1、一般普通质粒扩增：先将质粒转化到 DH5 等大肠杆菌中，通过扩大培养获取大量含有质粒的大肠杆菌。大肠杆菌的培养需要用到 LB 液体培养基，配方见下文。根据质粒带有的抗生素抗性基因，还需要在 LB 中加入适量相应抗生素，如氨苄青霉素、 卡那霉素等。LB 液体培养基(Luria-Bertani) ：称取蛋白胨(Tryptone)10 g，酵母提取物(Yeast extract) 5 g，NaCl 10 g，溶于 800ml 去离子水中，用 NaOH 调 pH 至 7.5, 加去离子水至总体积 1 升,高压下蒸气灭菌 20 分钟。 质粒提取目前一般都有商业化生成的试剂盒销售，可按照相应试剂盒的说明书
2、操作。转化： 取出感受态细胞（也有商品化感受态销售） ，冰浴 10 分钟。 取连接产物 10l 放入感受态细胞中（100l/管） ，轻轻旋转以混匀内容物，冰浴 30 分钟。 42热休克 120 秒（按照需要加长或减少时间） ，不能摇动 Ep 管。冰浴 5 分钟，然后转移到事先预热至 37的无抗生素的普通 LB 培养基 800ul，50100rpm 37恒温振荡 1 小时 30 分钟。 用无菌弯头玻棒铺菌器将 150ul 菌液铺于含有抗生素的 LA 平板。 铺菌的 LA 平板于 37正放 23 小时，然后倒置培养 16-24 小时。 将疑似阳性克隆的白斑选出，接到新的含有抗生素的 LB 中培养
3、14 小时左右，做菌液PCR 或抽提质粒酶切以进一步鉴定转化是否成功。转染： 将 3l（约 4g）纯化好的经除菌的质粒 DNA 溶入 250l 无血清培养基 DMEM (无双抗) 中，轻轻混匀，室温放置 5 mim。 再吸取 10 l 脂质体溶入 250 l 无血清培养基 DMEM（无双抗）中，轻轻混匀，室温放置 5 mim。 将制备好的 DNA 与脂质体轻轻混合均匀，室温放置 20 mim。然后加入 1.5 ml 无血清培养基 DMEM（无双抗）中，轻轻混匀，即为包裹好的脂质体/DNA 。 将包裹好的脂质体/DNA 小心滴加至备用细胞表面， 37，5% CO2，饱和湿度中孵育 10 小时。 弃去混合液，加入含 10%胎牛血清的 DMEM（无双抗） ，继续培养 24-48 小时。
