1、公共场所内公用毛巾细菌总数的测定一方法：涂 抹 法1. 仪器1) 高压蒸汽灭菌器。2) 干热灭菌箱。3) 培养箱:36 C 士 1,C ,4) 冰箱。5) 电炉。6) 天平。7) 灭菌平皿:直径 9 cm.8) 灭菌刻度吸管:1 mL,10 raL,9) 灭菌棉拭子。10) 灭菌剪刀。11) 放大镜。12)PH 计或精密 PH 试纸。2 培养基和试剂（1） 生理盐水成分:氯化钠 8.5 g；燕 馏 水 10 00 m L制法:将氯化钠(8.5 g )溶解于蒸馏水(1 000 mL)中，分装到试管内，每管10 mL,12120 min；高压灭菌。（2）营养琼脂3 检验程序4 操作步骤4-1 采样
2、方法4.1.1 随机抽取清洗消毒后准备使用的毛巾4.1.2 用灭菌生理盐水湿润棉拭子，在毛巾、枕巾对折后两面的中央各 25 cm2(5 cm5 cm)面积范围内有顺序地来回涂抹，用灭菌剪刀剪去棉签手接触的部分，将棉拭子放人 10 mL 生理盐水内，4h 内送检。4.2 检验方法4. 2-1 将放有棉拭子的试管充分振播。此液为 1:10 稀释液。4.2.2 以无菌操作，吸取 2 mL 检样，分别注入到两块灭菌平皿内，每皿 1 mL。如污染严重，可十倍递增稀释，即吸取 1 mL 加到 9 mL 灭菌生理盐水中，混匀，此液为 1：1OO 稀释液。每个稀释度做两块平皿。4.2.3 将已融化冷至 45左
3、右的营养琼脂培养基倾人平皿，每皿约 15 mL，并立即旋摇平皿。冷凝后放 36土 1培养箱培养 48h。5 菌落计数方法作平皿菌落计数时，可用肉眼直接观察，必要时用放大镜检查以防遗漏，在记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。若平皿中有连成片状的菌落，该平皿不宜计数；若片状菌不到平皿中的一半，而其余一半中菌落分布均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘以 2，所得结果代表全皿菌落数。公用毛巾、床上卧具细菌总数按公式(1)计算：m=k*n/2m-细菌总数，cfu/25 cm2k稀释倍数n平均菌落数6 菌落数报告方式1) 9.1 选择平均菌落数在 30 300 之间的稀释度，乘以稀释
4、倍数报告(见表 1中例 1).2) 9.2 若有两个稀释度，其平均菌落数均在 30300 之间，则由两菌落总数之比值来决定，若其比值小于或等于 2，应报告其平均数，若大于 2，则报告其中稀释度较低的平皿菌落数(见表 1 中例 2、例 3),3) 9.3 若所有稀释度的平均菌落数均大于 300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘 VA 稀释倍数报告之(见表 1 中例 4)04) 9.4 若所有稀释度的平均菌落数均小于 30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表 1 中例 5),5) 9.5 若所有稀释度的平均菌落数均不在 30-300 之间，其中一个稀释度平均菌落数大于 300，而相
5、邻的另一个稀释度平均菌落数小于 30，则以接近 30或 300 的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表 1 中例 6)06) 9.6 若所有的稀释度均无菌生长，报告数为每毫升小于 1 cfu(见表 1 中例7),7) 9.7 菌落计数的报告，菌落数在 10 以内时，按实有数值报告之，大于 10。时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，应以四舍五人法计算。为了缩短数字后面零的个数，可用 10 的指数来表示(见表 1 中报告方式栏)。在报告菌落数为“不可计”时，应注明样品的稀释度。例次 不同稀释度的平均菌落数10-1 10-2 10-3两个稀释度菌落数之比菌落总数（个/毫升）报告方式（个/毫
6、升）1 1,365 164 2 16，400 16,000 或 1.6104 2 2,760 295 461.6 37, 750 38,000 或 3.8104 3 2,890 271 602.2 27，100 27,100 或 2.7104 4 无法计数 4,650 513 51，3000 510,000 或5.1105 5 27 11 5 270 270 或 2.7102 6 无法计数 305 12 30，500 31,000 或 3.1104 公共场所内公用毛巾大肠菌群的测定一纸片法1.仪器1) 高压蒸汽灭菌器。2) 干热灭菌箱。3) 培养箱：361。4) 冰箱。5) 电炉。6) 天平。
7、7) 灭菌平皿：直径 9cm。8) 灭菌刻度吸管：1mL,10mL。9) 灭菌棉拭子。10) 灭菌剪刀。11)PH 计或精密 PH 试纸。2.培养基和试剂1.乳糖胆盐发酵培养液1.1 成分：蛋白胨 20g猪胆盐（或牛、羊胆盐） 5g乳糖 10g0.04%溴甲酚紫水溶液 25ml蒸馏水 1000ml1.2 制法：将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于蒸馏水中，调 pH 值至 7.4，加溴甲酚紫溶液，混匀，分装到带有倒管的试管中，每管 10ml，在 115高压灭菌 15分钟。 （注：双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍）2 伊红美兰琼脂2.1 成分：蛋白胨 10g乳糖 10g磷酸氢二钾 2g琼脂 17g2
8、.0%伊红水溶液 20ml0.65%美蓝溶液 10ml蒸馏水 1000ml2.2 制法：将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，调 pH 值至 7.1，分装到烧瓶内。121高压灭菌 15 分钟备用，临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至 5055，加入伊红和美篮溶液，摇匀，倾注平板。3 革兰氏染色液3.1 结晶紫染色液:结 晶 紫 1995 % 乙 醇 20 m L10 o 草 酸 钱 水 溶 液 80 m L将 结 晶 紫溶于乙醇中，然后与草酸钱溶液混合。3.2 革兰氏碘液:碘 1g碘 化 钾 29蒸 馏 水 30 0m 1将 碘 与 碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加
9、蒸馏水至 300m L,3.3 脱色液:95 % 乙 醇3.4 沙黄复染液:沙 黄 0.2 5g95 % 乙 醇 10 m L蒸 馏 水 90 m L将 沙 黄 溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。4.染色法4.1 将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染色 1 min，水洗。4.2 滴加革兰氏碘液，作用 1 min，水洗。4.3 滴加 95%乙醇脱色，约 30 s，水洗。4. 4 滴加复染液，复染 1 min，水洗，待干，镜检。4.5 染色结果革 兰 氏 阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。5 大肠菌群快速检验纸片5.1 门质量要求:纸片必须符合食(饮)具用大肠菌群快速检验纸片质量标准。5.2 质
10、量标准:每张纸片 5 cm X5 cm,pH 值 7. 0-7.4，包装无菌，生产厂家经卫生部门审核认可6 检验程序7 操作步骤7.1 采样方法7.1.1 随机法：随机抽取清洗消毒后准备使用的毛巾、床上卧具。7.1.2 涂抹法：用测定细菌总数时采集的样品，无需重采。7.1.3 纸片法：用灭菌生理盐水湿润 5 cm5 cm 大肠菌群快速测定纸片两张，分别粘贴在毛巾、床上规定部位和面积范围内，约 30 s 后取下，置于无菌塑料袋内。7.2 检验方法7.2.1 纸片法将已采样的纸片置 36士 1培养箱内培养 1618 h，观察结果。8 结果报告纸片保持紫蓝色不变，则报告为大肠菌群阴性；纸片变黄，并在黄色背景上呈现红色斑点或片状红晕，则报告检出大肠菌群。
