1、实验 6.1 红细胞比容的测定 实验目的 学习和掌握测定红细胞比容的方法。 实验原理 将定量的抗凝血灌注于特制的毛细玻璃管中，定时、定速离心后,有形成分和血浆分离，上层呈淡黄色的液体是血浆，中间很薄一层为灰白色，即白细胞和血小板（或栓细胞），下层为暗红色的红细胞，彼此压紧而不改变细胞的正常形态。根据红细胞柱及全血高度，可计算出红细胞在全血中的容积比值，即为红细胞比容（压积）（图 6.1-1）。 实验对象 动物种类不限 实验药品 草酸盐抗凝剂(0.8 g 草酸钾H 2O + 1.2 g 草酸銨H 2O + 甲醛1 ml + 蒸馏水至 100 ml)或 10 gL-1 肝素，橡皮泥或半融化状态石蜡
2、，75%酒精。仪器与器械 毛细玻璃管（内径 1.8 mm，长 75 mm）或温氏分血管,酒精灯，水平式高速毛细管离心机(或普通离心机)，天平，注射器，长针头，干棉球，刻度尺（精确到 mm）。 实验方法与步骤 1.微量毛细管比容法 （1）以抗凝剂湿润毛细管内壁后吹出，让壁内自然风干或于60 80干燥箱内干燥后待用。 （2）取血：常规消毒，穿刺指（或尾）尖，让血自动流出，用棉球擦去第一滴血，待第二滴血流出后，将毛细管的一端水平接触血滴，利用虹吸现象使血液进入毛细管的 2/3（约50 mm）处。 （3）离心：用酒精灯溶封或橡皮泥、石蜡封堵其未吸血端，然后封端向外放入专用的水平式毛细管离心机，以120
3、00 rmin-1 的速度离心 5 min。届时用刻度尺分别量出红细胞柱和全血柱高度（单位 mm）。计算其比值，即得出红细胞比容。 2.温氏分血管比容法 （1）取大试管和温氏分血管各一支，用抗凝剂处理后烘干备用。（2）取血：可采取静脉取血或心脏取血，将血液沿大试管壁缓慢放入管内，用涂有凡仕林的大拇指堵住试管口，缓慢颠倒试管23 次，让血液与抗凝剂充分混匀，并不能使血细胞破碎，制成抗凝血。 用带有长注针头的注射器，取抗凝血2 ml 将其插入分血管的底部，缓慢放入，边放边抽出注射针头，使血液精确到 10 cm 刻度处。 （3）离心：将分血管以 3000 rmin-1 离心 30 min，取出分血管
4、，读取红细胞柱的高度，再以同样的转速离心 5 min，再读取红细胞柱的高度，如果记录相同，该读数的 1/10 即为红细胞比容。 注意事项 1.选择抗凝剂必须考虑到不能使红细胞变形、溶解。草酸钾使红细胞皱缩，而草酸銨使红细胞膨胀，二者配合使用可互相缓解。鱼类多用肝素抗凝。 2.血液与抗凝剂混合、注血时应避免动作剧烈引起红细胞破裂。3.用抗凝剂湿润的毛细玻璃管（或温氏分血管）内壁后要充分干燥。血液进入毛细管内的刻度读数要精确，血柱中不得有气泡。 实验结果 报告该实验动物的红细胞比容。并将全班的结果加以统计,用平均值标准差表示 思考题 1.在那些情况下，红细胞的比容明显增加。 2.测定红细胞比容时，
5、一种常出现的误差来源是什么？误差倾向于增加还是减少？ 3.测定红细胞比容的实际意义是什么？ 实验 6.9 ABO 血型鉴定和交叉配血实验 实验目的 观察红细胞凝集现象。 学习 ABO 血型鉴定方法，掌握血型鉴定原理。 实验原理 ABO 血型是根据红细胞表面存在的凝集原决定的。存在 A 凝集原的称为 A 血型，存在 B 凝集原的称为 B 血型。而血清中还存在凝集素。当 A 凝集原与抗 A 凝集素相遇或 B 凝集原与抗 B 凝集素相遇时，会发生红细胞凝集反应。一般 A 型标准血清中含有抗 B 凝集素，B 型标准血清中含有抗 A 凝集素，因此可以用标准血清中的凝集素与被测者红细胞反应，以确定其血型。
6、 同种动物不同个体的红细胞凝集称为同族血细胞凝集作用。不同动物的血液互相混合有时也可产生红细胞凝集，称为异族血细胞凝集作用。对于动物的天然血型抗体了解不多，而且免疫效价也很低，所以同种动物第一次输血，一般不会引起严重后果。但第二次输血就必须进行交配试验，才能决定是否能相互输血。 实验对象 正常人。 实验药品 A 型 B 型标准血清。 仪器器械 双凹玻片，采血针，竹签，75%酒精棉球，干棉球，玻璃蜡笔（记号笔），尖头滴管，显微镜。 实验方法与步骤 1.ABO 血型的鉴定： （1）取双凹玻片一块，在两端分别标上 A 和 B，中央标记受试者的号码。 （2）在 A 端和 B 端的凹面中分别滴上相应标准
7、血清少许。 （3）75%酒精棉球消毒无名指端，用采血针刺破指端，用消毒后的尖头滴管吸取少量血（也可用红细胞悬浮液，见下述），分别与 A 端和 B 端凹面中的标准血清混合，放置12 min 后，能肉眼观察有无凝血现象，肉眼不易分辨的用显微镜观察。（4）根据凝集现象的有无判断血型（图 6.9-1）。 2.交叉配血实验 （1）分别对供血动物和受血动物消毒、静脉取血，制备成血清和红细胞悬浮液。红细胞悬浮液是将受检者的血液一滴，加入装有生理盐水约 1 ml 的小试管中，即为 2%的红细胞悬浮液。加盖备用。 （2）取双凹玻片一块，在两端分别标上供血动物和受血动物的名称或代号，分别滴上它们的血清少许。 （3
8、）将供血者的红细胞悬浮液吸取少量，滴到受血者的血清中（称为主侧配血,图 6.9-2）；将受血者的红细胞悬浮液吸取少量，滴入供血者的血清中（称为次侧配血），混合。放置 1030 min 后，肉眼观察有无凝集现象，肉眼不易分辨的用显微镜观察。如果两次交叉配血均无凝集反应，说明配血相合，能够输血。如果主侧发生凝集反应，说明配血不合，不论次侧配血如何都不能输血。如果仅次侧配血发生凝集反应，只有在紧急情况下才有可能考虑是否输血。 注意事项 1.指端、采血针和尖头滴管务必做好消毒准备。做到一人一针，不能混用。使用过的物品（包括竹签）均应放入污物桶，不得再到采血部位采血。 2.精消毒部位自然风干后再采血，血
9、液容易聚集成滴，便于取血。取血不宜过少，以免影响观察。 3.采血后要迅速与标准血清混匀，以防血液凝固。 4.在进行交叉配血实验时，一定要防止将主侧配血和次侧配血搞混了。 实验结果 报告你的血型。 思考题 1.ABO 血型分类标准是什么？ 2. 除了 ABO 血型外还有有什么血型系统？分类标准是什么？ 3.为什么在配血试验时，如果主侧发生凝集反应，不论次侧配血如何都不能输血？ 实验 7.10 心血管活动的神经体液调节 实验目的 学习记录哺乳动物动脉血压的直接测定方法，并观察神经-体液因素对心血管活动的调节。 实验原理 在正常生理情况下，心血管活动受神经、体液和自身机制的调节。 心脏受交感神经和副
10、交感神经的支配。心交感神经兴奋时，使心率加快、心肌收缩力加强，心内兴奋传导加快，心输出量增加、动脉血压升高。心迷走神经兴奋时，使心率减慢、心房肌收缩力减弱、房室传导减慢，从而使心输出量减少、动脉血压下降。在神经调节中以颈动脉窦-主动脉弓的减压反射尤为重要，当动脉血压升高时,压力感受器发放冲动增加,通过中枢反射性引起心率减慢、心肌收缩力减弱、心输出量下降、血管舒张和外周阻力降低，使血压降低。反之，当动脉压下降时，压力感受器发放冲动减少，神经调节过程又使血压回升。支配血管的交感缩血管神经兴奋时，使血管收缩、外周阻力增加、动脉血压升高。 家兔的压力感受器的传入神经在颈部从迷走神经分出,自成一支，称为
11、减压神经，其传入冲动随血压变化而变化。 心血管活动还受肾上腺素和去甲肾上腺素等体液因素的调节。它们对心血管的作用既有共性，又有特殊性。关键取决于心、血管壁上哪一种受体占优势。肾上腺素对 与 受体均有激活作用，去甲肾上腺素主要激活 受体而对 受体作用很小，因而使外周阻力增加，动脉血压升高，但对心脏的作用要比肾上腺素弱。 实验对象 家兔。 实验药品 生理盐水，20%氨基甲酸乙脂（或 3%戊巴比妥钠），肝素（500 Uml -1），1: 10000 肾上腺素，1: 10000 去甲肾上腺素，1: 10000 乙酰胆碱。 仪器与器械 计算机生物信号采集处理系统（或二道生理记录仪、刺激器），兔手术台，手
12、术器械一套，气管插管，动脉夹，动脉套管、血压换能器，保护电极，棉线，纱布，棉球、注射器（50、10、2 ml），支架，双凹夹。实验方法与步骤 1.实验准备：（1）麻醉和固定：家兔称重后，耳缘静脉缓慢注射 20氨基甲酸乙酯（5 mlkg -1）或 3%戊巴比妥钠（1 mlkg -1）进行麻醉。当动物四肢松软，呼吸变深变慢，角膜反射迟钝时，表明动物已被麻醉，即可停止注射。将麻醉的家兔仰卧位固定于兔手术台上。 图 7.10-1 兔左侧内脏大神经的解剖位置 （2）分离颈部神经、血管和插气管插管 颈部剪毛，沿颈部正中线切开皮肤57 cm，用止血钳钝性分离皮下组织及浅层肌肉，暴露和分离气管；分离左、右两侧
13、颈总动脉（左颈总动脉尽量分离长些，以做动脉插管用。当向头端追索到甲状软骨上缘，可见到左颈动脉分支为颈外和颈内动脉，在颈内动脉基部有一膨大处，为颈动脉窦。）；分离右侧的迷走神经、交感神经和减压神经。在分离的气管、颈总动脉及神经下方各穿一不同颜色的线备用(见3.7.4)。并在减压神经下放一钩状记录电极，实验过程中将电极悬空（但不要拉得过紧）。将神经周围的皮肤提起做一皮兜，在神经表面滴上 38液体石蜡，以防止神经干燥，并起到绝缘效果。（3）进行气管插管（见3.7.4）（4）分离内脏大神经（此步也可放在刺激内脏大神经前进行）：将动物右侧卧位，在腰三角作一长45 cm 的斜行切口，逐层分离至腹膜处，从左
14、侧腹后壁（或沿腹中线切开皮肤）找到左肾，并将左肾向下推压，在其右上方可见一浅黄色黄豆粒大小的肾上腺。沿肾上腺上方可见内脏大神经（图 7.10-1），小心分离主干，在其下方穿一丝线，并安放好保护电极备用。（5）插动脉插管：做插管手术前经耳缘静脉注射肝素（500 U(kg体重)-1），在左侧颈总动脉插入动脉插管2连接实验装置： （1）二道生理记录仪 将血压换能器固定在支架上，并与二道生理记录仪的血压放大器输入端相连。调整记录仪，对血压放大器定标。校正选择调至 13.3 kPa（100 mmHg）,灵敏度置于 50，记录笔上移 2 cm。 （2）计算机生物信号采集处理系统 将动脉插管通过三通与血压换
15、能器连接，血压换能器与计算机生物信号采集处理系统的压力通道连接；刺激电极与系统的刺激输出连接；减压神经的记录电极导线与系统的一个通道连结。 启动计算机生物信号采集处理分析系统，按系统程序提示进行血压信号定标，调整放大增益。3.实验项目 （1）记录正常情况下减压神经放电波形和动脉血压波形，观察二者变化关系 注意观察减压神经的群集性放电与血压的波动是否同步?每一群集性放电持续时间?血压正常值是多少?同时辨认血压波的一级波和二级波，三级波(图 7.10-2)： 一级波（心搏波），由心室舒缩活动所引起的血压波动，心缩时上升，心舒时下降，其频率与心率一致。二级波（呼吸波），由呼吸运动所引起的血压波动，吸
16、气时血压先下降，继而上升，呼气时血压先上升，继而下降，其频率与呼吸频率一致。三级波，不常出现，可能由心血管中枢的紧张性活动的周期变化所致。 （2）夹闭颈总动脉 用动脉夹夹闭右侧颈总动脉 1015 s，观察血压与减压神经放电的变化。在出现一段明显变化后，突然放开动脉夹，血压又有何变化。 （3）牵拉颈总动脉 手持左侧颈总动脉上的远心端结扎线，向心脏方快速牵拉 3 s。观察血压与减压神经放电的变化。若持续牵拉，血压与减压神经放电会有何变化？ （4）静脉注射乙酰胆碱 待血压基本稳定后, 由耳缘静脉注入 1:10000 乙酰胆碱0.20.3 ml，观测血压与减压神经放电的变化。注意动脉血压降低到何种程度
17、时，群集型放电才减少?或完全停止及其恢复过程(图 7.10-3)。 （5）静脉注射去甲肾上腺素 待血压基本稳定后，由耳缘静脉注入 1:10000 去甲肾上腺素 0.20.3 ml，观测血压与减压神经放电的变化。注意何时冲动发放增多?何时分辨不出群集形式?直到血压继续增加而发放冲动的频率不再增加(图 7.10-4)。（6）刺激迷走神经外周端 待血压基本稳定后，结扎并剪断右侧迷走神经，电刺激迷走神经外周端，观察血压和心率的变化。待血压变化明显时停止刺激。（7）刺激内脏大神经 待血压基本稳定后，用保护电极刺激内脏大神经，观察血压和心率的变化（注：刺激前需分离内脏大神经）。（8）刺激减压神经 在血压基
18、本恢复正常后，双重结扎减压神经，并在两结扎线中间剪断减压神经，分别用中等强度电流刺激减压神经的中枢端和外周端，并同时作标记。观察心率与血压变化，待血压出现较明显变化后，停止刺激。 （10）失血 待血压基本稳定后，调节三通管使动脉插管与 50 ml 注射器相通，放血 50 ml。之后立即用肝素生理盐水将插管内血液冲回兔体内，以防动脉插管内凝血，并作标记，观察记录心率与血压的改变。 注意事项 （1）本实验麻醉应适量，麻醉药注射速度要慢，同时注意呼吸变化，以免过量引起动物死亡。如果实验时间过长，动物苏醒挣扎，可适量补充麻醉药物。 （2）仪器和动物要接地，并注意适当的屏蔽。 （3）每观察一个项目，必须
19、待血压和心率恢复正常后，才能进行下一个项目。 （4）每次静脉注射完药物后应立即推注0.5 ml 生理盐水，以防止药液残留在针头内及局部静脉中而影响下一种药物的效应 （5）实验中注射药物较多，要注意保护耳缘静脉。 （6）实验结束后，必须结扎颈总动脉近心端后再拔除动脉插管。 实验结果 剪贴各项记录曲线，每项实验记录必须包括实验前的对照、实验开始的标记及实验项目的注释。比较各种处理前后血压和减压神经放电有何变化，分析血压和减压神经放电之间存在何种关系（图 7.10-5、7.10-6）思考题 1.正常血压曲线的一级波、二级波及三级波各有何特征？其形成机制如何？ 2.动物动脉血压是怎样形成的？如何受神经
20、体液调节？ 3.短时间夹闭右侧颈总动脉（未插管一侧）对全身的血压和心率有何影响？若夹闭部位在颈动脉窦上，影响是否相同？ 4.试分析以上各种实验因素引起动脉血压和心率变化的机制。 5.如何证明减压神经是传入神经？ 补充 此实验也可选用鸭、鳮、鹅做实验对象，现将标本制备简要介绍如下： 须增加一个禽类固定台（图 7.10-7）。 1.麻醉和固定 取只鸭称重，氨基甲酸乙酯溶液按 3.54 ml(kg 体重)-1 作腹腔注射,约15min 麻醉奏效后背位或侧位固定。 2.分离颈部两侧迷走神经 从喉下部 2 cm 处沿正中线切开皮肤，分离胸舌骨肌，再沿气管侧壁分离其结缔组织。在气管两侧的结缔组织中可见到一
21、根粗的白色神经，即是迷走神经。用玻璃分针将其分离 22.5 cm,在其下穿一根线备用,用浸透生理盐水的棉球覆盖,防止干燥。 3.分离颈动脉 见图7.10-8,在食管侧面找到颈动脉,分离出来,下面穿一根线备用。 4.动脉插管插入 剪去股部羽毛。先用手摸出股二头肌和股肌膜张肌的肌间沟，用镊子夹住股部皮肤，沿肌间沟切开皮肤 34 cm，再用止血钳钝性分离，在约 1 cm 深处可看到纵行的股动脉、股静脉和与它们平行的坐骨神经（图 7.10-9）。用弯头眼科镊轻轻分离出股动脉，在其下穿双线，将股动脉提起，此时要特别注意血管分支，最好进行结扎剪断。在远心端进行结扎，近心端用套有乳胶套膜的动脉夹夹住股动脉。
22、在动脉夹和远心端结扎之间，用眼科剪向近心端剪一斜口，将装有肝素的动脉插管插入，结扎并固定。 5.验项目可参考上述实验内容。实验 9.2 唾液分泌的观察 实验目的 观察唾液腺的分泌以及外界刺激对唾液分泌的影响。了解瘘管术在消化吸收生理研究上的应用。实验原理 狗和猪的腮腺仅在食物进入口腔或有条件刺激存在时分泌唾液。不同刺激因素所引起的生物学意义不同，使腮腺分泌的唾液的量与质也有差异。通过手术给狗或猪安装腮腺瘘管，可以观察到不同刺激因素对唾液分泌的影响。实验动物 狗或猪或羊。实验药品 3%戊巴比妥钠、0.2% HCl 溶液仪器与器械 手术器械一套、探针、唾液漏斗、唾液采集管( 带刻度)、门杰雷耶夫氏
23、胶、石蕊试纸、棉花、食饵刺激物( 干馒头粉、肉、水、青菜、甘薯、麦麸、米糠)；嫌恶性食物(小石子、砂)。实验方法及步骤1.实验的准备 静脉注射戊巴比妥钠(3050 mgkg-1)将狗麻醉后，侧卧固定于手术台上，剃去颊部的被毛并消毒。左手拉起上唇口角部分，将其外翻，寻找腮腺导管的排出口。腮腺导管排出口位于颊部粘膜与第或上臼齿相对的小粘膜结节上，导管口径似针尖大小。将探针插入排出口内 35 cm 左右，以免手术时伤及腺导管。在管口周围粘膜上用手术刀划一直径约 lO mm 的圆圈，稍稍剥离粘膜下结缔组织，用细针在粘膜圆圈的边缘穿四条丝线，然后用手术刀由内向外刺穿颊部，用外科镊子夹住露在外面的手术刀尖
24、，在拔出手术刀时，使镊子随刀通过伤口进入口腔内，将探针抽出，再用此镊子夹住腺管排泄口周围粘膜上的丝线，连同粘膜圆块一起抽出来，注意切勿使腺管捻转。用手术刀（或外科剪）去除一小块皮肤。然后将抽出的粘膜圆块缝于颊部皮肤上，口腔内的创口作连续缝合，将拽在外面的粘膜涂一层凡士林，并用数层纱布覆盖，纱布用门杰雷耶夫氏胶粘在皮肤上。手术后 23 天去掉纱布，术后 79 天拆线，就可开始实验(图 9.2-1)。 猪的腮腺瘘管手术，由于解剖特点而略有改变,手术部位从口角上方 7l0 cm 处开始，在与齿龈平行的部位切开皮肤 35 cm。分离结缔组织到达颊部粘膜背面。然后从口腔内找出腮腺导管开口，在皮肤创口前角
25、部位，接近齿龈处切开粘膜，将连有粘膜块的腮腺导管翻出，在皮肤创口处的固定术与狗的相同。羊的腮腺瘘管术后述。2. 实验项目 实验开始时狗站立在固定架上，先将唾液漏斗固定于颊部，用以收集唾液，然后逐项进行实验，主要观察内容有:唾液分泌的潜伏期、分泌持续的时间及分泌量。 （1） 给狗看干馒头粉 1 min 。（2） 喂干馒头粉 40 g。（3） 向口中注射自来水 5 ml。（4） 向口中注射稀 HCl 5 ml。（5） 给狗看肉粉 l min。（6） 喂肉粉 40 g。（7） 向口中放小石子数块。（8） 向口中放少量细砂。以猪为实验动物的实验方法与狗相同。可投喂下列饲料各 50 g:青菜、麦麸、甘薯
26、、米糠。注意事项 1.实验时用浸润乙醚的棉球把瘘管周围皮肤揩干净( 毛长了要剪毛或剃毛)，然后用干棉球按住，把门杰雷耶夫氏胶加热涂在唾液漏斗周围，乘热粘在瘘管处。粘唾液漏斗时，瘘管周围要保持干燥，否则会漏气。2. 每项实验内容结束后应间隔 35 min，再进行下一个实验项目。实验结果 将上述实验结果列表统计,并加以分析讨论。思考题 1.影响唾液分泌的因素有哪些，简要说明其作用机理。2. 给狗看馒头与喂干馒头粉时唾液分泌有何变化？它们的作用机制是否相同？附 1.注 :门杰雷耶夫氏胶的配制:松香 4 份(研碎)，氯化铁 1.6 份，蜂蜡 1 份，亚麻仁油少量。先将氧化铁和蜂蜡加热溶解后加入松香拌匀
27、，最后加入少许亚麻仁油(3000 g 加 10ml)即成。2.该实验也可用羊做实验对象，羊的腮腺漏管术如下：动物侧卧，固定，剃去頰部的毛，用 0.3%普鲁卡局部麻醉；由咬肌前端向内眼角方向切开皮肤 23 cm，分开创口，在颜面静脉后方找到腮腺管，仔细分离，注意切勿伤及腮腺神经。在腮腺管下穿三根线，纵行切开腮腺管，分别与切口的两端插入准备好的塑料细管（将塑料细管上另带一备用线）。用腮线管两边已备的线分别将两塑料细管结扎固定，然后再用中间的已备的线将两塑料管及腮腺管结扎在一起。为了更好地固定，防止脱落，可将塑料细管上早已备的线与腮腺管上的结扎线再次结扎在一起。两条塑料细管外端再套上一塑料或橡胶管，
28、形成体外吻合。此时唾液从近腺体的细管流出，经吻合管流进远端导管，流入口腔（图 9.2-2）。实验 9.4 胃内容物的分层分布 实验目的 观察动物采食后胃内容物的分布情况。实验原理 单胃动物(马、猪、兔及小白鼠)的胃体部运动较弱，因此胃内容物根据进食次序分层排列至幽门区因收缩增强而混合。用不同（颜色的）饲料依一定顺序饲喂动物后，很容易看到这种食物的分层分布。实验对象 兔、豚鼠或小白鼠。实验药品 青草、胡萝卜、麦麸、冰块、食盐或含有红、黄、蓝不同颜色的三种饲料仪器与器材 解剖器械一套、手锯。实验方法与步骤 (1)动物饥饿一昼夜后，实验前 1.5 h 开始给兔喂麦麸，半小时后喂青菜，再隔半小时喂胡萝
29、卜。若用豚鼠或小白鼠做实验对象，则按顺序饲喂红、黄、蓝 三种不同颜色的饲料。(2)饲喂后立即将动物处死，剖开腹腔，用棉绳将食管与十二指肠分别结扎后剪断。将胃取出，移入一个容器 (内含冰块，并加有一定量食盐，使温度在-5以下)或放在冰箱冷冻室内冰冻。 (3)将冰冻的胃从贲门至幽门按横向、纵向几个方向锯开，观察胃内食物的层次分布。思考题 1. 通常在胃的什么部位可观察到混合性食糜？实验 9.11 反刍的机理 实验目的 理解反刍的发生与抑制的机理。 了解瘤胃瘘管法记录瘤胃运动的方法。实验原理 反刍是由于饲料的粗糙部分机械刺激网胃、瘤胃前庭与食管沟的粘膜等处的感受器所引起的反射性调节过程。当瓣胃与皱胃
30、充满饲料时，刺激压力感受器而抑制反刍。本实验通过瘤胃瘘管直接刺激瘤胃的感受器，通过记录瘤胃运动曲线，观察和分析反刍机理。实验对象 羊或牛。实验药品与器材 计算机生物信号采集处理系统（或二道生理记录仪）， 手术器械，咀嚼描记器，压力换能器，连有橡皮管的气球，大号瘤胃瘘管。实验方法与步骤1.实验准备 瘤胃瘘管手术 动物全身麻醉 (或腰椎旁传导麻醉) 后，右侧卧固定于手术台上。按常规处理术部，在左肷部与最后肋骨平行处纵向切开 56 cm 皮肤、皮下肌肉层及腹膜( 图 9.11-1)。用左手提起瘤胃壁，与皮肤作 46 处临时缝合，并在胃壁浆膜层作两道荷包缝合线。然后在正中切口，安置装有塞子的瘤胃瘘管，
31、拆去临时缝合。 在瘘管周围穿过胃肌层与腹壁作四处缝合，以固定瘘管。创口分两层缝合，内层包括腹膜与内斜肌，用肠线连续缝合，外层以丝线缝合皮肤与皮下肌层(图 9.11-2)。如不安置瘤胃瘘管，而开成一大孔，则手术操作略异：分开肌肉处，用止血钳固定腹膜两边，经创口提起瘤胃壁，将两侧分别与两边腹膜缝合。然后切开瘤胃，大小为创口的一半，将瘤胃壁与创口皮肤连续缝合，再切开剩余一半胃壁，同法与皮肤缝合创口边缘涂以碘酊与凡士林，然后安装一临时塞子。术后一周拆线，即可进行实验。2.仪器连接 让动物站立在固定架上，启开瘘管塞；将橡皮气球经瘘管 塞入瓣胃之中，以便用于吹气；安装好咀嚼描记器，然后开始实验。二道生理记
32、录仪 将压力换能器与 “血压放大器“ 的输入口相接。计算机生物信号采集处理系统 将压力换能器与计算机生物信号采集处理系统的 CH1 通道相接。打开系统，选择“呼吸运动的调节“实验项目，即可开始实验。3、实验项目(1)用右手经瘘孔向前下方触摸网胃粘膜，观察是否出现反刍? 记录反刍情况，注意食团的咀嚼次数。羊的瘘管较小，手不能伸入，可用一根硬橡皮管，通过瘘管向网胃和瘤胃前庭方向连续刺激，用以引起反刍反应。(2)待动物静止后，刺激食管沟粘膜，动物有何反应?(3) 在反刍期间，吹胀放置于瓣胃内的气球，能否抑制反刍?(4) 瘤胃瘘管纳入气球，记录瘤胃运动曲线，并进行分析。实验结果剪贴实验记录曲线,并加以
33、分析。思考题1. 在动物反刍期间，吹胀放置于瓣胃内的气球，反刍活动有何变化？2.用一根硬橡皮管刺激反刍动物的网胃粘膜，反刍活动有何变化？为什么？实验 10.4 甲状腺素对代谢的影响 实验目的 将小白鼠分为对照组与给药组，分别观察动物在密闭广口瓶的活动与存活时间,或测定两组动物的平均耗氧量，理解甲状腺素对机体代谢的影响。实验原理 甲状腺素可显著提高动物的基础代谢，增加动物的耗氧量和对缺氧的敏感性，降低动物对缺氧的耐受性。将灌服甲状腺素制剂的动物置于密闭容器中，动物容易因缺氧窒息而死亡。实验对象 小白鼠。实验药品 甲状腺激素制剂。仪器与器械 鼠笼、鼠饮水器、注射器或灌胃管、500ml 广口瓶、耗氧
34、量测量装置（见实验 10.1 鼠耗氧量的测定）。实验方法和步骤 1.实验的准备 (1)将健康小白鼠按性别、体重（18 22 g）平均分为对照组与给药组，每组1015 只。(2)给药组小白鼠采用灌胃法灌服甲状腺激素制剂，每日 5 mg，连续给药 2 周。对照组动物应用灌胃法灌服生理盐水。2.实验项目试验方法有两种，可选择其中一种进行实验。（1）将每只小白鼠分别放入500 ml 广口瓶中，瓶口密封后，立即记时，观察动物的活动，记录小白鼠的存活时间。(2) 按实验 10.1 介绍的实验方法，分别测得每只动物的耗氧量。注意事项 1.室温升高能增加动物对缺氧的敏感性，故实验室宜保持在 25左右。2.应将
35、动物进行编号。 实验结果 1.统计出全组动物的实验结果，计算出平均存活时间，最后比较实验组与对照组的平均存活时间，并加以讨论 2.统计出全组动物的实验结果，计算出每组动物的平均耗氧量，最后比较实验组与对照组的平均耗氧量，并加以讨论。思考题 1.甲状腺素对动物能量代谢有何影响? 其作用机制是什么 ?2.影响代谢率的因素有哪些?实验 12.3 家 去小脑动物的观察 实验目的 观察动物的小脑损伤后对其肌紧张和身体平衡等躯体运动的影响。实验原理 小脑是调节机体姿势和躯体运动的重要中枢，它接受来自运动器官、平衡器官和大脑皮层运动区的信息，其与大脑皮层运动区、脑干网状结构、脊髓和前庭器官等有广泛联系，对大
36、脑皮层发动的随意运动起协调作用，还可调节肌紧张和维持躯体平衡。小脑损伤后会发生躯体运动障碍，主要表现为躯体平衡失调、肌张力增强或减退及共济失调。实验对象 小白鼠、蛙或蟾蜍、鲤鱼。实验药品 乙醚仪器与器械 手术器械一套、鼠手术台、注射针头、棉球、烧杯。实验方法与步骤 1.实验准备(1)麻醉 麻醉之前首先要注意观察小白鼠的姿势、肌张力以及运动的表现。然后将小白鼠罩于烧杯内，放入一块浸有乙醚的棉球使其麻醉，待动物呼吸变为深慢且不再有随意活动时，将其取出，俯卧位缚于鼠手术台上。(2) 手术 破坏小白鼠的一侧小脑： 剪除头顶部的毛，用左手将头部固定，沿正中线切开皮肤直达耳后部。用刀背向两侧剥离颈部肌肉及
37、骨膜，暴露颅骨，透过颅骨可见到小脑，在正中线旁开12 mm(图 12.3-1)，用大头针垂直刺入一侧小脑，进针深度约 3 mm，然后左右前后搅动，以破坏该侧小脑。取出大头针，用棉球压迫止血。 破坏蛙的一侧小脑： 用湿纱布包裹蛙的身体，露出头部。以左手抓住蛙的身体，从鼻孔上部至枕骨大孔前缘（即鼓膜的后缘）沿眼球内缘用剪刀将额顶皮肤划出两条平行裂口，用镊子掀起该条皮肤，剪去，暴露颅骨，细心剪去额顶骨，使脑组织暴露出来，直至延髓为止。变认蛙脑各部分（图 12.3-2）。蛙的小脑不发达，位于延脑前，呈一条横的皱褶，紧贴在视叶的后方。用玻璃分针将一侧的小脑捣毁，用小棉球轻轻堵塞止血，待 5 10 min
38、 后即可开始实验。破坏鲤鱼的一侧小脑： 用湿抹布包裹鱼身，露出头。于顶骨后 1/3 处，用骨钻钻开顶骨，用止血钳逐渐扩大创面，鲤鱼的小脑十分发达，小脑体近似椭圆形，不分左右两叶（图 12.3-3）。用小镊子夹取一侧小脑。 2.实验项目 (1)将小白鼠放在实验台上，待其清醒后观察其姿势、肢体肌肉紧张度的变化、行走时是否有不平衡现象以及动物是否向一侧旋转或翻滚?(2)观察蛙静止体位和姿势的改变，蛙在跳跃或游泳时有何异常？(3)观察鱼游泳的姿势有何变化。注意事项1. 麻醉时间不宜过长，并要密切注意动物的呼吸变化，避免麻醉过深导致动物死亡。2.手术过程中如动物苏醒或挣扎，可随时用乙醚棉球追加麻醉。3.
39、捣毁小脑时不可刺入过深，以免伤及中脑、延髓或对侧小脑。实验结果描述一侧小脑损伤后，动物的姿势和躯体运动有何异常? 根据实验结果，总结小脑对躯体运动的调节功能。实验 13.11 精子活力的测定 实验目的 通过对精子活力的测定了解精子的品质，掌握精子活力测定的方法。实验原理 精子活力主要是指精子的运动情况，精子的运动有直线前进运动、旋转运动和振摆运动。评定精子的活力是指直线运动精子占精子总数的百分数。实验对象 各种家畜或鱼类的新鲜精液。实验药品 0.9% NaCl 溶液。仪器与器材 显微镜、显微镜保温箱、载玻片、盖玻片、玻璃棒。实验方法与步骤 1. 用玻璃棒蘸取新鲜精液或用 0.9NaCl 稀释的
40、精液，滴在载玻片上，加上盖玻片，中间不要有气泡，用暗视野进行观察，统计精子三种运动的情况。2计算精子直线前进运动与精子总数的比值是精子的活率。注意事项 1精子采后必须在 2226的实验室内进行，哺乳动物的精子最好是在 37的保温箱内进行。2 在暗视野中进行观察。3 盖玻片与载玻片之间不能有气泡，显微镜的载物台不能倾斜。思考题 为什么精子活力的测定只用直线运动的精子。实验 13.2 甲状旁腺切除与骨骼肌痉挛的关系 实验目的 了解甲状旁腺的生理机能。实验原理 甲状旁腺分泌甲状旁腺素，其主要功能是调节体内钙磷代谢，可使血钙浓度升高，而血磷浓度下降。它和甲状腺 C 细胞分泌的降钙素共同调节细胞外液中的
41、钙浓度，以维持神经，肌肉的正常机能。如切除甲状旁腺，则血钙低于正常生理水平，可引起神经、肌肉的兴奋性升高，使动物产生阵发性的痉挛现象，最终可因喉头肌和膈肌痉挛导致动物窒息死亡。肉食动物较草食动物易于发病。由于甲状旁腺小而分散，有的还埋于甲状腺内，完全单独切除甲状旁腺比较困难，但甲状旁腺素缺乏症较甲状腺素缺乏症出现要早（甲状旁腺素缺乏症一般在术后 24 天可出现），因此实验中一般同时切除甲状腺和甲状旁腺。实验对象 幼狗实验药品 碘酊、75%酒精、2% 戊巴比妥纳、10%CaCl 2溶液（或 10%葡萄糖酸钙溶液），仪器与器械注射器、手术台、常用消毒外科手术器械，消毒过的手术创布、衣帽等。实验方法
42、与步骤1.实验的准备 选一健康幼狗。将幼狗用戊巴比妥(3050 mgkg-1)麻醉后仰卧固家于手术台上，剪去颈部被毛，暴露术野，用碘酒消毒后盖上创布，在咽喉下方沿正中线切开皮肤 69 cm（切口略高于甲状软骨下缘），钝性分离左右侧胸骨舌骨肌，在甲状软骨下方的气管两则分离出甲状腺及甲状旁腺（狗的甲状旁腺左右各两个，如小米粒大小，位于甲状腺囊内和腺体表面。如图 13.2-1），将分布到甲状腺上的血管分离结扎，摘除甲状腺，则散布于其上的甲状旁腺也被切除。然后缝合，消毒，包扎好伤口。2.实验项目 (1)观察幼狗开始出现骨骼肌痉挛反应的时间，作详细记录。术后应喂无钙饲料，禁喂肉类，随时观察动物反应（一般术后 12 天就可出现肌肉轻度僵直，行动不稳，继而出现痉挛性收缩，呼吸加快症状。若继续发展，可致窒息死亡）。(2)症状出现后，静注 10%CaCl2 溶液（1 g(kg 体重)-1)，观察结果，并记录。(3)继续观察，直到动物死亡，记录其间动物反应情况。注意事项 1.术后应饲喂无钙饲料，禁喂肉类 2.静注氯化钙溶液时剂量不能过大。思 考 题 调节钙代谢的激素主要有哪些？分别有何作用？
