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类型2-DNA测序原理.ppt

  • 上传人:精品资料
  • 文档编号:9025203
  • 上传时间:2019-07-20
  • 格式:PPT
  • 页数:24
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    2-DNA测序原理.ppt
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    1、2、DNA测序原理,Fred Sanger 弗雷德桑格尔,Leroy Hood 莱诺伊胡德,DNA分子组成,Adenine,Guanine,Cytosine,Thymine,碱基,戊糖(脱氧),磷酸,脱氧核糖核苷酸dNTP,脱氧核糖核苷,A,C,G,T,Sanger 测序双脱氧末端终止法,+,ddNTP 被加到正在合成的链上,由于它的3-OH已被氧化,下一个dNTP的5-磷酸基团不能与之形成磷酸二酯键,使合成终止。 在引物等延伸反应过程中,ddNTP在不同位置掺入,产生了一系列不同长度的新的DNA片段。,双脱氧末端终止法,DNA测序循环反应与普通PCR扩增的区别,测序只用一条引物;PCR需两条

    2、引物 测序产物线性扩增;PCR产物指数扩增 测序需要dNTP和ddNTP ;PCR只用dNTP 测序产物是长度相差一个碱基的一系列片段;PCR产物是长度相同的一种片段,DNA sequencing: Chemistry,template + polymerase +,dCTP dTTP dGTP dATP ddATP ddGTP ddTTP ddCTP,extension,electrophoresis,AT GC AT TA CG TA GC GC AT GC TA TA CG TA GC AT,DNA测序的自动化,基因分析仪的基本构造,毛细管,进样端,检测窗口,DNA测序示意图,C T T

    3、 G C A T G A C 序列,用点的大小代表DNA分子的大小, 颜色代表DNA所标记的颜色。,DNA测序的设备,ABI公司20年研发制造经验,书写基因分析仪历史!,ABI公司基因分析仪发展历史,1986年 370型 全世界第一台基因分析仪1991年 373型 基因分析仪1995年 377 型 基因分析仪,光栅+CCD310型 毛细管基因分析仪1997年 377-96 基因分析仪1998年 3700型 96道毛细管基因分析仪 2000年 3100 16道毛细管基因分析仪2002年 3100 Avant 4道毛细管基因分析仪2002年 3730 48道毛细管基因分析仪3730xl 96道毛细

    4、管基因分析仪2004年 3130 4道毛细管基因分析仪3130xl 16道毛细管基因分析仪2007年10月 新一代超高通量序列分析仪SOLiD 全世界约2万台,中国800台,市场占有率85%,377(36/96),310 3130 3130xl 3730 3730xl,3100-A 3100,3700,电进样示意图,电进样的原理,毛细管和电极置于样品内施加电压电场中,带“-”电的DNA向另一端的 “+”电极移动,从而进入毛细管,,双侧荧光激发 双束激光两侧同时激发:灵敏度+均匀性+超速测序,信号收集方法比较,DNA测序的试剂,BigDye v1.1:更适用于PCR产物测序 BigDye v3.1:所有模板测序,ABI测序试剂 使用同样的反应条件,适于所有ABI测序仪,BigDye v3.1 和 v1.1 试剂盒,DNA测序的软件,DNA测序和片段分析软件大家族,Data Collection 仪器控制和数据收集 Sequencing Analysis 测序数据处理 SeqScape 序列比较,寻找突变 MicroSeq ID 细菌真菌鉴定 SeqScanner 测序数据阅读(免费软件),谢 谢,

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