1、细胞内多糖和过氧化物酶的定位,Experiment 8,【实验目的】掌握显示细胞中多糖和过氧化物酶反应的原理和方法,【实验原理】高碘酸雪夫试剂反应，简称PAS反应。主要是利用高碘酸作为强氧化剂，这种强氧化剂能打开C-C键，使多糖分子中的乙二醇变成乙二醛，氧化所得到的醛基与Schiff试剂反应形成紫红色化合物。颜色的深浅与糖类的多少有关。 细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色或棕色络合物，根据蓝色或棕色的出现来表示过氧化物酶的存在。,【实验材料】一、仪器：显微镜、镊子、染色钵、刀片、载玻片、盖玻片、吸水纸等 二、材料：马铃薯块茎、洋葱根尖或洋葱鳞茎 三、试剂： 1高碘酸溶液： 高碘酸（HIO4
2、2H2O） 0.4g，95%乙醇 35ml，M/5醋酸钠溶液（2.72g醋酸钠溶于100ml H2O） 5ml，蒸馏水 10ml 2Schiff试剂 3亚硫酸水溶液 470%乙醇 5联苯胺溶液：在0.85%盐水内加入联苯胺至饱和为止，临用前加入20%体积的H2O2 ，每2ml加一滴。 60.1%钼酸铵溶液：称取0.1g钼酸铵溶于100ml 0.85%盐水,【实验内容】 （一）细胞中多糖的测定：高碘酸雪夫（PAS）反应 1把马铃薯块茎用刀片徒手切成薄片。 2浸于高碘酸溶液515min 。 3移入70%乙醇中浸片刻。 4Schiff试剂染色15min 。 5亚硫酸溶液洗三次，每次1 min。 6蒸馏水洗片刻。 7装片镜检。 （二）细胞中过氧化物酶的测定：联苯胺反应 1把洋葱根尖徒手切成2040m厚的薄片或用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块。 2浸在溶有0.1%钼酸铵的0.85%盐水溶液中5min（钼酸铵的作用是催化剂）。 3浸在联苯胺溶液内2min至切片出现蓝色。 4在0.85%盐水溶液中洗1min 。 5将薄片置于载玻片上展开，盖上盖玻片，显微镜检查。,【作 业】1简述PAS反应及联苯胺反应的原理。 2. 绘图示细胞中多糖及过氧化物酶的分布。,
