1、逐痰通络汤对急性期脑出血大鼠血 IL 1、IL 6 表达的影响【摘要】 探讨中药逐痰通络汤对脑出血损伤的保护作用。方法将大鼠随机分为正常对照组（N 组）、假手术组(K 组) 、模型组(C 组)和给药组(Z 组)，采用胶原 酶诱导法建立大鼠 脑出血模型，观察各组动物神经功能缺损并评分，ELISA 法检测 血清 IL 1、IL 6 的表达。 结果 通过神经功能评分， Z 组与 C 组比较，第 1、2d 无明显统计学差异，第 3d 有差异(P0.05)，评分较低，第 7d 有显著差异(P0.01)；与 K 组 比较，C 组 IL 1、IL 6 含量在第 1d 时开始升高(P0.05)，第 2、3d
2、到达高值(P0.001),第 7d 接近正常范围；给药 后，第 2d，Z 组 IL 1、IL 6 含量较 C 组明显下降(P0.05)，第 3d，显著下降(P0.001)。 结论逐痰通络汤能抑制 IL 1、IL 6的表达和释放,从而减轻炎症反应,对脑出血后的继发性神经元损伤起保护作用。 【关键词】 逐痰通络汤；脑出血（ICH）；白细胞介素 1 ；白细胞介素6ChinaAbstract:Objective To investigate the effect of Zhutan Tongluo Tang on the expression of interleukin 1(IL 1) and in
3、terleukin 6(IL 6) and changes of nerve function in acute cerebral hemorrhage rat. Methods Rats were randomly divided into four groups: normal control group（N）, sham operative group(K), model group(C) and Zhutan Tongluo Tang group(Z), Collagenase was used to establish rat model of intracerebral hemor
4、rhage, each group of animal nerve function damage was evaluated and graded after operation, ELISA method was used to test the expression of IL 1 and IL 6 in blood.Results 1.Score of nerve function: there was no significant difference between Z and C group in the first 1,2d. There was difference on 3
5、d(P0.05), and significant difference on 7d (P0.01). For Z group had lower score with C group; 2. The level of IL 1 and IL 6 began to increase in C group on 1d, compared with K group( P 0.05), and reach high level in the first 2,3d( P 0.001), the level came to normal range on 7d; 3. After administrat
6、ion, compared with C group, the level of IL 1 and IL 6 began to decrease on 2d( P 0.05), and decreased significantly on 3d( P 0.001).Conclusion Zhutan Tongluo Tang can depress the expression and release of IL 1 and IL 6, inhibiting inflammation response, which has an evident protective effect on sec
7、ondary injured neuron after intracerebral hemorrhage in rats.Key words：Zhutan Tongluo Tang; intracerebral hemorrhage; IL 1; IL 6急性期脑出血（ICH）是临床上多发病、常见病。逐痰通络汤是刘时觉教授经验方,针对中风病急性期痰瘀互结、气血瘀阻的病机,辨证施治,具有较好的临床疗效。本实验观察逐痰通络汤对急性期 ICH 大鼠血 IL 1、IL 6 表达的影响 ,探讨其可能机制。1 实验材料1.1 实验动物及分组清洁级雄性 SD 大鼠，体重（ 25020）g，温州医学院实验动物
8、中心提供。根据随机原则，将 116 只大鼠分为 4 组：正常对照组（N ）、假手术组（K）、模型组（C）、 给药组（Z ）。对照组 6 只，后 3 组设术后6h、24h、48h、72h、7d 共 5 个时间点,各时间点 8 只大鼠（K 组各时间点 6 只）。1.2 药物及其制备逐痰通络汤：大黄 10g、胆南星 10g、地龙 10g、全蝎 6g、天麻10g、郁金 10g、石菖蒲 6g、天竹黄 10g，于常 压 100煎煮 30min 去渣，8 层纱布过滤，浓缩成生药 1.25g/ml，4保存备用。1.3 主要试剂及仪器大鼠脑立体定向仪，型胶原酶由美国 Sigma 公司提供，IL 1、IL 6 检
9、测试剂 盒购于武汉博士德生物工程有限公司。电子天平，离心沉淀机，550 型酶标仪， 摇床，烤箱等。2 实验方法2.1 ICH 模型的建立（胶原酶诱导法）将大鼠麻醉后俯卧位固定于立体定位仪上，于前囟前 0.2mm,中线旁开 3mm 钻一直径 1mm 的孔，以微量进样器沿钻孔进针深 6mm(尾状核 )，然后缓慢注入含 0.5U 型胶原酶的生理盐水 2l，时间 2min，留针 5min，退针 0.5mm，再留针 5min，缓慢拔出针头，骨蜡封窗，缝合皮肤。2.2 给药方法给药组于造模后 6h、24h、48h、72h、7d，5 个时间点给予逐痰通络汤灌胃,（大鼠灌胃量按 10ml/（kgd）,假手术组
10、、模型组给予等量生理盐水，正常组按常规饲养。2.3 神经功能评分大鼠造模后 6h 及第 1d、2d、3d、7d 观 察神经功能障碍并评分,评分标准采用 Bederson16 级 5 分法:正常为 5 级(0 分)；对侧上肢不能完全伸展为 4 级(1 分)；向对侧推时抵抗力下降(置于光滑塑料板上)为 3 级(2 分) ；提尾时向对侧转圈为 2 级(3 分) ；自动转圈为 1 级(4 分)；无自发性活动、意识障碍为 0 级(5 分)。假手术组不予评分。2.4 标本的收取及处理各组大鼠在上述时间点神经功能评分后 2h（即给药组灌胃后2h），用 3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后，直 视下行右心室穿刺抽血，
11、分别用 EDTA 抗凝管及促凝管装取动脉血，制备血清。血清制备：将促凝血静置 0.5h 后,以 3000r/min 离心 10min，取上清液，置于 -80冰箱保存。2.5 IL 1、IL 6 的测定采用双抗体酶联免疫吸附法（ELISA），具体步骤严格按照试剂盒说明书进行，最后用全自动酶标仪在 450nm 处读取吸光度值(OD值)，根据样品的 OD 值在标准曲线上查出其浓度。2.6 统计学处理采用 SPSS13.0 统计软件包进行统计学处理，数据以均数 标准误(s)表示，药物作用以 One way ANOVA 方法分析。3 实验结果3.1 神经功能评分除假手术组外,模型组和给药组大鼠在麻醉清醒
12、之后均出现一定程度的神经功能缺损症状。见表 1。表 1 大鼠急性脑出血后神经功能缺损评分(略) 。与对照组比较，*P0.05，P0.01 另外该评分是判断造模成功的标准，5 级和 0 级造模大鼠在测定 IL 1、IL 6 时需排除。3.2 IL 1 测定结果见表 2。表 2 IL 1 在脑出血后各时间点表达的动态变化（略)。模型组与假手术组比较：#P0.01，#P0.005，#P0.00；药物组与模型组比较：*P0.05，*P0.01 模型组内与 6h 时间点比较：P0.0013.3 IL 6 测定结果见表 3。表 3 IL 6 在脑出血后各时间点表达的动态变化（略)模型组与假手术组比较，#P
13、0.05，#P0.001；药物组与模型组比较：*P0.005，*P0.001；模型组内与 6h 时间点比较：P0.05，P0.0014 讨论ICH 又称出血性中风，属中医学“中风”范畴，其病理以 风、火、痰、瘀、虚为特征，急性期则以风、火、痰、瘀 为主。中 风病的发生发展，是多种致病因素相互作用的结果。血瘀证是中风病的基本证候之一，可贯穿整个病程，但中风本身也会产生痰、瘀等损伤脑络，影响气血正常运行；痰浊是中风病急性期主要病因病机之一，发病 3 天后其作用更加突出，可以成为主证候2,痰气郁结，经隧不利，气机逆乱，则痰瘀互结。因此，除痰化浊与活血化瘀同等重要。痰通络汤中重用大黄活血通腑为君；郁金
14、活血行气，胆南星祛风化痰为臣；佐以天竹黄清热化痰，石菖蒲化痰开窍；天麻、地龙、全蝎熄风通络。全方共奏逐痰祛瘀，熄风通络之功。IL 1 是促炎性 细 胞因子,它是一类具有广泛作用的多肽。IL 1是脑组织中的主要形式，在免疫和炎症反应中起多种生物活性的细胞因子3。研究表明中枢神经系统的小胶质细胞、星形胶质细胞可直接合成 IL 1。IL 1 能刺激粘附分子的产生，增加内皮细胞的粘附，并通过刺激内皮细胞表达白细胞粘附分子，使白细胞聚集在出血周围，加重脑组织的损害；能促使内皮细胞激活血液中的凝血酶原进入炎症前状态，增强白细胞反应，加重脑损伤， 诱发神经细胞凋亡4 5 。IL 6 主要由 单核细胞和巨噬细
15、胞产生，是重要的致炎因子，具有多种生物学效应，不但参与免疫反应、血细胞生成和应激反应，既有促炎作用又有抗炎作用，对中枢神经系统发挥神经营养、神经保护和神经毒性多重作用。高浓度的 IL 6 能增加内皮细胞表达细胞间黏附分子，使白细胞与内皮细胞的粘附性增强，结果阻塞微血管。另外，还能激活补体系统，产生细胞损害6。本实验发现 C 组和 K 组比较，IL 1 、IL 6 含量在第 1d 时开始升高，第 2、3d 到达很高值，第 7d 接近正常范围；给药后，第 2d，Z组 IL 1、IL 6 含量较 C 组明显下降(P0.05)，第 3d，显著下降；神经功能评分中，第 1、2d 无明显统计学差异，第 3
16、d 有差异，第 7d 有显著差异。分析以上结果：第 3d 行为学评分和药物组治疗结果吻合； 第 1、2d，IL 1、IL 6 含量下降明显 ，行为学结果不显著，分析其原因可能与神经保护作用的滞后性有关；第 7dIL 1、IL 6结果暂无法判断药物是否起作用。由此研究提示，应用中药治疗后，IL 1、IL 6 的表达在第 1、3d 明显减少，表明逐痰通络汤可能通过抑制炎症反应,抑制 IL 1、IL 6 的表达，起到神经保护作用。【参考文献】1Berderson JB, Pitts LH, TsujM, et al.Rat middle cerebral artery occlusion: eval
17、uation of the model and development of a neurologic examinationJ.Stroke, 1986, 17 (3): 472 476.2王顺道，杜孟华，解庆华,等.中风病急性期证候演变规律的研究J .中国中医急症,1996,5(3):121 124.3Boutin H,LeFeuvre RA, Horai R.Role of IL 1alpha and IL 1beta in ischemic brain damage J.J Neurosci,2001, 21 (15): 5528 5534.4Holmin S,Mathiesen T.
18、Intracerebral administration of interleukin 1 beta and induction of inflammation, apoptosis, and vasogenic edemaJ.J Neurosurg, 2000, 92 (1): 108 120.5Masada T,Hua Y,Xi G,et al.Overexpression of interleukin 1 receptor antagonist reduces brain edema induce by intracerebral hemorrhage and thrombinJ.Acta Neurochir Suppl, 2003, 86: 463 467.6Ali C, Nicole O, Docagne F, et al.Ischemia induced interleukin 6 as apotential endogenous neurop ro tective cytokine against NMDA recep to rmediated excito to xicity in the brainJ.Cereb Blood Flow Metab, 2000,20: 956 966.
