1、药学专业综合实验（二）题目：黄芩中黄芩苷的提取、分离与鉴定学院： 医药学院 班级： xxxxxxxxxxx 姓名： xxxxxxxxxxxxxxx 学号： xxxxxxxxx 黄芩中黄芩苷的提取、分离与鉴定黄芩简介：黄芩又名山茶根、黄芩茶、土金茶根；为唇形科植物，以根入药。有清热燥湿，凉血安胎，解毒等功效。含多种黄酮类化合物，主要为黄芩甙，黄芩素，汉黄芩甙，汉黄芩素，-甲氧基黄芩素，-甲氧基去甲基汉黄芩素，黄芩黄酮，黄芩黄酮等。主治温热病、上呼吸道感染、肺热咳嗽、湿热黄胆、肺炎、痢疾、咳血、目赤、胎动不安、高血压、痈肿疖疮等症。产于河北、辽宁、陕西、山西、山东、内蒙古、黑龙江等。一、实验目的1
2、 掌握从黄芩中提取、精制黄芩苷的原理、方法及操作要点。2 掌握黄芩苷的结构鉴定原理及方法。二、实验原理黄芩苷为一连有葡萄糖醛酸结构的黄酮化合物，具有一定的脂溶性和弱酸性，提取时可以选择一定浓度的乙醇溶液，同时其可在碱性溶液中溶解，形成钠盐，在提取液中加酸酸化，使黄芩苷游离析出。利用黄芩苷能溶于碱，不溶于酸的性质使之与酸性杂质分离。三、实验材料与仪器材料：黄芩干燥根仪器： 旋转蒸发仪 离心沉淀机 200g 摇摆式高速中药粉碎机 电子天平 真空泵 抽滤装置 圆底烧瓶 水浴锅 索氏提取器 量筒 玻璃棒 PH 试纸试剂：浓盐酸 60%乙醇 40%氢氧化钠 95%乙醇 50%乙醇 2mol/l 盐酸 镁
3、粉 二氧化锆 枸橼酸 三氧化铝四、实验步骤1、黄芩苷的提取、分离黄芩粗粉 100g加 10 倍量水煎煮 2 次，每次 1h 过滤两次滤液 药渣加浓盐酸调 pH 至 1-2，80水浴保温 0.5h，充分结晶，过滤滤液(弃去) 沉淀物加水适量混匀，40%氢氧化钠调 pH 至 6.5-7，加 入等体积 95%乙醇，过滤滤渣(弃去) 滤液加浓盐酸调 pH 至 1-2 放置 4h，抽滤沉淀 滤液水洗，50%乙醇洗，再用 95%乙醇洗或结晶(粗制黄芩苷)2、 黄芩苷的鉴定（1）盐酸-镁粉反应：取黄芩苷少许置于试管中，以乙醇 1ml 水浴微温振摇溶解，加镁粉适量，滴加浓盐酸数滴，观察颜色变化。（2）锆-枸橼
4、酸反应：取黄芩苷少许置于试管中，加水 2ml 置水浴上温热至溶解，加数滴 5%二氧化锆溶液，振荡后，观察颜色变化；再加 2%枸橼酸试剂，观察颜色变化。（3）三氧化铝反应：取黄芩苷少许置于试管中，加水 2ml 置水浴上温热至溶解，加入 2%三氧化铝甲醇溶液数滴，观察颜色变化。5、实验结果1.黄芩苷得率黄芩苷得率()=MM 0 x 100式中：M 一所得黄芩苷精品重量 M0一提取时用黄芩的重量 本实验中：M 为 0.139g，M 0为 100g，所以收率为 0.139%。2.芩苷鉴定结果(1).盐酸-镁粉反应：取黄芩苷少许置于试管中，以乙醇 1ml 水域微温振摇溶解，加镁粉适量，滴加浓盐酸数滴，溶
5、液产生樱红色。(2).锆-枸橼酸反应：取黄芩苷少许置于试管中，加水 2ml 置水浴上温热至溶解，加数滴 5%二氧化锆溶液，振荡后，显黄色并有黄绿色荧光。再加 2%枸橼酸试剂，黄色和荧光褪去。(3).三氧化铝反应：取黄芩苷少许置于试管中，加水 2ml 置水浴上温热至溶解，加入 2%三氧化铝甲醇溶液数滴，溶液产生鲜黄色，在紫外光下显黄绿色荧光。试剂 盐酸-镁粉 锆-枸橼酸 三氧化铝颜色 橙色至微红色 黄色和荧光褪去 黄色六、结果分析、注意事项1、结果分析：本实验中产率不高，原因可能有： 粗粉未浸泡(或粉末浸泡不完全)； 静置时间短，沉淀不完全； 调 PH 时温度控制不好。2、注意事项： 提取过程中
6、为防止黄芩苷的酶解、氧化和减少有效成分被破坏，应控制在一定温度下进行。 在用酸、碱进行提取纯化黄酮类化合物时，应当注意温度和碱度都不宜过高，以免破坏黄酮类化合物的母核。酸化时，酸度也不宜过高，否则酸会与黄酮类化合物生成盐而溶解。 在选择乙醇溶液做提取剂时要注意提取溶液的溶度。浓度在(50%70%)的乙醇水溶液其极性与黄芩苷的极性相近，便于其溶出。低浓度(40%及以下) 的乙醇极性较大，杂质的溶出量大大增加，高浓度(90%及以上) 的乙醇溶液极性较小，主要用于药材中的挥发油、叶绿素、树脂等的溶出。七、思考题1、黄芩苷提取过程中为什么要控制温度和调节 PH？答：(1)温度的控制：黄芩苷在一定温度和
7、湿度下能酶水解成黄芩素及葡萄糖醛酸。黄芩素分子中具有邻三酚羟基，在空气中易氧化成醌式结构显绿色。以防提取过程中黄芩苷的酶解、氧化和有效成分被破坏。(2)PH 的调节：在提取纯化黄酮类化合物时，碱度过高，会破坏黄酮类化合物的母核；酸度过高，会使酸与黄酮类化合物生成盐而溶解。因此在黄芩苷的提取过程中要控制温度和调节 PH。2、为什么要选用一定浓度的乙醇溶液作为提取液？答：黄芩苷在黄芩中以羧酸盐存在，可以被溶剂溶出，传统的提取方法以水做提取剂，但黄芩苷只能微溶于热水，而且在水煎煮的过程中引入了大量的水溶性杂质。黄芩苷为一连有葡萄糖醛酸结构的黄酮化合物，具有一定的脂溶性，所以在提取时可以选择一定浓度的乙醇溶液作为提取液，大大增加它的溶出率，并且抑制象鞣质、蛋白、粘液等高分子杂质的溶出，便于过滤纯化。浓度(50%70%)的乙醇水溶液其极性与黄芩苷的极性相近，便于其溶出。低浓度(40%及以下) 的乙醇极性较大，杂质的溶出量大大增加，高浓度(90%及以上) 的乙醇溶液极性较小，主要用于药材中的挥发油、叶绿素、树脂等的溶出。因此，本实验采用了 60%的乙醇溶液作为提取溶剂。
