1、题目:石蜡切片技术实验报告学院:农学院,专业:植物学,姓名:张永丰,学号:2011202010目的掌握石蜡切片技术,为以后的科研中切出合格的实验装片做准备。并观察植物叶的横切面内部结构。材料:已经固定好的女贞叶方法与操作步骤一、 脱水:依次使用下列浓度的乙醇脱水50%乙醇 70%乙醇85% 乙醇95% 乙醇100% 乙醇100%乙醇每步两个小时。二、 透明:依次通过下列试剂进行透明1、1/2 无水乙醇 1/2 二甲苯(加少许番红粉末,对材料进行附染)两个小时2、二甲苯两个小时3、二甲苯一个小时三、 浸蜡:浸蜡步骤如下1、将材料瓶中的二甲苯取出 1/2,加入剩余二甲苯的体积 3/2 倍的石蜡液于
2、36温箱中处理 35 小时2、换用纯石蜡液于 60温箱中处理 2 小时,再换一次纯石蜡液处理 2 小时四、 包埋与切片1、在提前准备好的纸盒中放入少量蜡液。2、片刻后放入材料,避免形成断层还要注意材料摆放的位置和方向。3、及时将蜡块冷却,防治形成结晶。4、修块与粘连:将多余的石蜡切除,使蜡块成为梯形;将蜡块一正确的方向粘连在枕木上。5、切片:利用切片机将蜡块切成薄片。切片厚度为 810m ,以每分钟4050 转为宜。6、粘片与展片:在载玻片上滴一滴黏贴剂和一滴蒸馏水用牙签涂匀,将蜡带光面朝下固定于载玻片上,放到展片台上经加温使其充分展开。7、干燥:将展好的片放于 36温箱中干燥 16 小时五、
3、脱蜡:切片分别经过下列步骤进行脱蜡二甲苯 30min 1/2 二甲苯 1/2 无水乙醇 5min 无水乙醇 5min 95%乙醇5min 85%乙醇 5min 70%乙醇 5min六、染色:染色分为番红染色和固绿染色两步1、番红染色:将载玻片放入盛有番红染液(1%番红,70%乙醇)的染缸中染色 22 小时2、固绿复染:载玻片依次经过一下处理70% 1min 85% 1min 95% 1min 固绿染液(0.1%固绿,95%乙醇)20 秒3、脱水:95% 1min 100% 1min 100%1min 4、透明:1/2 二甲苯 1/2 无水乙醇 1min 二甲苯 1min 二甲苯七、封片中性树胶封片,干燥八、镜检将封好的装片在显微镜下观察,并挑选清晰的具有叶横切面典型结构特征的部位拍照。结果与分析一、结果分析二、方法分析1、包埋是材料放置的位置不正确加之材料较大,为切片带来较大困难,以致切片效果不理想。2、番红染色时间短,观察结果中应该是红色的部位不明显。3、固绿复染时间短,表皮细胞染色不清晰。4、材料固定时间过长,或者处理过程中使得材料变脆,切片时把叶的远轴面表皮与叶片脱离,使得观察结果中的很多叶片没有远轴面表皮。表皮(近轴面)表皮(远轴面)栅栏组织韧皮部木质部叶脉