1、http:/胸腺嘧啶核苷的原理及配置方法胸腺嘧啶核苷的应用：胸腺嘧啶核苷为生化试剂，用于制备生物培养基，例如 HAT 选择性培养基的制备。胸腺嘧啶核苷的原理：在单抗制备中，由于需要进行选择性杀死非目标细胞，所以使用添加 HAT 的选择性培养基，其依据是细胞中的 DNA 合成有两条途径：一条途径是生物合成途径（“D 途径” ） ，即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，为 DNA 分子的合成提供原料。在此合成过程中，叶酸作为重要的辅酶参与这一过程，而 HAT 培养液中氨基蝶呤是一种叶酸的拮抗物，可以阻断 DNA 合成的“D 途径” 。另一条途径是应急途径或补救途径（“S 途径” ） ，它是利用次
2、黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核苷转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸，两种酶缺一不可。因此，在 HAT 培养液中，未融合的效应 B 细胞和两个效应 B 细胞融合的“D 途径”被氨基蝶呤阻断，虽“S 途径”正常，但因缺乏在体外培养液中增殖的能力，一般 10d 左右会死亡。对于骨髓瘤细胞以及自身融合细胞而言，由于通常采用的骨髓瘤细胞是次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核苷转移酶缺陷型（HGPRT）细胞，因此自身没有“S 途径” ，且“D 途径”又被氨基蝶呤阻断，所以在 HAT 培养液中也不能增殖而很快死亡。只有骨髓瘤细胞与效应 B 细胞相互融合形成的杂交瘤细胞，既具有效应
3、B 细胞的“S 途径” ，又具有骨髓瘤细胞在体外培养液中长期增殖的特性，因此能在 HAT培养液中选择性存活下来，并不断增殖。通常 HAT 中，H（次黄嘌呤）的浓度为 110-4M，A（氨基蝶呤）为 410-7M，T（胸腺嘧啶）为 1.610-5M，在 HT 培养基中，只需要不加氨基蝶呤，其它都同 HAT。HAT 培养基的配制：100A（氨基喋呤） 贮存液：称取 1.76mg 氨基喋呤溶于 90ml 超纯水中，滴加1mol/L 的 NaOH 0.5ml 助溶，待完全溶解后，加 1mol/L HCL 0.5ml 中和，再补加超纯水到100ml。0.22um 膜过滤除菌，小量分装，-20保存。http:/100HT 贮存液：称取 136.1mg 次黄嘌呤和 38.8mg 胸腺嘧啶核苷，加超纯水到 100ml，置45-50水浴中使完全溶解，0.22m 膜过滤除菌，小量分装，-20保存，临用前 37水浴中溶解。HT 培养基：82ml 基础培养基中加入 1ml HT（100） ，1ml SP（100） ，15ml 灭能的犊牛血清。HAT 培养基：99ml HT 培养基加入 1ml A（100） 。
