1、无菌室空气污染情况的检验: |1 V f# l* N. t8 H“ U1 i定期检验无菌室空气污染情况，对改进灭菌措施，提高成品率是非常必要的。常用方法步骤如下：; 2 I7 ( D+ l2 z l* G2斜面检验法：将常用的琼脂斜面培养基各取二管，放入接种室，按无菌操作各将其中的一管的棉塞取出，放在灭菌的培养皿内。经过一定时间后，再将棉塞通过火焰，塞回试管，连同对照一起培养。经48 小时后，检验有无杂菌生长。和上边方法同。3空气污染情况检验：在接种过程中，人员的出过、器材的搬放、接种操作的动作等原因造成空气污染，检验方法是在准备工作结束后，接种操作开始时，按上述方法打开培养皿盖子或试管塞，经
2、 5 分钟、30 分钟或直到工作结束时再盖好，以检验在不同的使用时间内，空气污染的程度。a“ M5 d2 D1 M2 r5 1.目的本规程旨在为无菌操作及无菌室的保护提供一个标准化规程。( F, 1 e1 u. N1 . C* H+ H! W! x m* Q6 _2 G7 v; R8 a+ F6.2.无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。: N0 1 f( m- t5 w/ ? y) 0 h/ f! A8 k7 m) q- t! T6.3.严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。6.4.无菌室应备有工作浓度的消毒液，如 5的甲酚溶液，70的酒精，0.1的新洁尔灭溶液，等等。2 4
3、 # w3 P; U a: q$ m6.5.无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。; ( , b , A O6.6.需要带入无菌室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。) M+ s r6 U6 t* d6 s+ R7 A; F7 V4 l6 s( n6.7.工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用 70%的乙醇再次擦拭双手)，方可进入无菌室进行操作。$ j% h/ P- S2 S6.8.无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌 30 分钟以上，并且同时打开超净台进行吹
4、风。操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌 20 分钟。! M. m1 W/ R/ v5 j6.9.供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用 70的酒精棉球消毒外表面。5 n4 i6 y+ |6.10.每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。) D- l9 1 y, S4 t6 .11.吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。+ I+ h, C8 Z9 q9 t8 8 X6.12.接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。6.13.带有菌液的吸管，试管，培养皿等器皿应浸泡在盛有 5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒，
5、24 小时后取出冲洗。3 D9 % d0 l% M7 y% |; T1 S9 I q6.14.如有菌液洒在桌上或地上，应立即用 5%石碳酸溶液或 3的来苏尔倾覆在被污染处至少 30 分钟，再做处理。工作衣帽等受到菌液污染时，应立即脱去，高压蒸汽灭菌后洗涤。2 R! B0 6 X7 I+ T6.15.凡带有活菌的物品，必须经消毒后，才能在水龙头下冲洗，严禁污染下水道。0 K n* I Z9 A6.16.无菌室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下，取内径90mm 的无菌培养皿若干，无菌操作分别注入融化并冷却至约 45的营养琼脂培养基约 15ml，放至凝固后，倒置于 3035培养箱培养48 小
6、时，证明无菌后，取平板 35 个，分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露 30 分钟后，倒置于 3035培养箱培养 48 小时，取出检查。100 级洁净区平板杂菌数平均不得超过 1 个菌落，10000 级洁净室平均不得超过 3 个菌落。如超过限度，应对无菌室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。 4 O7 d e无菌室技术指导说明) B$ $ C9 J, “ S) 9 R) l$ Z% x6 a 8 ( + L( 在获得了无菌环境和无菌材料后，我们还要保持无菌状态，才能对某种特定的已知微生物进行研究或利用它们的功能，否则外界的各种微生物很容易混入。外界不相干的微生物混入的现象，在微生物学中我
7、们叫做污染杂菌。防止污染是微生物学工作中十分关键的技术。一方面是彻底灭菌，另一方面防止污染，是无菌技术的两个方面。另外，我们还要防止所研究的微生物，特别是致病微生物或经过基因工程改造了的本来自然界不存在的微生物从我们的实验容器中逃逸到外界环境中去。为了这些目的，在微生物学中，有许多措施。 Z4 Y! , 6 Q. F% d5 |: 无菌室一般是在微生物实验室内专辟一个小房间。可以用板材和玻璃建造。面积不宜过大，约 4 5 平方米即可，高 2.5: _) i; F5 w$ b8 H! c1 米左右。无菌室外要设一个缓冲间，缓冲间的门和无菌室的门不要朝向同一方向，以免气流带进杂菌。无菌室和缓冲间都
8、必须密闭。室内装备的换气设备必须有空气过滤装置。无菌室内的地面、墙壁必须平整，不易藏污纳垢，便于清洗。工作台的台面应该处于水平状态。无菌室和缓冲间都装有紫外线灯，无菌室的紫外线灯距离工作台面+ T5 x5 N9 w$ h, Y. V9 p c* U7 G+ f Q& w% p- Q K, u1 米。工作人员进入无菌室应穿灭过菌的服装，戴帽子。- V: T e, N l8 B“ H当前无菌室多存在于微生物工厂，一般实验室则使用超净台。超净台其主要功能是利用空气层流装置排除工作台面上部包括微生物在内的各种微小尘埃。通过电动装置使空气通过高效过滤器具后进入工作台面，使台面始终保持在流动无菌空气控制之下。而且在接近外部的一方有一道高速流动的气帘防止外部带菌空气进入。在条件较困难的地方，也可以用木制无菌箱代替超净台。无菌箱结构简单，便于移动，箱正面开有两个洞，不操作时用推拉式小门挡住，操作时可以将双臂伸进去。正面上部装有玻璃，便于在内部操作，箱内部装有紫外线灯，从侧面小门可以放进去器具和菌种等。无菌操作技术当前不仅在微生物学研究和应用上起着举足轻重的作用，而且在许多生物技术中也被广泛应用。例如转基因技术、单克隆抗体技术等
