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2-DNA测序原理.ppt
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1、2、DNA测序原理,Fred Sanger 弗雷德桑格尔,Leroy Hood 莱诺伊胡德,DNA分子组成,Adenine,Guanine,Cytosine,Thymine,碱基,戊糖(脱氧),磷酸,脱氧核糖核苷酸dNTP,脱氧核糖核苷,A,C,G,T,Sanger 测序双脱氧末端终止法,+,ddNTP 被加到正在合成的链上,由于它的3-OH已被氧化,下一个dNTP的5-磷酸基团不能与之形成磷酸二酯键,使合成终止。 在引物等延伸反应过程中,ddNTP在不同位置掺入,产生了一系列不同长度的新的DNA片段。,双脱氧末端终止法,DNA测序循环反应与普通PCR扩增的区别,测序只用一条引物;PCR需两条
2、引物 测序产物线性扩增;PCR产物指数扩增 测序需要dNTP和ddNTP ;PCR只用dNTP 测序产物是长度相差一个碱基的一系列片段;PCR产物是长度相同的一种片段,DNA sequencing: Chemistry,template + polymerase +,dCTP dTTP dGTP dATP ddATP ddGTP ddTTP ddCTP,extension,electrophoresis,AT GC AT TA CG TA GC GC AT GC TA TA CG TA GC AT,DNA测序的自动化,基因分析仪的基本构造,毛细管,进样端,检测窗口,DNA测序示意图,C T T
