1、实验四 酶的特异性,生物化学实验之,山东师范大学生命科学学院,【实验目的】 学习酵母蔗糖酶（粗提液）和唾液淀粉酶的制备，了解酶的特异性及检测方法。,【实验原理】 酶是生物催化剂，酶对所作用的底物有严格的选择性，即酶的特异性。淀粉和蔗糖都是非还原性糖，分别为唾液淀粉酶和蔗糖酶的专一底物。淀粉被唾液淀粉酶水解生成具有还原性的麦芽糖，蔗糖被蔗糖酶水解生成具有还原性的葡萄糖和果糖。Benedict试剂（含有Cu 2+）常用于检验还原糖的存在，其被还原后生成砖红色的Cu2O沉淀。,【器材及试剂】 （一）器材：1. 恒温水浴锅 2. 试管及试管架 3. 离心机 4. 吸量管5.烧杯、量筒 、漏斗等 （二）
2、试剂： 1. 2%蔗糖 2. 1%淀粉（内含0.3%的NaCl）3. 唾液淀粉酶溶液 4. 蔗糖酶溶液 5. Benedict试剂,【实验步骤】 （一）淀粉酶的特异性,1.唾液淀粉酶溶液的制备：先用蒸馏水漱口，然后用洁净试管1支， 取唾液（无泡沫）约2ml，蒸馏水20倍稀释， 备用。,2.取试管5支，标号，按下表所列的次序操作：,3. 摇匀，置37恒温水浴保温10min，然后每管加入Benedict试剂2ml，再放沸水浴5min。观察各管颜色变化，并解释实验结果。,(二) 蔗糖酶的特异性,1. 蔗糖酶溶液的制备：取活性干酵母1.0g，置于研钵中，加少量蒸馏水及石英砂研磨提取约10min，再加蒸
3、馏水至总体积约为20ml，过滤或离心，滤液或上清液备用。,2. 取试管5支，标号，按下表所列的次序操作：,3. 摇匀， 置37恒温水浴保温10min，然后每管加入Benedict试剂2ml，再放沸水浴5min。观察各管颜色变化，并解释实验结果。,【注意事项】 唾液的稀释倍数因人而异，有时差别很大，稀释倍数可以是50300倍。,【思考题】1、 若将淀粉酶和蔗糖酶煮沸1min，实验结 果会发生什么样的变化？ 2、 酶作用的专一性有哪几种？,移液枪的使用 部分用具与试剂,量程的调节 1.按照从大体积调为小体积的方法调节。 2.用拇指和食指旋转取液器上的旋钮，使数字窗口出现所需容量体积的数字。 注意：
4、千万不要将旋钮旋出最大量程，否则会卡住内部机械装置或者弹簧弹出而损坏了移液枪。,微量移液器的使用方法,枪头（吸液嘴）的装配 在将枪头（pipette tips）套上移液枪时，正确的方法是将移液枪（器）垂直插入枪头中，稍微用力左右微微转动即可使其紧密结合。,移液的方法 1.吸取液体时，用大拇指将按钮按下至第一停点，移液器保持竖直状态，将枪头插入液面下23毫米。 2.然后慢慢松开按钮回原点。 3.接着将按钮按至第一停点排出液体，稍停片刻继续按按钮至第二停点吹出残余的液体。最后松开按钮。,移液器的正确放置 使用完毕，可以将其竖直挂在移液枪架上，但要小心别掉下来。当移液器枪头里有液体时，切勿将移液器水平放置或倒置，以免液体倒流腐蚀活塞弹簧。,维护保养时的注意事项 如不使用，要把移液枪的量程调至最大值的刻度，使弹簧处于松弛状态以保护弹簧。,
