1、实验六 酵母菌细胞 的形态观察、死活细胞 的鉴别,一、目的和要求,1观察酵母菌的出芽繁殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。 2掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。,二、基本原理,1形态观察：酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，通常比常见细胞大几倍甚至十几倍。大多数酵母菌以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。,2死活鉴定：美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型呈无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用
2、微弱的衰老细胞则成蓝色或淡蓝色。,啤酒酵母,酵母出芽,酵母菌出芽繁殖及芽体,三、器材,1、染液：吕氏碱性美蓝染液 2、菌种：酿酒酵母的斜面培养物 3、仪器和其他用具： 显微镜、载玻片、盖玻片等,四、操作步骤,1、美蓝浸片的观察：1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作用接种环挑取少量少量酵母菌苔放在染液中，混合均匀。染液不宜过多或过少，否则在盖上盖玻片时菌液会溢出或出现大量气泡而影响观察。2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。盖玻片不宜平放着放下，以免产生气泡影响观察。,3）将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并据颜色来区别死活细胞。 4）染色约0.5h后再次进行观察，注意死活细胞数量是否增加。 5）用0.05%吕氏碱性美蓝染液重复上述操作。,2、水-碘液浸片的观察在载玻片中央加一小滴革兰氏染色用碘液，然后在其上加三滴水，取少量酵母菌苔放在水-碘液中混匀，盖上盖玻片镜检。,五、实验报告,1、绘图说明所观察的酵母菌的形态特征。,酵母死活细胞的对比,六、思考题,（1）吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析其原因。（2）在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌？,
