1、 迟缓爱德华氏菌论文：铁相关蛋白 Dps 对迟缓爱德华氏菌毒力影响的研究【中文摘要】Dps(DNA-binding proteins from starved cells)属于铁蛋白超家族,是原核生物中特有的一类能结合铁离子、抗氧化损伤和保护 DNA 的重要功能蛋白。本研究在迟缓爱德华氏菌株 TX01 中克隆得到了 Dps 家族的两个基因 dps1 和 dps2。将 dps1 和 dps2 基因在大肠杆菌中重组表达后,获得的可溶性蛋白 rDps1 和 rDps2 具有DNA 结合功能和铁氧化酶活性。为了检测 dps1 和 dps2 的功能作用,我们构建了 dps1 和 dps2 的单基因缺失突
2、变株 TXDps1 和 TXDps2 以及突变菌株 TXDps2 的 dps1 基因抑制表达菌株 TXDps2RI。与野生型菌株 TX01 相比,TXDps1 和 TXDps2 的生长没有显著性差异,但TXDps2RI 的逆境生长能力降低;TXDps1、TXDps2 及 TXDps2RI 的抗氧化损伤、抗紫外线辐射能力皆明显减弱,但 TXDps2RI 的减弱程度较TXDps1 和 TXDps2 更显著。毒力分析表明,与野生型菌株 TX01 以及TXDps1 和 TXDps2 相比,TXDps2RI 在牙鲆 PBL 中的生存复制能力显著降低,对牙鲆组织的感染能力大幅下降。综上所述,本研究证明了D
3、ps1 和 Dps2 具有保.【英文摘要】DNA-binding protein from starved cells (Dps) is a member of ferritin-like proteins that exhibit properties of nonspecific DNA binding and iron oxidation and storage. In this study, we examined the biological property and function of two Dps proteins, Dps1 and Dps2, from Edwardsi
4、ella tarda, an important fish bacterial pathogen. Recombinant Dps1 and Dps2 purified from Escherichia coli were able to mediate iron oxidation and bind DNA. To examine the functional importance of Dps1 and Dps2, three mutant E. tarda.【关键词】迟缓爱德华氏菌 铁蛋白 Dps(DNA-binding proteins from starved cells)【英文关键
5、词】Edwardsiella tarda ferritin Dps(DNA-binding proteins from starved cells)【目录】铁相关蛋白 Dps 对迟缓爱德华氏菌毒力影响的研究 摘要 4-5 Abstract 5 第一章 前言 9-26 1.1 迟缓爱德华氏菌研究概况 9-15 1.1.1 迟缓爱德华氏菌生物学特征 9 1.1.2 迟缓爱德华氏菌的危害 9-10 1.1.3 迟缓爱德华氏菌致病因子的研究 10-15 1.1.4 迟缓爱德华氏菌病的防治 15 1.2 细菌 Dps 家族的研究 15-25 1.2.1 Dps 蛋白的结构 16-17 1.2.2 Dps
6、 蛋白的功能 17-21 1.2.3 Dps 蛋白调控 21-24 1.2.4 Dps 蛋白与细菌毒性 24-25 1.3 本论文的研究意义及目的 25-26 第二章 迟缓爱德华氏菌 Dps1 与 Dps2 蛋白序列的生物信息学分析 26-37 2.1 材料和方法 26-33 2.1.1 实验材料 26-28 2.1.2 菌株 TX01 基因组 DNA 的提取 28-29 2.1.3 菌株 TX01 Dps 家族基因的获得 29-33 2.1.4 序列比对 33 2.2 实验结果 33-35 2.2.1 基因组 DNA 提取结果 33-34 2.2.2 基因的 PCR扩增结果 34 2.2.3
7、 序列比对结果 34-35 2.3 分析与讨论 35-37 第三章 重组蛋白 rDps1 与rDps2 的表达纯化和功能分析 37-49 3.1 材料和方法 37-44 3.1.1 实验材料 37-39 3.1.2 Dps1 与 Dps2 蛋白的原核表达菌株的构建 39-41 3.1.3 rDps1 与 rDps2 蛋白的表达 41-42 3.1.4 rDps1 与rDps2 蛋白的纯化 42-43 3.1.5 rDps1 与 rDps2 蛋白的抗氧化活性检测 43 3.1.6 rDps1 与 rDps2 蛋白的结合 DNA 活性检测 43-44 3.2 实验结果 44-46 3.2.1 rD
8、ps1 与 rDps2 蛋白的表达纯化 44 3.2.2 rDps1 与 rDps2 蛋白的铁氧化酶活性 44-45 3.2.3 rDps1 与 rDps2 蛋白的结合 DNA 功能 45-46 3.3 分析与讨论 46-49 第四章 dps1 与 dps2 基因缺失突变株的构建和功能分析 49-76 4.1 材料和方法 49-65 4.1.1 实验材料 49-51 4.1.2 迟缓爱德华氏菌 TX01 dps1 与 dps2 缺失突变片段的克隆 51-52 4.1.3 基因缺失突变体 TXDps1 和 TXDps2 的获得 52-54 4.1.4 突变型菌株 TXDps2 中 dps1 基因
9、的抑制表达菌株 TXDp52RI的建立 54-55 4.1.5 菌株生长状况的分析 55-56 4.1.6 菌株抗血清杀菌能力（Serum resistance activity）的测定 56 4.1.7 菌株抗 H_20_2 的测定 56-57 4.1.8菌株抗紫外线辐射的测定 57 4.1.9 菌株对牙鲆累计死亡率的测定 57-58 4.1.10 菌株组织侵染能力的测定 58 4.1.11 菌株对牙鲆 PBL 呼吸爆发影响的测定 58-59 4.1.12 菌株在牙鲆 PBL 细胞中复制能力的测定 59-60 4.1.13 牙鲆 PBL 感染不同菌株后免疫相关基因的变化 60-63 4.1.
10、14 野生型菌株 TX01 在不同阶段的dps1，dps2 基因表达变化 63-65 4.2 实验结果 65-73 4.2.1 突变型菌株的构建 65-66 4.2.2菌株生长情况的比较 66-67 4.2.3 菌株抗血清杀菌活性的比较 67 4.2.4 菌株抗 H_20_2 氧化损伤的比较 67-68 4.2.5 菌株抗紫外线辐射能力的比较 68 4.2.6 菌株对牙鲆侵染能力的比较 68-70 4.2.7 菌株对牙鲆 PBL 免疫指标影响的比较 70-71 4.2.8 菌株在牙鲆 PBL 细胞中的复制能力的比较 71 4.2.9 菌株刺激牙鲆 PBL 细胞免疫相关基因表达的比较 71-72 4.2.10 野生型 TX01 在不同生长时期 dps1 与 dps2 基因的表达情况 72-73 4.3 分析与讨论 73-76 结论 76-77 参考文献 77-84 硕士期间发表的文章 84-85 致谢 85
