Nanodrop 2000中文操作守则.pdf

1、 Nanodrop 2000/2000C 分光光度计 V1.0 用户守则 基因有限公司仪器应用技术支持 亲爱的用户，您好！ 非常感谢您选购我公司代理的仪器。 我们将竭诚为您提供优质的售后服务及免费的专业应用培训。 为了更好地进行仪器的应用培训，我们根据您所选购的仪器特点，将需要您配合准备的工作敬告如下： 1. 应用培训内容：仪器操作培训和软件应用培训。仪器操作培训包括：仪器的操作、维护和仪器使用注意事项。软件应用培训包括：用户本次所购买的同仪器配套的所有软件的软件应用培训。 2. 培训时间：仪器正式安装调试后，本公司 2 周内派出专业技术人员进行应用培训。 3. 应用培训中所需准备的试剂、耗材

2、和仪器均需由用户提供，并在系统培训开始前准备好。我公司将指派专业技术人员免费进行应用培训。 4. 用户签收售后服务工作报告后，基因公司正式的系统培训内容即完成。您以后在使用的过程中有任何疑问都可以向我们咨询，我们非常乐意为您们解决应用上遇到的问题。 5. 在仪器的使用过程中，无论遇到您认为多么微小或繁琐的问题，请您及时和我们联系，一个及时的通知能节约您的时间，也能帮助我们更好的了解仪器和软件。 6. 联系我们时请您提供：仪器型号、软件名称，版本、错误代码、实验目的、操作系统（98/2k/xp/NT） 、维修历史等相关资料。 本守则提的信息仅供参考，本守则包含的所有信息应该是正确和完整的。如果对

3、本守则中的描述有疑问，请参考厂家的英文操作说明。如果由于您的不正当使用而对仪器造成损坏或者导致仪器的性能损伤，本公司将不会对此负责。 1 仪器介绍 仪器描述 Thermo Scientific NanoDrop 2000/2000C 分光光度计可以检测 0.5-2ul 的样本，而且检测有非常高的准确性和重复性。 ND2000C 分光光度计不仅提供了NanoDrop 样品保留专利技术的便利性，还可以使用传统的比色皿来进行样本检测。 样本保留系统应用了表面张力来把样本保留在两根检测光纤中间， 这使得仪器可以检测较高浓度的样本而不用稀释。应用这个技术，全波长（ 190 840nm）NanoDrop

4、2000/2000C 分光光度计检测样本的最高浓度是标准比色皿的 200 倍。 仪器规格 NanoDrop 2000/2000C基座模式 仪器类型： 分光光度计 最小样品量： 0.5ul 波长： 1mm（可以自动调整到 0.05mm） 光源： 氙闪烁灯 检测器类型： 2048象素线型硅 CCD阵列 波长范围： 190 840nm 波长准确性： 1 nm 光谱分辨率： 1.8nm（ FWHMHg 253.7nm） 吸收光精确性： 0.002吸光值（ 1mm光程） 吸收光准确性： 2（ 257nm波长下， 0.76个吸光值） 吸光值范围： 0.02 300（等同于 10mm光程时） 检测极限： 2

5、ng/ul dsDNA 最大检测浓度： 15,000ng/ul（ dsDNA） 检测时间： ThermoThermo Software IQ。 3 按照操作提示来认证您系统软件的安装。 4 使用 Help菜单进入 Thermo IQ User Guide PDF. 线连接 在使用仪器进行样品检测前，需要使用 USB连接线把仪器和电脑相连，把 12V的电源线接到仪器背面的插口上，并连接电源。 当仪器不使用时，电源不用拔下，当仪器处于“待命”状态时，其功率为 5W，这时闪烁氙灯处于关闭状态。 在仪器背面的电源线插口上面有一个 LED灯指示仪器正连接上 12V电源。 注册您的仪器 请及时注册您的仪器

6、，我们会在网上升级软件并且免费增加新的特性。我们会及时更新我们的用户名单，这样我们可以及时通知您这些软件的更新。所有提供的信息都市完全可信的，请在网上注册您的仪器。 软件特征 NanoDrop 2000/2000c软件被分为左右两块，状态栏和工作按键在左侧，而右侧显示主菜单和数据窗口。在 NanoDrop 2000的用户守则中有一个“附件”中包括一页软件特征总则。 软件左侧部分 任务栏 任务栏选项包括以下几个选项： Home显示特定用户群所能够操作的应用的主菜单，默认的用户群为Classic。 My Date管理数据的存档和恢复。样品数据保存在用户指定的文件夹中，请参考“数据和帐户管理”来查看

7、详细内容。 Options包括 4个控制键，请参考“数据和帐户管理”来查看详细内容。 任务工具栏选项可以打开特定的应用，包括： Measure（指定应用）显示最近选择的应用。 Reports包括下列三个功能键： Report显示累积的样品数据结果表格，并显示选择样品的吸光图谱。 Configuration选择一个报告栏显示，并选择报告栏显示的顺序。 Print选择需要打印的相关信息，设定打印页面格式和报告中打印图标的格式。 Oligo Calc（仅应用于核酸和 Micro Array）计算特定核酸分子的分子量，激发效率，浓度因子和熔点。请参考“核酸”和“ Micro Array”中的“ Oli

8、go Calc”来获取详细信息。 Dye/Chrom.Editor（仅应用于 Miro Array和 Protein & Labels）让用户进入并编写新的染料参数，参考 Miro Array和 Protein & Labels中的Dye/Chrom.Editor来获取详细信息。 Editor Options（方法编辑栏内）为编辑方法设定可用的选择。 功能键 当应用被打开时，下列的四个功能键被显示在左侧栏的顶部： Measure开始进行样品检测，这个功能键在刚进入一个应用时是灰色的，当做好空白对照后才能使用。 Print Screen在默认打印机上打印样品的数据和相应的光谱图。 Blank使用

9、溶解样品的缓冲液来做空白对照。在进行样品检测前必须先做空白对照。 Re-Blank使用溶解样品的缓冲液来再做个空白对照。 Re-Blank功能会对最近的一个样品浓度重新计算，并在屏幕上显示修正后的光谱图。 当选择 Method Editor或者 Kinetic Editor时，会显示下列四个功能键： New开始建立一个新的客户定制型方法。 Save在当前选择的组中保存编写的方法。 Measure打开编写好的方法。 Delete删除一个方法。 左侧栏的其他特征选择 主工具栏选择 File主工具栏下拉菜单中包括下列选项： New Workbook打开一个新的工作本， 而当前使用的工作本将被保存并自

10、动关闭。 Close Workbook and go Home关闭当前的工作本并回到主页面，当工作本被关闭时所有的数据都会自动保存。 Close All Workbook and go Home关闭所有工作本 （所有运用和方法）并回到主页面。 Print Report在默认打印机上打印当前报告。 Use current setting as default当一个新的应用工作本被打开时，把当前的应用参数如：样品类型，单位，基线校准波长和比色皿类型设定为默认。设定好后，当前报告格式也会被设定为默认。这个功能在每个应用和方法中设定特定用户选择时非常有用。 E-mail current workboo

11、k把当前的工作本粘贴到一个新的 Email中。当要把这些数据发到 NanoDrop厂家技术支持那里时，请使用 My Date 任务栏来定位合适的自动保存文件。使用软件打开文件并发送给技术支持。 注意：虽然在打开自动保存的文件时所有报告内容不能显示，但是所有内容可以被技术支持恢复。 Help在任何界面下都可以运用： Ctrl-m， Ctrl-h或者 F1键以查看帮助文件。 在帮助菜单下的参考选项提供了当前的软件版本和仪器型号。 左边窗口的仪器参数设定 Add to Report指样品数据是否要被添加到当前的报告中。 虽然所有数据被备份到自动保存的工作本中并可在以后恢复，在日常使用时最好 把 Ad

12、d to Report选择上，这样使数据恢复更容易。在样品检测前选择添加到报告中来把结果保存到报告和工作本中。 Overlay spectra显示独个光谱图，一个交叉指针被显示并和最近检测的样品相关联。当覆盖光谱被选择，点击一个光谱来关联交叉指针。 覆盖的样品编号显示在左侧突变的顶部，最后一个检测的样品显示在图的最上面并被标记为红色。在不同的图谱上点击可以把这个图谱显示为红色。 在进行新样品检测时，去选择 Overlay Spectra将清空所有光谱。 Small sample volume （仅仅适用于核酸和蛋白 A280运用） 当样品在 10mm光程的吸光值在 3.0或者以上时，可以只使用

13、 0.5ul样品进行检测。 Use Cuvette（仅仅适用于 NanoDrop 2000c）激活比色皿检测，客户使用比色皿检测时可进行的选择包括： Pathlengh包括 10， 5， 2，和 1mm Stir Speed速度设定范围是 1 10，默认设定为关闭。 Heat to 37 把比色皿槽加入到 375。选择上后，当前的温度将被显示在软件屏幕的底部。加热需要大约 1 10min才能达到 37。把样品加热到 37需要的时间依赖于样品温度，在默认情况下，加热模块是关闭的。 注意：如果更改一个不同的应用，加入模块将被关闭。然而如果使用相同的运用但使用基座检测，加热模块将继续运行。 右侧栏

14、右侧栏包括下列主菜单： Group drop-down box选择首选菜单显示和相应的应用，默认的选择是Classic NanoDrop。 Predefined application buttons额外的主菜单选择。 User-Defined list在用户定义方法或者动力学前是空的， 当客户定义了方法或者动力学，定量方法左边有一个量标签，而动力学方法左边有一个时钟标签。 当一个应用被打开时，右边栏显示样品的光谱图以及相关运用的数据。在用户守则文件图标上部有基座检测或者比色皿检测的标签。 图像显示 图像面板显示最新检测的样品光谱图。当选择了附件图片的功能，就可以显示多个样品的数据结果。样品名

15、称号显示在左侧栏的顶部。最近检测的样品显示在结果栏的最上面，其光谱图显示为红色。 注意：点击较早检测的样品名可以打开结果并让其图谱显示为红色。 虽然样品光谱图显示的数量没有限度， 软件在全屏状态下只能在左边最多显示 28个样品的名称。当达到显示最大数量时，样品列表就会出现一个下拉框。 光谱图上的区域可以被放大，点击鼠标左键，在想放大的区域拉一个框，然后再点击一下框。 要把放大的区域缩小回去，鼠标右击显示多选择菜单： Autoscale all sample为高浓度样品设定较高的 Y-轴上限，为低浓度样品设定较低的上限，来保证样品吸收光图谱完整显示。 Full Display all sampl

16、es为所有样品重新设定 X和 Y轴值来显示全部光谱图。 Set Scale手动设定 Y轴最大和最小值。 Sample labels（仅适用于 UV-Vis）为最近的样品选择一个特定的吸收光波长，显示在光谱图中。 Sample legend确定是否要显示样品的名称 数据和帐户管理 我的数据 样品检测的结果被记录在工作薄中并保存在客户指定的文件夹。 通过左侧栏我的数据任务栏来保存工作薄。使用查询框来找到保存的感兴趣的工作薄。 当我的数据任务栏被选择时在左边栏有两个有效的工具。选择 New 打开一个新的工作薄在右侧突出其应用。选择 Open打开选择的工作薄并开始相关的应用。额外的检测结果可以添加到打

17、开的工作薄中。 在新建和打开按键下有五个快速链接可以进入存档的工作薄， 然后显示在右侧栏中。双击一个工作薄打开文件，并可让其他的检测结果附加到工作薄中。 注意：如果要把一个样品的检测结果加到一个工作薄中，在进行样品检测前必须把“添加到报告”键选上。 Report 报告是用户定制型的显示样品结果的表格。一旦打开一个应用或者用户方法，就可以看到报告任务栏，可以通过点击任务栏来打开报告。 当选择了报告任务栏后，在右栏中显示下列三个设定： z Report在一个打开的工作薄中显示保存的样品数据。在页面底部的报告栏中可以显示选择的样品光谱图。如果没有选择样品，则报告栏显示表格中第一个样品的光谱图。可以通

18、过选择报告表格中的的多个样品数据来显示多个光谱图。 z Configuration选择报告栏显示的内容和顺序。只有那些选择的栏目的信息才会出现在导出的报告文件中。参考下列的导出报告内容获取 更多信息。 z Print为报告添加标题和副标题。 检测的方法信息和光谱图可以随报告表格一起打印。 注意： 可以通过点击应用或者检测方法显示图下面的波浪图标签来显示一个仅仅查看的报告文件。 当选择了报告任务栏，在左侧栏的顶部可以显示三个图标： z Preview在打印报告前预览报告。应用选择工具栏或者打印图标来显示选择的页眉和页脚信息。参考“ Date and Account Management”中的“

19、Options”来获取详细信息。 z Print开始打印一个报告。 z 把报告导出为 .xml， .tsv，或者 .tebk格式文件，特定的选项包括： Report， Excel XML Spreadsheet（ *.xml） 把报告保存为可以使用 Excel表格打开的文件。这个保存格式只能把报告保存为表格。在保存报告前必须配置报告显示内容。 Report， Tab Separated Values（ *.xml） 把报告保存为可以用记事本或者 Excel文件打开的格式。这个保存格式只能把报告保存为表格。在保存报告前必须配置报告显示内容。 Spectrum， Excel XML Spreads

20、heet（ *.xml） 保存选择样品的每个波长下的吸光值，可以在 Excel表格中打开结果。如果选择了多个样品，则可以在 Excel的多个工作表中保存每个波长下相应的吸光值。 Spectrum， Tab Separated Value（ *.tsv） 保存选择样品的每个波长下的吸光值，可以在 Excel表格或者记事本中打开结果。多个样品的结果可以分别保存在一个工作栏中。 Spectra， New Workbook（ *.twbk） 把选择的样品数据保存为一个新的工作薄，可以在 NanoDrop 2000/2000c软件中再打开。 ND Legacy（ *.tsv） 保存相应波长下的每个吸光值

21、，并在报告中保存调整好的特定区域。这个功能可以在一个工作薄中保存多个样品数据并可以使用记事本或者 Excel打开。在导出前必须配置报告显示内容。 注意： Spectra， New Workbook（ *.twbk）和 ND Legacy（ *.tsv）在动力学检测时不能使用。 如果电脑不能识别 .xml文件为 Excel，可以通过 Excel打开这些文件。 向以前的工作薄中添加数据 如果在一个工作薄打开时关闭软件， 会出现一个信息为你是否想把数据添加到工作薄中，这样下次打开这个应用时就可以显示这些信息。通过我的数据工具栏来打开工作薄，这样可以在软件关闭前把数据添加到关闭的工作薄中。 在做蛋白定

22、量实验时，建议在添加新结果到工作薄之前，按照操作说明建立一个标准曲线。 重新处理 在某些应用模式下，在左侧栏的顶部有重新处理工具。这个工具可以基于不同的基线校准波长，浓度单位或者样品类型对样品重新进行浓度计算。这个功能不能用于重命名的样品。重新处理栏可以在报告内容配置栏上选取。 注意：重新处理的样品数据将作为一个新的数据出现在当前报告中，重新处理数据不会备份倒自动保存的工作薄中。 重命名一个样品 任何时间都可以在报告中修改样品的名称。 注意：样品名称的修改不会反应到自动保存的文件中。 自动保存文件 除动力学检测结果，其他所有结果都自动存档为 Autosave file（ *.twbk），存档位

23、置依赖于电脑的操作系统。 Vista: C:UsersPublicPublic DocumentsThermoAutosave (Software Application) XP: C:Documents and SettingsAll UsersShared DocumentsThermoNanoDrop2000 Autosave (Software Application) 自动保存文件包括了 24小时内检测的所有样品数据， 这些数据按应用和方法自动分类。自动保存文件并不是用户可以修改的工作薄。由于数据可以附加到用户定制型的工作薄中，用户定制的工作薄通常和自动保存文件不匹配。 如果需要恢复

24、用户定制的工作薄中没有保存的数据，使用 NanoDrop 2000/2000c软件打开相关的自动保存文件，选择感兴趣的样品，导出结果为 Spectra， New Workbook（ *.twbk），使用我的数据任务栏来查看新的工作薄。 如果自动保存的工作薄已经打开，在新的检测之前必须关闭工作薄。 选项 在选择任务栏下有丝个工具栏： z Application添加新的用户组和相关的应用方法设定。要添加一个新的组，输入组名并点击 Add。可以把一个或者多个应用拉到空白键中来定制组的显示内容。 有两个方法可以显示客户定制方法而不是标准方法： 把客户定制的方法拉到一个特定的菜单按键中。 把方法列表包括

25、到一个主菜单选项中。当前的方法不会显示在选项屏幕中，而回显示在对应组的主页中，由于文本框的大小限制，方法列表只能显示最上面的 9个菜单按键。 使用 Delete group按键可以删除整个组，使用页面底部的 Clear App Buttons来重新设定应用键。 z Report Master Page编写打印报告的页眉和页脚的布局。使用这个功能，可以选择页眉是否包括单位名称， Logo，日期或者时间。页脚选项包括额外文本和页码。这些选项可以用来打印所有应用和用户定制方法的报告。页面设定按键可以显示页面大小和打印边框的窗口。 z Preferences确认这些设定是对特定的用户可用还是对所有用户

26、可用。选择Support Dymo Label printer来应用独立的程序来打印报告。在这个标签下，可以选择快捷键，请参考下表的快捷键。 在动力学方法中， Re-Blank功能键被 Stop功能键所替代。 z Account管理那些用户或者用户群有权限更改或者调整报告，定义默认设定和修改标准曲线。另外，覆盖文件或者改变文件保存路径也是由 Account键控制。 帐户页的左侧显示一系列控制类别的路径。 每个控制类别包括特定用户或者用户组的软件特征够可以进入。可以进入的类别包括： z Allow access to： Options让用户或者组能够进入：应用，报告管理页面，参数选择和帐户。 R

27、eports能够让客户或者组能够在报告屏幕下可以进入配置标签和再生键。 Editor让用户或组能够删除用户编写的方法，保存动力学方法。 Use Current Settings as default把当前的应用参数设定卫为默认值。 Overwrite files在已存的工作薄名下保存一个新的工作薄。 z Allow access to Groups： 用户可以进入，添加，删除，修改组。 要进入上面描述的特定的路径： 1. 在左侧突出显示感兴趣的特征，对每个小类的路径都必须分别授权。 2. 使用 List names from 和 Organization的下拉菜单来选择特定的用户和组。 3.

28、点击 Add把用户或者组移动到中间框中。只有那些在中间框中的名称才能进入左边栏的突出的软件特征。在默认情况下，对于每个应用用户组都要添加到允许的路径中。 下拉框和列表框： z List name from显示可以从中选择的区域列表。 z Organization显示选择区域中的组织列表。（如果本地区域被选择了，就不选择这个列表了） z Allow access to授权给用户或者组可以使用前面描述的软件参数。 要添加一个用户或组到用户或组列表中，在页面底部的 Select or enter a name区域输入一个有效的用户名或组名，再点击 Add键。 名称必须包括区域名，如果一个名称是有效的

29、，就可以出现再授权列表中。如果如果命名无效，将会出现一个警告信息提示您。 z User and Groups一个选择的区域中的有效的用户列表。 3应用 总论 使用 NanoDrop 2000/2000c分光光度计可以方便的使用微量样品进行紫外可见分光检测。 NanoDrop 2000/2000c可以应用于如下检测： z 不用稀释可以检测浓度小于 15000ng/ul（ dsDNA）的核酸浓度和纯度 z 普通的紫外可见分光光度检测 z 纯蛋白浓度检测（ A280） z Micro array和 Protein & Labels应用中的荧光染料基团检测 z 扩展的光谱检测，定量应该标记蛋白，金属蛋

30、白 z BCA蛋白定量分析 z Bradford蛋白定量分析 z Lowry法蛋白定量分析 z Pierce 660nm蛋白定量分析 z 微生物细胞培养检测 z 动力学检测 z 用户自己编辑检测方法 快速启动 1. 双击软件图标，并在右栏中选择感兴趣的软件应用。 在进行检测签选择 Add to report来把样品数据保存到一个工作薄中。 2 使用合适的缓冲液来建立一个空白对照。 基座模式：取 1 2ul空白液加到底部基座上，放下检测臂并点击 Bank。 比色皿模式（仅仅 2000c）：选择 Use Cuvette，按仪器上指示箭头插入比色皿。检测光束（ 2mm）位置在比色皿底部以上 8.5m

31、m，参考比色皿生产厂家的建议来确定需要液体体积。 注意：使用比色皿检测时，也需要把检测臂放下。在使用基座检测时，建议把比色皿拿出以保证基座臂能放到合适的位置。 3 使用干净无尘纸把基座上的空白液擦干净，在合适的位置输入样品名称，取1ul样品进行检测。 注意：每次检测的样品都必须是刚加入的。 检测后： z 使用干净的无尘纸擦掉上下基座上的样品，即可用于下一个样品检测。 z 当使用比色皿检测时，拿出比色皿，在做下一个样品前清洗干净并凉干。 虽然没有必要在做每个样品之前都做空白对照，但建议在做一种样品检测 30min后做一次空白对照。 30min后，最后一次做的空白对照的时间会显示在底部状态栏上。

32、在 NanoDrop 2000的用户指南的附件上有一个快速使用指南，其中有空白对照和样品检测的操作说明。建议把这个指南打印出来贴在仪器附近作为参考。 注意：上面说的染料的检测范围只针对玉基座检测。 核酸 总论 使用 NanoDrop 2000/2000c可以很方便的检测核酸的浓度和质量。要检测核酸在主页面上选择 Nucleic Acid功能。 核酸浓度计算 使用 Beer Lambert定律来进行核酸浓度计算： C核酸浓度，单位 ng/ml A AU的吸光值 消光系数，单位 ng-cm/ml b光程，单位 cm 通常情况下核酸的消光系数为： z 双链 DNA： 50ng-cm/ul z 单链

33、DNA： 33ng-cm/ul z RNA： 40ng-cm/ul 当选择基座模式， NanoDrop 2000/2000c分光光度计使用 1.0mm到 0.05mm的短光程来进行检测，这样保证不用稀释就可以检测高浓度样品。 注意：报告中的吸光值可以象软件屏中显示的模式存档。不论基座检测还是比色皿检测，核酸检测的吸光值被一致化为 1cm光程下的读数值。 NanoDrop 2000/2000c分光光度计可以准确检测 15000ng/ul的双链 DNA而不用稀释。对每个样品，软件会自动选择最佳的检测光程进行检测。参考“ Measurement Ranges”来获得详细信息。 当检测样品的吸光值 3

34、.0时（ 1cm光程下），可以使用较少量的样品进行检测。 独特的屏幕显示 右侧栏显示核酸检测特定的配置，左侧的任务栏在“ Software Overview”中有详细描述 光谱图中显示的数据都是一致化为 10mm光程下的读数。 光谱显示的右栏包括以下内容： z Sample ID输入样品名称，在进行样品检测时应输入样品的名称。 z Type一个下列菜单来选择检测的核酸类型，选择 DNA-50做 dsDNA检测，RNA-40做 RNA检测， ssDNA-33做单链 DNA检测。其他选择包括， DNA寡核苷酸核 RNA寡核苷酸，需要输入相应的吸光系数。可以输入的吸光系数范围时 15 150。 z

35、Conc通过 260nm处的吸光值和消光系数计算得到的浓度值，浓度单位可以在后面的下拉框中选择。参考“ Nucleic Acid Calculations”中的详细信息。 z A260显示 10mm光程下的 260nm处的吸光值。 z A280显示 10mm光程下的 280nm处的吸光值。 z 260/280 260nm和 280nm处的吸光值的比值， 这个值用来判定 DNA和 RNA的纯度。纯 DNA的比值在 1.8左右，纯 RNA的比值在 2.0左右。如果这个比值偏小，表明有蛋白，苯酚或者其他污染物存在，这些物质在 280nm处有明显的光吸收。 z 260/230 260nm和 230nm

36、处的吸光值的比值，这是一个次要的核酸浓度指示值。纯核酸的这个比值比 260/280比值大，一般在 1.8-2.2之间，如果比值偏低，表示核酸中有污染物。 z Baseline correction如果选择了基线校准，默认的校准波长为 340nm。用户可以根据试验需要输入不同的校准波长。在任何试验下，基线都是自动设定为选择波长下的吸光值。所有波长下的读数都要减去这个值。 注意：如果不选择基线校准，光谱值将会产生偏移，计算的浓度也会改变。 核酸浓度检测 1 在主菜单中选择核酸模式，如果显示波长校准窗口，放下基座臂点击 OK。 2 选择检测的样品类型，默认的设定为 DNA-50。 3 选择浓度单位，

37、默认的为 ng/ul。 4 默认的校准波长为 340nm， 重新选择一个校准波长或者去选择 Baseline来不选择校准波长。 5 选择 Add to Report自动把检测结果添加到当前报告中去，默认设置是把每个样品都添加到报告中。 要把样品数据保存到工作薄中， 在检测前必须选上 Add to report。 6 选择 Overlay spectra可以在同一时间显示多个光谱。 7 使用合适的液体建立空白对照，空白对照液体是溶解目标分子的液体。空白对照液体的 pH值和离子浓度应和检测样品一样。 z 基座模式：取 1-2ul空白对照加到基座上，放下检测臂，点击 Blank键。 z 比色皿模式（

38、仅 ND2000c）：插入比色皿时注意仪器上箭头指示方向。光束（ 2mm宽）位置再比色皿底部以上 8.5nm的位置，请按照比色皿生产厂家的建议加入液体。 注意：对于所有模式检测，检测臂都必须放下。在做基座检测前，要把比色皿拿出来了，这样可以保证检测臂放到正确的位置。 8. 在指定的位置输入样品名称，按上面检测空白对照的操作进行样品检测。 注意：每次检测的样品都必须是新加的。 检测后 z 使用干净的无尘纸擦干净上下基座，这样仪器就可以进行下一个样品检测了。 z 当使用比色皿时，取出比色皿，彻底清洗比色皿并晾干。 Oligo Calc Oligo Calc 用来计算特定核酸序列的分子量，消光系数，

39、浓度因子和溶点。选择这个任务栏将显示两个键： z Oligo Calc用来输入感兴趣的序列，并选择合适的样品类型。 z Melting Point显示 DNA序列熔点的结算结果。 这个功能键仅在 DNA序列检测时出现。 要使用 Oligo Calc： 1 使用如下方法来输入一个碱基序列： 使用碱基序列显示框下的按键。 键盘（仅仅能使用 A， C， G， T，和 U来输入碱基） 复制和粘贴一个序列到显示框（仅仅能使用 A， C， G， T，和 U来输入碱基） 清除碱基序列框中的序列， 点击序列框右侧的 Clear键， 单个可以手动来删除。 2 选择磷酸化程度，可以选择： DNA单磷酸化， RNA

40、单磷酸化和三磷酸化。 3 如果需要可以选择双链，互补的双链序列能够包括在计算中。 4 在下拉框中，选择检测的核酸类型，默认的为 DNA。 5 如果要添加序列选择 Modification并输入相关的分子量。 Oligo Calc分析结果区域包括： 分子量 显示碱基序列计算得到的分子量。 消光系数 显示 260nm波长依赖的消光系数，单位是 ng-cm/ml。 浓度因子 基于消光系数的常数，用来计算碱基序列的浓度。 碱基数 显示输入多少个碱基。 %GC显示序列中的 G/C含量。 要计算 DNA序列的熔点： 1 按上面说明输入序列，如果序列已经输入到 Oligo Calc Tab中，序列框中将自动

41、计算序列的熔点。 2 按下列说明在框中输入合适的数值： Oligo Molarity输入样品序列的摩尔浓度，默认的值为 10um，但是可以根据不同的样品更改。 Cation Molarity输入样品的阳离子浓度，默认的值为 50um，但是可以根据不同的样品更改。 Formamide输入样品中的氨基浓度，默认值为 0，但是可以根据不同的样品更改。 熔点分析结果区域包括： Salt Adjusted计算序列的熔点，不考虑盐对相邻碱基的相互作用影响。 Nearest Neighbor计算序列的熔点，考虑盐对相邻碱基的相互作用影响。 微阵列 总论 通过这个功能可以筛选有效的荧光标记杂交探针用于芯片试验

42、， 这样避免潜在的不好的探针，可以提高试验效率。 NanoDrop 2000/2000c可以检测荧光染料的吸收光强度，最低可以检测 0.2pmol/ul的荧光染料。软件可以自动应用相应的波长检测样品的吸光值。 检测浓度范围 NanoDrop 2000/2000c可以准确检测荧光染料标记的核酸浓度达： 100pmol/ul的Cy3以及 750ng/ul的 DNA。 染料 /发色团编辑 用户可以在 NanoDrop 2000/2000c软件中选择预设好的染料，也可以使用染料 /发色团编辑功能来添加新的染料。要添加一个新的染料，选择 Show 栏（第一列），这将激活手动输入的区域，参照染料制造厂家的

43、说明来填写合适的校准参数。当合适的染料被选择了， 260nm的校准将被自动应用到核酸浓度计算中。当所有参数填写好后，保存这些信息。 要删除一个用户自定义的染料，点击左侧（）键旁边的灰色框选择要删除的染料，然后点击键盘上的 Delete键或者使用鼠标右键来删除。预编辑好的那些荧光染料，在编制栏是被锁定的，不能被删除。默认的设定是染料 1是 Cy3，染料 2是Cy5。 独特的屏幕显示 右侧栏显示 Micro Array应用独特的功能键，左侧任务栏上的功能键参考“ Software Overview”的描述。 光谱显示了当前样本在 1nm光程下的数据，光程信息显示在 Y轴。 右侧的光谱显示栏包括下列

44、部分： Sample ID输入样品名称的区域。应在样品检测前输入样品名称。 Type用户可以在下拉菜单中选择检测的核酸类型。选项包括： DNA-50用于检测 DNA， RNA-40用于检测 RNA， ssDNA-33用于检测单链 DNA，其他选项还有 Oligo DNA和 Oligo RNA，可以根据不同的序列使用合适的消光系数。Custom选项可以输入消光系数的范围是 15 150。 Conc使用特定的消光系数和 260nm波长下的吸光值来计算浓度。 浓度单位可以在下拉框中选择。 使用 Beer定律来计算核酸浓度， 可以参考 “ Nucleic Acid Calculations”。 A26

45、0显示校准到 10mm光程下的 260nm波长下的吸光值。 注意：显示的 A260值并不同于样品在 260nm下的吸光值（以 750nm波长为参比波长）。 A260值在计算核酸浓度时考虑到染料对吸光值的影响，采用染料校准因子对检测结果进行了校准，吸光值校准采用选择的校准波长和 750nm基线。从而显示的 A260值和用来计算的核酸浓度的吸光值不一样。 260/280 260和 280nm吸光值的比值。 这个比值用来判定 DNA和 RNA的纯度。对于 DNA来说比值为 1.8时认为是纯的 DNA，对于 RNA来说比值为 2.0时认为是纯的 RNA。如果比值偏低，表明核酸中存在蛋白，酚或其他在 2

46、80nm 处有吸光的杂质。 Dye1（ 2） ：选择染料，默认的选择是：染料 1（ Cy3），染料 2（ Cy5）。 Abs每个染料在 1mm光程下的吸光值。 pmol/ul基于每个荧光染料的消光系数计算出来的浓度，可以在下拉框中选择浓度单位。 Analysis correction在计算浓度前，减去参比波长下的吸光值。这仅仅影响报告的核酸浓度，默认的参比波长为 340nm。 注意：对所有可见光检测，软件的校准波长为 750nm，并自动以 400nm和 750nm吸光值为基线进行染料浓度计算。 进行微阵列检测 1 在主菜单中选择 Micro Array功能，如果显示了波长确认窗口，确保检测臂放

47、下，并点击 OK。 2 选择检测样品的类型，默认的设定为 ssDNA-33。 3 在下列框中选择浓度单位，默认的单位是 ng/ul. 4 使用染料 1或者染料 2后面的下拉框来选择染料，默认的染料设定：染料 1（ Cy3），染料 2（ Cy5），如果仅标记了一个染料，在染料 2类型上选择 None。 5 默认以 340nm的吸光值为核酸校准值。通过取消选择 Analysis correction框来选择或者不选择参比波长校准。 9 在文件下拉条中选择 Use current settings as default，这是一个便捷的方法来限定每个心工作薄的设定时间。 6 选择 Add to rep

48、ort来自动把当前检测的结果添加到报告中去。默认的设定是把所有的报告添加到报告中。为了把一个检测结果保存到工作薄中，必须在检测前把 Add to report选择上。 7 选择 Overlay spectra 来同时显示多个光谱图。 8 使用合适的 buffer来检测空白对照： 9 基座模式：取 1 2ul空白溶液加到基座上，放下检测臂并点击 Blank。 9 比色皿模式（仅 2000c）：按照比色皿生产厂家的建议加入适量的空白溶液，按照仪器上标记的光路放心，插入比色皿。 注意：用任何模式检测时检测臂都必须放下，在用基座检测时，建议把比色皿从仪器上取出，以保证检测臂放到合适的位置。 9 输入样品名称，按做空白一样加入样品点击 Measure开始检测。 注意：每次检测的样品必须是新鲜加入的！ 检测以后： 9 用干净的无尘纸擦拭干净上下基座，这样仪器就可以进行下一个样品的检测了。 9 当使