炉及旋光仪，
5、熟悉旋光仪的构造、以及保养。二. 基本原理葡萄糖分子结构中的五个碳都是手性碳原子，具有旋光性。一定条件下的旋光度是旋光性物质的特性常数，测定葡萄糖的比旋度具有初步鉴别及估测纯度的意义。葡萄糖分子中具有醛基，还原碱性酒石酸铜生成红色氧化亚铜沉淀。本品除了检查氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属，砷盐等一般杂质外，还需检查溶液的澄清度与颜色（目的是检查水不溶性物质或有色杂质） 、乙酸溶液的澄清度（目的是检查醇不溶性杂质，如蛋白质等） 、亚硫酸盐与可溶性淀粉（因为制备时使用的醇可能带有亚硫酸盐，而可溶性淀粉为引入的中间体） 。旋光度与溶液的浓度（c ）和偏振光透过溶液的厚度（l）成正比。当偏振光通过厚 1d
6、m 且每 1ml 中含有旋光性物质 1g 的溶液，使用光线波长为钠光 D 线（589.3nm） ，稳定温度为 t 记时，测得的旋光度称为该物质的比旋度，以 。t葡萄糖的比旋度 为52.75。所以，测定葡萄糖溶液的旋光度可以求得其含量。6三.实验操作一性状本品为无色结晶或白色结晶性或颗粒性粉末；无臭，味甜。取本品约 10.81g 精密称定，置 100ml 量瓶中，加水适量与氨试液 0.2ml，溶解后水稀释至刻度，摇匀，放置 10 分钟，在 25时测定比旋度，应为52.5至53.0。二鉴别取本品约 0.2g，加水 5ml 溶解后，缓缓滴入温热的碱性酒石酸铜试液中，即产生氧化亚铜红色沉淀。三检查1酸
7、度 取本品 2g，加新沸过的冷水 20ml 溶解后，加酚酞指示液 3 滴与氢化钠滴定浓（0.02mol/l）0.20ml，应显粉红色。2溶液的澄清度与颜色 取本品 5g，置 25ml 纳氏比色管中，加热水溶解后，放冷，用水稀释至 10ml，溶液应澄清无色；如显浑浊，与 号浊度标准液比较，不得更浓；如显色，与对照液（取比色用氯化钴溶液 10ml，比色用重铬酸钾溶液 30ml 与比色用硫酸铜溶液 20ml,加水稀释成 100ml）0.4ml 加水稀释至 10ml 比较，不得更深。3乙醇溶液的澄清度 取本品 1g，加 90%乙醇 30ml，置水浴上加热回流约 10min，溶液应澄清。4亚硫酸盐与可溶
8、性淀粉 取本品 1g，加水 10ml 溶解后，加碘试液 1 滴，应即显黄色。5干燥失重 取本品置与供试品同样条件下干燥至恒重的扁形称量瓶中，将供试品平铺于瓶底，厚度不超过 5，加盖，精密称定。将称量瓶放入洁净的培养皿中，瓶盖半开或置瓶旁，放入 105干燥箱中干燥。取出后迅速盖好瓶盖，置干燥器内放冷7至室温，迅速精密称重（放置时间与称重顺序与空称量瓶一致） 。再于 105干燥箱中干燥至恒重，即得。减失重量不得过 9.5%。6蛋白质 取本品 1.0g，加水 10ml 溶解后，加磺基水杨酸溶液（ 15）3ml，不得发生沉淀。7氯化物 取本品 0.6g，置 50ml 纳氏比色管中，加水溶解使成约 25
9、ml（溶液如显碱性，可滴加硝酸使调 pH 试纸显中性） ，再加稀硝酸 10ml（溶液如不澄清，应滤过），加水使成约 40ml，摇匀，即得供试溶液。另取标准氯化纳溶液（ 10g/ml 的 Cl）6ml,置 50ml 纳氏比色管中，加稀硝酸 10ml，加水使成约 40ml，摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液 1ml，用水稀释至 50ml，摇匀，在暗处放置 5min，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察、比浊，供试溶液不得比对照溶液更浓（0.01%） 。8硫酸盐 取本品 2g，置 50ml 纳氏比色管中，加水溶解使成约 40ml（溶液如显碱性，可滴加盐酸使遇 pH 试纸显
10、中性；溶液如不澄清，应滤过）加稀盐酸 2ml，摇匀，即得供试溶液。另取标准硫酸钾溶液（100gSO4/ml）2ml, 置 50ml 纳氏比色管中，加水使成约 40ml，加稀盐酸 2ml,摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入 25%氯化钡溶液 5ml,用水稀释至 50ml,充分摇匀，放置 10min，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察、比浊，供试溶液不得比对照溶液更浓（0.01%） 。9铁盐 取本品 2g，置 50ml 纳氏比色管中，加水 20ml 溶解后，加硝酸 3 滴，缓缓煮沸 5min，放冷，加水稀释使成 45ml,加硫氰酸铵溶液（ 30100）3ml,摇匀，如显色，与标
11、准铁溶液（10gFe/ml）2ml 用同一方法制成的对照液比较，不得更深（0.001%） 。10重金属 取 50ml 纳氏比色管两支，甲管中加标准铅液（Pb8g/ml）一定量与醋8酸盐缓冲液（pH3.5 ）2ml,用水稀释至 25ml：若供试液带颜色，可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液，使之与乙管一致；再在甲乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各 2ml,摇匀，放置 2min，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深（重金属不得过 5ppm） 。四.注意事项限度检查应遵循平行操作原则，即供试管与对照管的实验条件应尽可能一致，包括实验用具的选择、试剂与事业的量取方
12、法及加入顺序、反应时间的长短等。1.比色、比浊前应使比色管内试剂充分混匀。比色方法是将两管同置于白色背景上，从侧面或自上而下观察；比浊方法是将两管同置于黑色背景上，从上向下垂直观察。所用比色管刻度高低差异不应超过 2ml,使用过的比色管应及时清洗，注意不能用毛刷刷洗，可用硫酸洗液浸泡。一般情况下可取 1 份供试品进行检查，对供试品和对照管各复检 2 份，方可判定。五.思考题1葡萄糖的检查项目中哪些属于一般杂质？哪些属于特殊杂质？试述它们的来源及检查意义。2亚硝酸盐和可溶性淀粉超标会出现什么现象？3氯化物、重金属及砷盐检查中的操作注意事项有哪些？比浊检查时为什么应将反应液稀释后再加沉淀剂？9实验
13、三 阿司匹林肠溶片的分析【目的要求】1. 熟悉片剂分析的项目与方法；2. 掌握阿司匹林鉴别实验的原理及与药物结构的关系；3. 掌握两步滴定法测定阿司匹林片含量的原理与操作，及容量分析法测定片剂含量的计算方法。【基本原理】药物 C9H8O4COOOHCOCH3性状：本品为肠溶包衣片，除去包衣后显白色。本品含阿司匹林（C9H8O4 ）应为标示量的 95.0%-105.0%1 原理（1） 鉴别： 三氯化铁反应水杨酸及其盐在中性或弱酸性条件下，与三氯化铁试液反应，生成紫堇色配位化合物。阿司匹林加热水解生成水杨酸，可用三氯化铁反应鉴别。 水解反应阿司匹林与碳酸钠试液加热，酯键水解，得水杨酸钠和醋酸钠，加
14、过量稀硫酸酸化后，生成水杨酸沉淀，并发生醋酸得臭气，因此可用水解反应鉴别。(2) 检查10 阿司匹林游离水杨酸得检查a.杂质来源 游离水杨酸为阿司匹林生产中未反应的原料或贮存过程中的水解产物b.检查方法 阿司匹林无游离酚羟基，不与高铁盐溶液作用，而水杨酸则磕与之反应生成生成紫堇色此种方法称为对照法，极为灵敏，可检测出 1ug 的游离水杨酸。(3)含量测定阿司匹林分子结构中含有酯键，易水解成水杨酸和醋酸，片剂中为防止酯键水解加入少量酒石酸或枸橼酸做稳定剂，因此在片剂中有酸性杂质，含量测定时为消除酸性杂质干扰，采用两步滴定法。第一步 中和，消除酸性杂质（酸性附加剂和降解产物）的干扰酒石酸枸橼酸水杨
15、酸醋酸COHOCH3 + NaOH CONaOCH3 +2O第二步 水解后剩余滴定 COHOCH3 + NaOH CONaOH +C3ONa2NaOH + H2SO4 Na2SO4 + 2H2O【实验操作】 NaOH 钠盐 H2O11（一）鉴别与三氯化铁反应取本品的细分适量（相当于阿司匹林 0.1g）,加水 10mL，煮沸，放冷，加三氯化铁试液一滴，即显紫堇色。（二）检查：游离水杨酸 取本品 3 片，研细，用乙醇 30mL 分次研磨，并移入 100mL 容量瓶中，充分振摇，用水稀释致刻度，摇匀，立即过滤，精密量取滤液 10mL，致 50mL 纳氏比色管中，用水稀释致 50mL，立即加新制的稀硫
16、酸铁銨溶液（取 1mol/L 盐酸溶液 1mL,加硫酸铁銨指示液 2mL 后再加水适量使成 100mL）3mL，摇匀，三十秒内如显色，与对照液（精密量取 0.01%水杨酸溶液 4.5mL，加乙醇 3mL，0.05酒石酸溶液1mL，用水稀释致 50mL,再加上述新制的稀硫酸铁銨溶液 3mL,摇匀）比较，不得更深（1.5%）（三）含量测定：取本品 10 片，研细，用中性乙醇 70mL 分数次研磨，并移入 100mL 容量瓶中，充分振摇，再用水适量洗涤研钵数次，洗液合并于 100mL 容量瓶中，再用水稀释致刻度，摇匀，过滤，精密量取滤液 30mL（相当于阿司匹林 0.3g） ，致锥形瓶中，加中性乙醇
17、（对酚酞指示液显中性）10mL,振摇，使阿司匹林溶解，加酚酞指示液 3 滴，滴加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）致溶液显粉红色，再精密加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）40mL，置水浴上加热 15 分钟并时时振摇，迅速放冷致室温，用硫酸滴定液（0.05mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白实验校正，每 1mL 氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于 18.02mgC9H8O4阿司匹林标示量， CH2SO42（V 硫酸空白V 硫酸供试）18.020.10.1100010100%1003012（四）注意事项：1掌握片剂的取样方法，并正确计算取样量范围。2中和操作要快，避免阿司匹林在碱中水解。
18、3加碱、加热水解阿司匹林应不时振摇，保证水解完全；然后迅速放冷，尽量避免碱液在受热时吸收二氧化碳。13实验四 过氧化苯甲酰凝胶的分析【目的要求】3. 熟悉凝胶剂分析的方法；4. 掌握阿过氧化苯甲酰凝胶分析的原理与操作。药物 COOOO性状 本品为白色乳胶粘稠体. 本品含过氧化苯甲酰(C 14H10O4)应为标示量的90.0%110.0%【基本原理】本品具有氧化性，把碘化钾氧化为单质碘，再用硫代硫酸钠滴定生成的碘，根据消耗硫代硫酸钠溶液的体积即可计算出过氧化苯甲酰的含量。【实验操作】（一）鉴别 1取本品适量(约相当于过氧化苯甲酰 50mg), 加丙酮 5mL，用玻棒挤压使过氧化苯甲酰溶解，加碘化
19、钾试液 2mL，溶液呈红棕色，加硫代硫酸钠试液 5mL，红棕色应消失。2取本品适量(约相当于过氧化苯甲酰 100mg), 加丙酮 10mL，用玻棒挤压，过14滤，滤液作为供试溶液，另取过氧化苯甲酰标准品，用丙酮溶解并制成每 1mL 中含10mg 的溶液作为对照液。吸取上述两种溶液各 5 微升，分别点于同一硅胶薄层板上，以甲苯-二氯甲烷- 冰醋酸(50:2:1)为展开剂，展开后，凉干，置紫外灯下(254nm) 检示。供试品溶液所显主斑点的颜色与位置应与对照溶液的主斑点相同。（二）含量测定:精密称取本品适量(约相当于过氧化苯甲酰 200mg)，置 100mL 碘量瓶中，放置片刻，使供试品平铺于碘瓶
20、底层，加丙酮 30mL，用玻棒挤压使过氧化苯甲酰溶解完全，用少量丙酮冲洗玻棒，洗液并入溶液中，加碘化钾试液 5mL，密塞，摇匀，于暗处放置 10 分钟，用硫代硫酸钠滴定液滴定至无色，用力振摇 30 秒，放置 2 分钟，如仍为无色，即为终点。1mL 硫代硫酸钠(0.1mol/L)相当于 12.11mg 的过氧化苯甲酰.标示量(%)= 12.0%cvmc 硫代硫酸钠的浓度 (mol/L)v 消耗的硫代硫酸钠的体积(mL)m 称取的样品中按说明书的标示应含过氧化苯甲酰的质量(mg)（三）注意事项1样品转移要完全，玻棒上黏附的样品要全部冲洗到碘瓶中，否则测定结果偏低。2滴定终点的确定要准确，放置 2
21、分钟仍为无色，即为终点。15实验五 盐酸小蘗碱片的分析【目的要求】1 . 掌握盐酸小蘗碱片鉴别实验的原理；2. 掌握氧化还原反应滴定法测定盐酸小蘗碱片含量的原理与操作。性状 本品为黄色片或糖衣片 NOOMeOMeO Cl-, 2H2O+本品含盐酸小蘗碱（C 20H18ClNO42H2O）应为标示量的 93.0107.0%1 原理(1) 鉴别：碱性溶液与丙酮作用生成沉淀本品水溶液与氢氧化钠试液作用生成季胺碱型小蘗碱而呈橙红色，再与丙酮作用生成黄色的丙酮小蘗碱沉淀。 NOOMeOMeO Cl-, 2H2ONaOH NOOMeOMeO H-+ +橙红色16N OOMeOMeON OOMeOMeOCH
22、2COH3COH-标 CH3CH3O+ 氧化显色 本品溶于稀盐酸，可被漂白粉氧化而显樱红色。 与没食子酸作用而显色本品溶于硫酸，再与没食子酸的乙醇溶液作用，水浴加热后显翠绿色。（2） 含量测定本品用重铬酸钾氧化后，剩余重铬酸钾以间接碘量法测定。用过量重铬酸钾滴定液氧化供试品中的盐酸小蘗碱，剩余的重铬酸钾将碘化钾氧化为碘，再用硫代硫酸钠滴定碘，即可测出剩余的重铬酸钾滴定液的毫升数，并以空白试验校正，测出重铬酸钾滴定液的总体积。空白试验和样品试验两次毫升数之差，即为氧化供试品所消耗的重铬酸钾滴定液的毫升数。 【实验操作】（一）鉴别1. 取本品 0.1g, 加水 10mL, 缓缓加热溶解后，过滤，滤
23、液备用，加氢氧化钠试液 4滴，放冷（必要时过滤）,加丙酮 8 滴，即发生浑浊。2. 取本品约 5mg，加稀盐酸 2mL，搅拌，加漂白粉少量，即现樱红色3. 取本品约 0.1g, 加水 20mL,缓缓加热溶解后，加硝酸 0.3mL，冷却，放置 10 分钟，黄色17滤过，取滤液 5mL, 加入硝酸银溶液，出现白色凝胶状沉淀。（二）含量测定：取本品 20 片，如为糖衣片，注意去除糖衣，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于盐酸小蘗碱 0.3g）, 置烧杯中，加沸水 150mL，搅拌，使盐酸小蘗碱溶解，放冷，移入 250 容量瓶中，精密加重铬酸钾滴定液 50mL，加水至刻度，振摇 5 分钟，用干燥滤纸
24、滤过，精密量取滤液 100mL，置 250mL 具塞锥形瓶中，加碘化钾 2g，振摇使溶解，加盐酸溶液 10mL,密塞，摇匀，在暗处放置 10 分钟，用硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液 2mL，继续滴定至蓝色消失，溶液呈亮绿色，并将滴定的结果用空白实验校正。1mL 重铬酸钾滴定液相当于 12.39mg 的C20H18ClNO42H2O。标示量=10123()0.36.670%5WVCW1 20 片总重 gW2 供试品重 gW3 供试品的标示量 gC 硫代硫酸钠的浓度，mol/LV0 空白实验消耗硫代硫酸钠体积V1 样品消耗硫代硫酸钠体积18实验六 紫外分光光度法测定对乙酰氨基酚片的
25、含量目的要求1熟悉片剂分析的基本操作；2掌握紫外分光光度法测定对乙酰氨基酚片含量的基本原理和方法。基本原理1 药物C8H9NO2 151.16HONHCH3O本品为白色片、薄膜衣或明胶包衣片，除去包衣后显白色。含对乙酰氨基酚(C8H9NO2)应为标示量的 95.0%105.0%。2原理对乙酰氨基酚在 0.4%氢氧化钠溶液中，于 257nm 波长处有最大吸收，其紫外吸收光谱特征，可用于其原料及其制剂的含量测定。其片剂的溶液经干燥滤纸滤过，辅料不再干扰测定。仪器与试剂（一） 仪器紫外-可见分光光度计、容量瓶、移液管、过滤装置。（二） 试剂对乙酰氨基酚片、0.4%氢氧化钠溶液实验操作取本品 10 片
26、，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于对乙酰氨基酚 40） ，置 250ml 量瓶中，加 0.4%氢氧化钠溶液 50ml 及水 50ml，振摇 15min，加水至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液 5ml，置 100ml 量瓶中，加 0.4%氢氧化钠溶液 10ml，加水至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法（中国药典2005 年版二部附录A） ，19在 257nm 的波长处测定吸光度，按 C8H9NO2 的吸光系数（ ）为 715 计算，即得。Ecm%1标示量%= %1010%标WVDLAEcm式中 V 为溶液的体积，ml。注意事项1 对乙酰氨基酚片中含有辅料，因此紫外分析前应进行过滤操作。本实
27、验先定容，后过滤，过滤时，所用仪器均需干燥。弃去初滤液，量取续滤液进行分析，以保持浓度的一致，从而保证结果的准确。2 本实验用吸光系数法测定含量，其优点是操作简便、快捷，不必用对照品。但该法受仪器精度、操作及环境因素等影响较大，因此测定前必须对紫外-可见分光光度计进行校正与检定，波长、吸光度的准确度、杂散光均应符合要求，才能保证结果的准确。3 吸光系数法通常都是在最大吸收波长出测定吸光度，因为在此波长处测定灵敏度高，且波长稍有偏差对吸光度影响不大。4 紫外-可见分光光度法测定时，除另有规定外，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用 1的石英吸收池，在规定的吸收峰波长2nm 以内测试几个点
28、的吸光度，或由仪器在规定波长附近自动扫描测定，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确。除另有规定外，吸收丰波长应在该品种项下规定的波长2nm 以内，并以吸光度最大的波长作为测定波长。思考题1简述片剂过滤得操作要点。2采用吸光系数法测定药物含量时，是否要对仪器进行校正和检定，为什么？20实验七 维生素 AD 滴剂中维生素 A 的鉴别与含量测定一、 目的要求1复习并掌握维生素 A 鉴别反应的实验原理。2复习并掌握三点校正法测定维生素 A 含量的实验原理。3掌握三点校正法测定维生素 A 含量的操作方法。4掌握三点校正法的计算方法。5掌握滴剂的含量测定步骤及其计算方法。二、 仪器及试药（一）器材紫外-可
29、见分光光度仪，比色皿，电热恒温干燥箱，万分之一分析天平，托盘天平（精度 0.01g） ，称量瓶，称量纸，药匙，研钵， ，量筒（5ml、 10ml、50ml 、100ml ） ，胶头滴管，刻度吸管（1ml、2ml ） ，容量瓶（100ml)，计算器，温度计，湿度计（二）试药维生素 AD 滴剂，纯化水，三氯甲烷（分析纯，无水乙醇） ，三氯化锑（分析纯） ，环己烷（分析纯）三、 实验准备25%三氯化锑的三氯甲烷溶液：取三氯化锑 25g，加三氯甲烷使溶解成 100ml，即得。四、 实验原理及方法（一） 鉴别三氯化锑反应实验原理：维生素 A 在饱和无水三氯化锑的无醇氯仿溶液中即显蓝色，渐变紫21红。反应
30、机理为维生素 A 与三氯化锑（）中存在的亲电试剂氯化高锑（ ）反应，生成不稳定的蓝色碳正离子，反应式如下：CH2OCRCH3 CH3 CH3 OSbCl3CH33CH2CH3 CH3 CH3CH33CH3 CH2CH3 CH3CH33 SbCl5.RCO实验方法：取本品，加三氯甲烷稀释成每 1ml 中含维生素 A1020U 的溶液；取1ml，加 25%三氯化锑的三氯甲烷溶液 2ml，即显蓝色至蓝紫色，放置后，蓝色渐消褪。（二） 含量测定三点校正法实验原理：用分光光度法测定维生素 A 在特定波长处的吸光度来计算其含量。由于维生素 A 制剂中含有稀释用油，且维生素 A 原料药中混有其他杂质，因此测
31、定吸光度中含有无关吸收引入的误差，需用校正公式校正以得到正确结果。其详细内容参见附录-D 。实验方法：取装量项下的内容物适量，精密称定，加环己烷溶解并定量稀释制成每 1ml 中含 915U 的溶液，照紫外 -可见分光光度法，测定其吸收峰的波长，并在表 9 所列各波长处测定吸光度，计算各吸光度与波长 328nm 处吸光度的币值和波长 328nm 处的值。Ecm%1表 9 维生素 A 测定第一法的药典规定值吸光度比值波长（nm） 测得吸光度计算值 药典规定值300316328A1A2A3A1/A3A2/A3A3/A30.5550.9071.00022340360A4A5A4/A3A5/A30.81
32、10.299如果吸收峰波长在 326329nm 之间，且所测得各波长吸光度比值不超过表中 1规定的0.02,可用下式计算含量：每 1g 供试品中含有的维生素 A 的单位= （328nm）1900Ecm%1如果吸收峰波长在 326329nm 之间，但所测得的各波长吸光度比值超过表中 2规定值的0.02，应按下式求出校正后的吸光度，然后再计算含量：A328（校正）=3.52(2A 328-A316-A340)如果在 328nm 处的校正吸光度与未校正吸光度相差不超过 3.0%，则不用校 3正吸光度，仍以未经校正的吸光度计算含量。如果校正吸光度与未校正吸光度相差在-15%至-3%之间，则以校正吸光度
33、计 4算含量。如果校正吸光度超出未校正吸光度的-15%至-3%的范围，或者吸收峰波长不 5在 326329nm 之间，则供试品须按下述第二法测定。第二法的详细描述参见附录-D。中国药典（2005）规定，本品含维生素 A 应为标示量的 90.0%120.0%。五、 注意事项1 鉴别反应必须在无水、无醇的条件下进行。因此，所用仪器必须干燥无水，所用试剂必须为无水试剂，所用三氯甲烷中必须不含醇。2 维生素 A 遇光易氧化变质，实验应尽量在暗处快速进行。3 维生素 A 测定注意事项的详细描述参见附录 -D。4 紫外-可见分光光度法注意事项的详细描述参见附录-A 。5 滴剂分析注意事项的详细描述参见附录
34、-D。23六、 计算维生素 A 的含量测定计算参见含量测定中的实验方法及附录 -D 相关内容。七、 思考题1鉴别反应为何必须在无水、无醇的条件下进行？2为何不直接以紫外-可见分光光度法测定维生素 A 的含量，而要采用较为繁琐的三点校正法？用于测定的三点该如何选择？3应用三点校正法测定维生素 A 的含量，何时采用第一法，何时采用第二法？第二法如何操作？4计算式中的参数 1900 是如何得来的？24实验八 牛黄解毒片的鉴别目的要求1. 掌握中药制剂定性分析的一般原理和方法;2. 掌握牛黄解毒片的原理及有关操作.基本原理1. 处方 人工牛黄 5g 雄黄 50g 石膏 200g 大黄 200g 黄芩
35、150g 桔梗 100g 冰片 25g 甘草 50g2. 原理(1) 显微鉴别法利用显微镜来观察中药制剂中原药材的组织、细胞或内含物等特征，从而鉴别制剂的处方组成。凡以药材粉碎后直接制成制剂或添加有粉末药材的制剂，由于其在制作过程中原药材的显微特征仍保留在制剂中，因此均可用显微鉴别法进行鉴别。本实验用显微鉴别法鉴别大黄和雄黄。(2) 微量升华法可用于鉴别中药制剂中具有升华性质的化学成分。本实验采用微量升华法鉴别冰片。冰片的升华物加一定试剂处理后显出不同颜色。(3) 显色反应则利用颜色反应鉴别中药制剂的组成。本实验利用黄酮类成分和蒽醌类成分的显色反应鉴别黄芩和大黄。黄酮类成分在镁粉与盐酸作用下易
36、被还原，迅速生成红色；蒽醌类成分遇碱液显红色，在酸性溶液中被还原则显黄色。(4) 薄层色谱法将中药制剂样品和对照品在同一条件下进行分离分析，观察样品在对照品相同斑点位置处是否有同一颜色（或荧光）的斑点，来确定样品中有无要检25出的成分。本实验用薄层色谱法鉴别牛黄中组分胆酸。采用 10%硫酸乙醇溶液显色，加热显色后，在紫外灯（365nm）下检视，胆酸呈黄绿色荧光。仪器与试剂（一） 仪器显微镜、365nm 紫外灯（二） 试剂1. 水合氯醛试液取水合氯醛 50g，加水 15ml 与甘油 10ml 使溶解，即得。2. 稀甘油取甘油 33ml，加水稀释使成 100ml，再加樟脑一小块或液化苯酚一滴，即得
37、。3. 1%香草醛硫酸溶液取香草醛 0.1g，加硫酸 10ml 使溶解，即得。4. 10%硫酸乙醇试液取硫酸 57ml，加乙醇稀释至 1000ml，即得。实验操作（一） 大黄和雄黄的显微鉴别取本品 1 片，研细，取少许置载玻片上，滴加适量水合氯醛试液，透化后加稀甘油 1 滴，盖上盖玻片，用吸水纸吸干周围透出液，置显微镜下观察：草酸钙簇晶大直径 60140m(大黄） 。不规则碎块金黄色或橙黄色，有光泽（雄黄） 。（二） 冰片的微量升华鉴别取本品 1 片，研细，进行微量升华，得到的白色升华物，加新配制的 1%香草醛硫酸溶液 12 滴，液滴边缘渐呈玫瑰红色。（三） 牛黄解毒片中黄芩和大黄的显色反应鉴
38、别26取本品 6 片，研细，加乙醇 10ml,温热 10min,滤过，取滤液 5 ml，加少量镁粉与盐酸 0.5 ml,加热，即显红色（黄芩） ；另取滤液 4 ml，加氢氧化钠溶液，即显红色，再加浓过氧化氢溶液（30%） ，加热，红色不消失，加酸成酸性后，则红色变为黄色（大黄） 。（四） 牛黄的薄层色谱鉴别取本品 2 片，研细，加三氯甲烷 10 ml 研磨，滤过，滤液蒸干，加乙醇 0.5 ml 使溶解，作为供试品溶液。另取胆酸对照品，加乙醇制成每 1 ml 含 1的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法，吸取上述两种溶液各 5l，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯-醋酸-甲醇（20:25:2:3）的上层溶液为展开剂，展开后，晾干，喷以 10%硫酸乙醇溶液，在 105干燥 10min，置紫外灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。注意事项1牛黄解毒片有素片和糖衣片两种，糖衣片应先除去糖衣，然后进行鉴别试验。2薄层色谱鉴别采用 10%硫酸乙醇溶液显色，由于硫酸吸水性强，阴雨天操作，斑点易扩散，故加热显色后，应尽快在紫外灯下检视。思考题1中药制剂定性鉴别的方法有哪些？各有何特点？2中药制剂药味较多，逐一鉴别有困难，你认为应如何选择鉴别对象？
