1、酶联免疫吸附试验 （enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）,探生科技旗下编辑部,一、实验目的,掌握ELISA的原理及方法,二、principle： ,抗原或抗体能结合到固相载体的表面仍保持其活性；抗原或抗体与酶交联成酶标抗原或抗体后，仍分别保持其免疫活性和酶活性。 酶标抗原或抗体与相应抗体或抗原反应后，结合在免疫复合物上的酶遇到相应的底物时，可以催化底物的水解、氧化或还原，从而产生有色物质。颜色反应的深浅与相应抗体或抗原量相关。 常用的ELISA方法包括：间接法、双抗体夹心法、竞争法等。,ELISA双抗体夹心法(sandwich assay)测甲胎蛋
2、白（-fetal protein, AFP）,一、Principle of AFP detection,用抗AFP抗体包被固相载体，加入待检标本，标本中的AFP与固相载体上的抗体结合，再加入酶标记的抗AFP抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，加底物显色，颜色的深浅与相应AFP的量呈正相关。,principle,抗AFPMcAb抗体,抗AFPMcAb抗体,AFP,双位点一步法：抗AFP不同位点的McAb,二、material,1、AFP检测试剂盒 2、AFP参考标准夜（0、25、50、100、200、400ng/ml）。 3、DW 4、终止液（2M H2SO4）。 5、酶标测定仪、37温箱。
3、6、微量加样器、滴管、吸水纸等。,三、method,（一）quantity test 1、add sample取包被好的酶标孔7孔，进行标记，第16孔分别加入AFP参考标准夜（0、25、50、100、200、400ng/ml）各50ul。第7孔加入样品50ul。 2、每孔加酶结合物1滴，3715分钟。 3、wash 在各孔中加入洗液2滴,轻轻摇动几下,弃之,然后用蒸馏水或自来水加满各孔,甩掉,反复5次,最后在吸水纸上拍干. 4、显色 每孔加底物和显色液各1滴，轻轻振摇，室温避光反应5分钟，加入2M H2SO4 100ul终止反应。 5、酶标仪450nm比色，计算结果。,（二） quality
4、test 1Add sample 取包被好的酶标板3各孔，分别加入阴性对照（20 ng/ml）、阳性对照（400 ng/ml）和待检标本各50ul，各孔再加入酶结合物1滴, 3715分钟。 2、washing 在各孔中加入洗液2滴,轻轻摇动几下,弃之,然后用蒸馏水或自来水加满各孔,甩掉,反复5次,最后在吸水纸上拍干. 3、add chromogen 每孔加底物和显色液各1滴，轻轻振摇，室温避光反应5分钟，观察结果。,四、result,1Quantity test 用酶标仪进行比色，以0 ng/ml标准孔为空白孔，在波长450nm处分别读取各标准孔和样本孔OD值，以OD值为横坐标，AFP含量为纵
5、坐标，在半对数坐标纸上画出标准曲线，以测定孔的OD值在标准曲线上查出相应标本的AFP含量。2Quality test 在白色背景上直接肉眼观察结果。阴性对照孔应基本无色，阳性对照孔呈深蓝色。若待检样品孔色泽深于阳性对照孔则AFP400ng/ml，阳性；若待检样品孔色泽深于阴性对照孔而浅于阳性对照孔则20ng/mlAFP400ng/ml，弱阳性；待检样品孔色泽浅于阴性对照孔则AFP 20ng/ml，阴性。参考范围：正常成人AFP含量20ng/ml。,五、Report,1简述ELISA原理及ELISA双抗体夹心法测AFP原理。 2记录实验结果。,感谢您的浏览,有需要的相关抗体可以在Fantibody全球抗体搜索引擎进行咨询 全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库，其抗体信息数据来源于全球范围的研究机构与商业公司。该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用评价数据库两部分组成，以帮助研究者更高效的寻找并评估该抗体的性能。全球抗体搜索引擎是继基因与蛋白数据库之后更为复杂的应用型检索平台，由探生科技建立并维护。 网址：http:/ Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!,
