1、因为硕士的课题是 qRT-PCR,所以至今总有人问我如何计算拷贝数的问题,特此,转载这篇博文,以备不时之需做 qRT-PCR 的时候经常需要计算 DNA 拷贝数(Copy Number),比较烦,用下面的方法这就方便多了。其实计算方法是相通的,只不过一个是带有分步推理过程,一个是直接计算而已! 一、分步推理如何计算核酸拷贝数1A260 吸光度值=dsDNA 50ug/ml=ssDNA 33ug/ml=ssRNA 40ug/ml 核酸浓度(OD260)稀释倍数(33 或 40 或 50)=ng/ulMW 代表克/摩尔,单位 dolton:1dolton 即表示 1g/mol 1 摩尔=6.021
2、0 23 摩尔分子( 拷贝数)平均分子量(MW):dsDNA=碱基数660 道尔顿/碱基ssDNA=碱基数 330 道尔顿/碱基ssRNA=碱基数340 道尔顿/碱基得到拷贝数计算公式:6.0210 23 拷贝数/摩尔(浓度)/(MW g/mol)= copies/ml.即(6.0210 23)(g/ml)/(DNA length660)=copies/ml. 或(6.0210 23)(ng/ul10-9)/(DNA length660)=copies/ul.例:3000 碱基质粒,浓度 100 ng/ulMW=3000bp660dalton/bp=1.98106daltons,即 1mol=1.98106g; (100ng10-9)g/1.98106摩尔数 copy 数摩尔数6.021023310 10copies/ul.如何计算拷贝数?计算方法:(6.0210 23 拷贝数/摩尔)(浓度 g/ml)/(MW g/mol)=copies/ml平均分子量(MW g/mol):dsDNA=( 碱基数)(660 道尔顿/碱基);ssDNA=(碱基数)(330 道尔顿/碱基);ssRNA=( 碱基数 )(340 道尔顿/ 碱基)