1、takara的 DNA loading buffer的基本知识Takara DNA Loading Buffer6Loading buffer:30mM EDTA36%(v/v) Glycerol0.05%(w/v) Xylene Cyanol FF0.05%(w/v) Bromophenol Blue主要用于 DNA电泳10Loading buffer:30mM EDTA50%(v/v) Glycerol0.25%(w/v) Xylene Cyanol FF0.25%(w/v) Bromophenol Blue主要用于 RNA电泳10 X loading buffer中仅有色素溴酚蓝（Bro
2、mophenol Blue)一种染料（浓度0.05%）；6 X loading buffer中含色素溴酚蓝（Bromophenol Blue)、二甲苯腈蓝FF（Xylene Cyanol FF)两种染料（浓度都是 0.05%）在琼脂糖凝胶（0.5% 1.4%）中溴酚蓝约 Bromophenol Blue与 300 bp的双链线状 DNA的迁移速度相同，二甲苯腈蓝 FF则与 4 kbp的双链线状 DNA的迁移速度相等http:/ buffer是用来上样的；10Xloading buffer 是 stop buffer，是停止酶促反应的，如果一定要用 10Xloading buffer的上样当然也
3、可以，唯一要注意的是：10Xloading buffer 中多了一样 SDS，它会使酶类如 taq酶变性，以PCR产物为例，在电泳泳道上会产生一片弥散，如果电泳跑的距离短，和多出来一条带没有什么区别（大概 1000bp左右）。PCR 电泳时 loading buffer 的作用两个作用：1、里边的成分甘油帮助样品沉降入点样孔中，防止样品到处漂2、里边的指示剂溴酚蓝和二甲苯青 FF 起到指示的作用，溴酚蓝条带的位置差不多相当于20bpDNA 片段 ，二甲苯酚条带的位置相当于 2KbpDNA 片段。 。 。跑在最前面的是溴酚蓝。 。另外，有的 Buffer 是加有 SDS 的，一般都会写明。SDS
4、 主要是促使聚合酶变性，因为没有除尽的聚合酶会结合在 DNA 双链上影响它的迁移速率。关于条带的大小与电泳的时间的长短以及胶的浓度大小有关，电泳时间越长，溴酚蓝的条带的位置越小，40 分钟大约是不到几十 bp 的样子；胶的浓度大，溴酚蓝条带大小就越大；一般电泳 30 分钟，1.5%的胶，溴酚蓝条带大小一般为 100 左右的样子；二甲苯青 FF 条带大小也是与电泳时间胶浓度有关，一般大小为 2kb 左右。核酸电泳常用的指示剂有溴酚兰和二甲苯青。溴酚兰在碱性液体中，呈紫兰色，在0.6%、1%、1.4%和 2%琼脂糖凝胶电泳中，溴酚兰的迁移率分别与 1Kb、 0.6Kb、0.2Kb和 0.15Kb的双链线性 DNA片段大致相同.二甲苯青的水溶液呈兰色，它在 1%和 1.4%琼脂糖中电泳时，其迁移速率分别与 2Kb和 1.6Kb的双链线性 DNA大致相似。说明书:6Loading buffer:30mM EDTA36%(v/v) Glycerol0.05%(w/v) Xylene Cyanol FF0.05%(w/v) Bromophenol Blue主要用于 DNA 电泳10Loading buffer:30mM EDTA50%(v/v) Glycerol0.25%(w/v) Xylene Cyanol FF0.25%(w/v) Bromophenol Blue主要用于 RNA 电泳
