电泳工艺.doc

1、电泳工艺1 电 泳 工 艺 分 为 阳 极 电 泳 和 阴 极 电 泳 。 若 涂 料 粒 子 带 负 电 ， 工 件 为 阳 极 ，涂 料 粒 子 在 电 场 力 作 用 下 在 工 件 沉 积 成 膜 称 为 阳 极 电 泳 ； 反 之 ， 若 涂 料 粒 子 带 正 电 ，工 件 为 阴 极 ， 涂 料 粒 子 在 工 件 上 沉 积 成 膜 称 为 阴 极 电 泳 。 阳 极 电 泳 的 特 点 是 ： 原 料 价 格 便 宜 （ 一 般 比 阴 极 电 泳 便 宜 50%） ； 设备 较 简 单 ， 投 资 少 （ 一 般 比 阴 极 电 泳 便 宜 30%） ； 技 术 要 求 较

2、 低 ； 涂 层 耐 蚀性 能 较 阴 极 电 泳 差 （ 约 为 阴 极 电 泳 寿 命 之 1/4） 。 阴 极 电 泳 涂 层 耐 蚀 性 高 的 原 因 是 ： 工 件 是 阴 极 ， 不 发 生 阳 极 溶 解 ， 工 件表 面 及 磷 化 膜 不 破 坏 ； 电 泳 涂 料 （ 一 般 为 含 氮 树 脂 ） 对 金 属 有 保 护 作 用 ， 且 所 用 漆 价高 质 优 。 阳 极 电 泳 一 般 工 艺 流 程 为 ： 工 件 前 处 理 （ 除 油 热 水 洗 除 锈 冷 水 洗 磷 化 热 水 洗 钝 化 ） 阳 极 电 泳 工 件 后 处 理 （ 清 水 洗 烘 干 ）

3、 。 1、 除 油 。 溶 液 一 般 为 热 碱 性 化 学 除 油 液 ， 温 度 为 60 （ 蒸 汽 加 热 ） ，时 间 为 20min 左 右 。 2、 热 水 洗 。 温 度 60 （ 蒸 汽 加 热 ） ， 时 间 2min。 3、 除 锈 。 用 H2SO4 或 HCl ， 例 如 用 盐 酸 除 锈 液 ， HCl 总 酸 度 43 点 ；游 离 酸 度 41 点 ； 加 清 洗 剂 1.5%； 室 温 下 洗 10 20min。 4、 冷 水 洗 。 流 动 中 冷 水 洗 1min。 5、 磷 化 。 用 中 温 磷 化 （ 60 时 磷 化 10min） ， 磷 化

4、液 可 用 市 售 成 品 。 上 述 工 序 亦 可 用 喷 砂 水 洗 代 替 。 6、 钝 化 。 用 与 磷 化 液 配 套 的 药 品 （ 由 出 售 磷 化 液 厂 家 提 供 ） ， 室 温 下1 2min 即 可 。 7、 阳 极 电 泳 。 电 解 液 成 分 ： H08-1 黑 色 电 泳 漆 ， 固 体 分 质 量 分 数9% 12%， 蒸 馏 水 质 量 分 数 88% 91%。 电 压 ： （ 7010） V； 时 间 ：2 2.5min； 漆 液 温 度 ： 15 35 ； 漆 液 PH 值 ： 8 8.5。 注 意 工 件 出 入 槽要 断 电 。 电 泳 过 程

5、 中 电 流 随 漆 膜 增 厚 会 逐 步 下 降 。 8、 清 水 洗 。 流 动 冷 水 中 洗 。 9、 烘 干 。 在 烘 箱 中 于 （ 1655） 温 度 下 烘 40 60min 即 可 。电泳科技名词定义中文名称：电泳 英文名称：electrophoresis 定义 1：液体介质中带电的胶体微粒在外电场作用下相对液体的迁移现象。 所属学科：机械工程（一级学科） ；表面工程（二级学科） ；电镀与化学镀（三级学科） 定义 2：依据分子或颗粒所带的电荷、形状和大小等不同，因而在电场介质中移动的速度不同，从而达到分离的技术。 所属学科：生物化学与分子生物学（一级学科） ；方法与技术（

6、二级学科） 定义 3：带电物质或细胞在电场中的泳动。根据大分子或颗粒的电荷、大小和形状不同，使其在通过电场中的凝胶或介质时发生分离的方法。 所属学科：细胞生物学（一级学科） ；细胞生物学技术（二级学科） 本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布 百科名片电泳带电颗粒在电场作用下，向着与其电性相反的电极移动，称为电泳(electrophoresis, EP)。利用带电粒子在电场中移动速度不同而达到分离的技术称为电泳技术。1937 年瑞典学者 A.W.K.蒂塞利乌斯设计制造了移动界面电泳仪 ，分离了马血清白蛋白的 3 种球蛋白，创建了电泳技术。目录电泳 电泳种类 电泳原理 电泳 电泳 电泳种类

7、电泳原理 电泳 展开编 辑 本 段 电 泳什 么 是 电 泳在 确 定 的 条 件 下 ， 带 电 粒 子 在 单 位 电 场 强 度 作 用 下 ， 单 位 时 间 内 移 动 的 距 离 （ 即 迁移 率 ） 为 常 数 ， 是 该 带 电 粒 子 的 物 化 特 征 性 常 数 1。 不 同 带 电 粒 子 因 所 带 电 荷 不 同 ，或 虽 所 带 电 荷 相 同 但 荷 质 比 不 同 ， 在 同 一 电 场 中 电 泳 ， 经 一 定 时 间 后 ， 由 于 移 动 距 离不 同 而 相 互 分 离 。 分 开 的 距 离 与 外 加 电 场 的 电 压 与 电 泳 时 间 成

8、正 比 。 在 外 加 直 流 电 源 的 作 用 下 ， 胶 体 微 粒 在 分 散 介 质 里 向 阴 极 或 阳 极 作 定 向 移 动 ， 这种 现 象 叫 做 电 泳 。 利 用 电 泳 现 象 使 物 质 分 离 ， 这 种 技 术 也 叫 做 电 泳 。 胶 体 有 电 泳 现 象 ，证 明 胶 体 的 微 粒 带 有 电 荷 。 各 种 胶 体 微 粒 的 本 质 不 同 ， 它 们 吸 附 的 离 子 不 同 ， 所 以 带 有不 同 的 电 荷 。 电 荷 移 动 规 律利 用 电 泳 可 以 确 定 胶 体 微 粒 的 电 性 质 ， 向 阳 极 移 动 的 胶 粒 带

9、负 电 荷 ， 向 阴 极 移 动的 胶 粒 带 正 电 荷 。 一 般 来 讲 ， 金 属 氢 氧 化 物 、 金 属 氧 化 物 等 胶 体 微 粒 吸 附 阳 离 子 ， 带 正 电 荷 ； 非 金 属 氧 化 物 、 非 金 属 硫 化 物 等 胶 体 微 粒 吸 附 阴 离 子 ， 带 负 电 荷 。 因 此 ， 在 电 泳 实 验 中 ， 氢 氧 化 铁 胶 体 微 粒 向 阴 极 移 动 ， 三 硫 化 二 砷 胶 体 微 粒 向 阳极 移 动 。 利 用 电 泳 可 以 分 离 带 不 同 电 荷 的 溶 胶 。 例 如 ， 陶 瓷 工 业 中 用 的 粘 土 ， 往 往 带

10、有 氧 化 铁 ， 要 除 去 氧 化 铁 ， 可 以 把 粘 土 和 水 一起 搅 拌 成 悬 浮 液 ， 由 于 粘 土 粒 子 带 负 电 荷 ， 氧 化 铁 粒 子 带 正 电 荷 ， 通 电 后 在 阳 极 附 近 会聚 集 出 很 纯 净 的 粘 土 。 工 厂 除 尘 也 用 到 电 泳 。 利 用 电 泳 还 可 以 检 出 被 分 离 物 ， 在 生化 和 临 床 诊 断 方 面 发 挥 重 要 作 用 。 本 世 纪 40 年 代 末 到 50 年 代 初 相 继 发 展 利 用 支 持 物进 行 的 电 泳 ， 如 滤 纸 电 泳 ， 醋 酸 纤 维 素 膜 电 泳 、

11、琼 脂 电 泳 ； 50 年 代 末 又 出 现 淀 粉 凝胶 电 泳 和 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 等 。 应 用 领 域电 铸 电 泳电 泳 已 日 益 广 泛 地 应 用 于 分 析 化 学 、 生 物 化 学 、 临 床 化 学 、 毒 剂 学 、 药 理 学 、 免 疫学 、 微 生 物 学 、 食 品 化 学 等 各 个 领 域 。 在 直 流 电 场 中 ， 带 电 粒 子 向 带 符 号 相 反 的 电 极 移动 的 现 象 称 为 电 泳 （ electropho-resis） 。 1809 年 俄 国 物 理 学 家 Pece 首 先 发 现 了 电 泳现 象 ，

12、 但 直 到 1937 年 瑞 典 的 Tiselius 建 立 了 分 离 蛋 白 质 的 界 面 电 泳 （ boundary electrophoresis） 之 后 ， 电 泳 技 术 才 开 始 应 用 。 本 世 纪 60-70 年 代 ， 当 滤 纸 、 聚 丙 烯酰 胺 凝 胶 等 介 质 相 继 引 入 电 泳 以 来 ， 电 泳 技 术 得 以 迅 速 发 展 。 丰 富 多 彩 的 电 泳 形 式 使其 应 用 十 分 广 泛 。 电 泳 技 术 除 了 用 于 小 分 子 物 质 的 分 离 分 析 外 ， 最 主 要 用 于 蛋 白 质 、核 酸 、 酶 ， 甚 至

13、病 毒 与 细 胞 的 研 究 。 由 于 某 些 电 泳 法 设 备 简 单 ， 操 作 方 便 ， 具 有 高 分辨 率 及 选 择 性 特 点 ， 已 成 为 医 学 检 验 中 常 用 的 技 术 。 电 泳 又 名 电 着 ( 著 ) ， 泳 漆 ， 电 沉 积 。 创 始 于 二 十 世 纪 六 十 年 代 ， 由福 特 汽 车 公 司 最 先 应 用 于 汽 车 底 漆 。 由 于 其 出 色 的 防 腐 、 防 锈 功 能 ， 很 快 在 军 工 行 业得 到 广 泛 应 用 。 近 几 年 才 应 用 到 日 用 五 金 的 表 面 处 理 。 由 于 其 优 良 的 素 质

14、 和 高 度 环 保 ，正 在 逐 步 替 代 传 统 油 漆 喷 涂 。 电 泳 表 面 处 理 工 艺 的 特 点喇 叭 电 著 电 泳电 泳 漆 膜 具 有 涂 层 丰 满 、 均 匀 、 平 整 、 光 滑 的 优 点 ， 电 泳 漆 膜 的 硬 度 、 附 着 力 、 耐 腐 、 冲 击 性 能 、 渗 透 性 能 明 显 优 于 其 它 涂 装 工 艺 。 编 辑 本 段 电 泳 种 类移 动 界 面 电 泳是 将 被 分 离 的 离 子 （ 如 阴 离 子 ） 混 合 物 置 于 电 泳 槽 的 一 端 （ 如 负 极 ） ， 在 电 泳 开始 前 ， 样 品 与 载 体 电 解

15、 质 有 清 晰 的 界 面 。 电 泳 开 始 后 ， 带 电 粒 子 向 另 一 极 （ 正 极 ） 移动 ， 泳 动 速 度 最 快 的 离 子 走 在 最 前 面 ， 其 他 离 子 依 电 极 速 度 快 慢 顺 序 排 列 ， 形 成 不 同 的区 带 。 只 有 第 一 个 区 带 的 界 面 是 清 晰 的 ， 达 到 完 全 分 离 ， 其 中 含 有 电 泳 速 度 最 快 的 离 子 ，其 他 大 部 分 区 带 重 叠 。 区 带 电 泳是 在 一 定 的 支 持 物 上 ， 于 均 一 的 载 体 电 解 质 中 ， 将 样 品 加 在 中 部 位 置 ， 在 电 场

16、 作 用下 ， 样 品 中 带 正 或 负 电 荷 的 离 子 分 别 向 负 或 正 极 以 不 同 速 度 移 动 ， 分 离 成 一 个 个 彼 此 隔开 的 区 带 。 区 带 电 泳 按 支 持 物 的 物 理 性 状 不 同 ， 又 可 分 为 纸 和 其 他 纤 维 膜 电 泳 、 粉 末电 泳 、 凝 胶 电 泳 与 丝 线 电 泳 。 等 电 聚 焦 电 泳是 将 两 性 电 解 质 加 入 盛 有 pH 梯 度 缓 冲 液 的 电 泳 槽 中 ， 当 其 处 在 低 于 其 本 身 等 电点 的 环 境 中 则 带 正 电 荷 ， 向 负 极 移 动 ； 若 其 处 在 高

17、 于 其 本 身 等 电 点 的 环 境 中 ， 则 带 负 电向 正 极 移 动 。 当 泳 动 到 其 自 身 特 有 的 等 电 点 时 ， 其 净 电 荷 为 零 ， 泳 动 速 度 下 降 到 零 ， 具有 不 同 等 电 点 的 物 质 最 后 聚 焦 在 各 自 等 电 点 位 置 ， 形 成 一 个 个 清 晰 的 区 带 ， 分 辨 率极 高 。 等 速 电 泳是 在 样 品 中 加 有 领 先 离 子 （ 其 迁 移 率 比 所 有 被 分 离 离 子 的 大 ） 和 终 末 离 子 （ 其 迁 移率 比 所 有 被 分 离 离 子 的 小 ） ， 样 品 加 在 领 先

18、离 子 和 终 末 离 子 之 间 ， 在 外 电 场 作 用 下 ， 各离 子 进 行 移 动 ， 经 过 一 段 时 间 电 泳 后 ， 达 到 完 全 分 离 。 被 分 离 的 各 离 子 的 区 带 按 迁 移 率大 小 依 序 排 列 在 领 先 离 子 与 终 末 离 子 的 区 带 之 间 。 由 于 没 有 加 入 适 当 的 支 持 电 解 质来 载 带 电 流 ， 所 得 到 的 区 带 是 相 互 连 接 的 （ 图 d） ， 且 因 “ 自 身 校 正 ”效 应 ， 界 面 是清 晰 的 ， 这 是 与 区 带 电 泳 不 同 之 处 。 电 泳 分 离 原 理 示

19、意 图 a 移 动 界 面 电 泳 b 区 带 电 泳 c 等 电 聚 焦 电 泳 d 等 速 电 泳 L 领 先 离 子 T 终 末 离 子 编 辑 本 段 电 泳 原 理综 述电 泳 是 电 泳 涂 料 在 阴 阳 两 极 ， 施 加 于 电 压 作 用 下 ， 带 电 荷 的 涂 料 离 子 移 动 到 阴 极 ，并 与 阴 极 表 面 所 产 生 的 碱 性 物 质 作 用 形 成 不 溶 解 物 ， 沉 积 于 工 件 表 面 。 它 包 括 四 个 过 程 ： 电 解 （ 分 解 ）在 阴 极 反 应 最 初 为 电 解 反 应 ， 生 成 氢 气 及 氢 氧 根 离 子 OH ，

20、 此 反 应 造 成 阴 极 面形 成 一 高 碱 性 边 界 层 ， 当 阳 离 子 与 氢 氧 根 作 用 成 为 不 溶 于 水 的 物 质 ， 涂 膜 沉 积 ， 方 程式 为 ： H2O OH+H 电 泳 动 （ 泳 动 、 迁 移 ）阳 离 子 树 脂 及 H+ 在 电 场 作 用 下 ， 向 阴 极 移 动 ， 而 阴 离 子 向 阳 极 移 动 过 程 。 电 沉 积 （ 析 出 ）在 被 涂 工 件 表 面 ， 阳 离 子 树 脂 与 阴 极 表 面 碱 性 作 用 ， 中 和 而 析 出 不 沉 积 物 ， 沉 积 于 被 涂 工 件 上 。 电 渗 （ 脱 水 ）涂 料

21、固 体 与 工 件 表 面 上 的 涂 膜 为 半 透 明 性 的 ， 具 有 多 数 毛 细 孔 ， 水 被 从 阴 极 涂 膜 中 排 渗 出 来 ， 在 电 场 作 用 下 ， 引 起 涂 膜 脱 水 ， 而 涂 膜 则 吸 附 于 工 件 表 面 ， 而 完 成 整 个 电 泳 过 程 。 编 辑 本 段 电 泳综 述电 泳 (Electrophoresis)是 指 带 电 荷 的 粒 子 或 分 子 在 电 场 中 移 动 的 现 象 称 为 电 泳 .大分 子 的 蛋 白 质 ,多 肽 ,病 毒 粒 子 ,甚 至 细 胞 或 小 分 子 的 氨 基 酸 ,核 苷 等 在 电 场 中

22、 都 可 作 定 向泳 动 .1937 年 Tis 相 关 书 籍elius 成 功 地 研 制 了 界 面 电 泳 仪 进 行 血 清 蛋 白 电 泳 ,它 是 在 一 U 型 管 的 自 由 溶 液 中 进 行的 ,电 泳 后 用 光 学 系 统 使 各 种 蛋 白 所 形 成 折 光 率 差 别 成 为 曲 线 图 象 ,将 血 清 蛋 白 分 为 白蛋 白 ,1-球 蛋 白 ,2-球 蛋 白 ,-球 蛋 白 和 -球 蛋 白 五 种 ,随 后 ,Wielamd 和 Kanig 等 于1948 年 采 用 滤 纸 条 做 载 体 ,成 功 地 进 行 了 纸 上 电 泳 .从 那 时 起

23、 ,电 泳 技 术 逐 渐 被 人 们 所 接受 并 予 以 重 视 ,继 而 发 展 以 滤 纸 ,各 种 纤 维 素 粉 ,淀 粉 凝 胶 ,琼 脂 和 琼 脂 糖 凝 胶 ,醋 酸 纤 维素 薄 膜 ,聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 等 为 载 体 ,结 合 增 染 试 剂 如 银 氨 染 色 ,考 马 斯 亮 蓝 等 大 大 提 高 和促 进 生 物 样 品 着 色 与 分 辨 能 力 ,此 外 电 泳 分 离 和 免 疫 反 应 相 结 合 ,使 分 辨 率 不 断 朝 着 微量 和 超 微 量 (1ng 0.001ng)水 平 发 展 ,从 而 使 电 泳 技 术 获 得 迅 速 推

24、广 和 应 用 .在 此 主 要介 绍 常 用 电 泳 的 一 般 原 理 及 其 应 用 . 电 泳 的 基 本 原 理生 物 大 分 子 如 蛋 白 质 ,核 酸 ,多 糖 等 大 多 都 有 阳 离 子 和 阴 离 子 基 团 ,称 为 两 性 离 子 .常 以 颗 粒 分 散 在 溶 液 中 ,它 们 的 静 电 荷 取 决 于 介 质 的 H+浓 度 或 与 其 他 大 分 子 的 相 互 作用 .在 电 场 中 ,带 电 颗 粒 向 阴 极 或 阳 极 迁 移 ,迁 移 的 方 向 取 决 于 它 们 带 电 的 符 号 ,这 种 迁移 现 象 即 所 谓 电 泳 . 如 果 把

25、生 物 大 分 子 的 胶 体 溶 液 放 在 一 个 没 有 干 扰 的 电 场 中 ,使 颗 粒 具 有 恒 定 迁 移速 率 的 驱 动 力 来 自 于 颗 粒 上 的 有 效 电 荷 Q 和 电 位 梯 度 E.它 们 与 介 质 的 摩 擦 阻 力 f 抗衡 .在 自 由 溶 液 中 这 种 抗 衡 服 从 Stokes 定 律 . F=6rv 这 里 v 是 在 介 质 粘 度 为 中 半 径 为 r 的 颗 粒 的 移 动 速 度 .但 在 凝 胶 中 ,这 种 抗 衡 并不 完 全 符 合 Stokes 定 律 .F 取 决 于 介 质 中 的 其 他 因 子 ,如 凝 胶 厚

26、 度 ,颗 粒 大 小 ,甚 至 介 质的 内 渗 等 . 电 泳 迁 移 率 (mbility)m 规 定 为 在 电 位 梯 度 E 的 影 响 下 ,颗 粒 在 时 间 t 中 的 迁 移 距 离d. d m= - 或 m=V / E tE 迁 移 率 的 不 同 提 供 了 从 混 合 物 中 分 离 物 质 的 基 础 ,迁 移 距 离 正 比 于 迁 移 率 . 影 响 电 泳 的 因 素1. 电 泳 介 质 的 pH 值 溶 液 的 pH 值 决 定 带 电 物 质 的 解 离 程 度 ,也 决 定 物 质 所 带 净 电 荷 的 多 少 .对 蛋 白 质 ,氨 基 酸 等 类

27、似 两 性 电 解 质 ,pH 值 离 等 电 点 越 远 ,粒 子 所 带 电 荷 越 多 ,泳 动 速 度 越 快 ,反 之越 慢 .因 此 ,当 分 离 某 一 种 混 合 物 时 ,应 选 择 一 种 能 扩 大 各 种 蛋 白 质 所 带 电 荷 量 差 别 的pH 值 ,以 利 于 各 种 蛋 白 质 的 有 效 分 离 .为 了 保 证 电 泳 过 程 中 溶 液 的 pH 值 恒 定 ,必 须 采用 缓 冲 溶 液 . 缓 冲 液 的 离 子 强 度 溶 液 的 离 子 强 度 (Ion intensity)是 指 溶 液 中 各 离 子 的 摩 尔 浓 度 与 离 子 价 数

28、 平 方 的 积的 总 和 的 1/2.带 电 颗 粒 的 迁 移 率 与 离 子 强 度 的 平 方 根 成 反 比 .低 离 子 强 度 时 ,迁 移 率 快 ,但 离 子 强 度 过 低 ,缓 冲 液 的 缓 冲 容 量 小 ,不 易 维 持 pH 恒 定 .高 离 子 强 度 时 ,迁 移 率 慢 ,但电 泳 谱 带 要 比 低 离 子 强 度 时 细 窄 .通 常 溶 液 的 离 子 强 度 在 0.02 0.2 之 间 . I=1/2CiZi2 (I:离 子 强 度 ;Ci:离 子 的 摩 尔 浓 度 ;Zi:离 子 价 数 . ) 0.154M NaCl 溶 液 的 离 子 强

29、度 为 : I= 1/2(0.15412+0.15412)=0.154 0.015M Na2SO4 溶 液 的 离 子 强 度 为 : I= 1/2(0.015212+0.01522)=0.045 3. 电 场 强 度 电 场 强 度 (电 势 梯 度 Electric field intensity)是 指 每 厘 米 的 电 位 降 (电 位 差 或 电 位 梯度 ).电 场 强 度 对 电 泳 速 度 起 着 正 比 作 用 ,电 场 强 度 越 高 ,带 电 颗 粒 移 动 速 度 越 快 .根 据 实验 的 需 要 ,电 泳 可 分 为 两 种 :一 种 是 高 压 电 泳 ,所 用

30、 电 压 在 500 1000V 或 更 高 .由 于 电 压高 ,电 泳 时 间 短 (有 的 样 品 需 数 分 钟 ),适 用 于 低 分 子 化 合 物 的 分 离 ,如 氨 基 酸 ,无 机 离 子 ,包 括 部 分 聚 焦 电 泳 分 离 及 序 列 电 泳 的 分 离 等 .因 电 压 高 ,产 热 量 大 ,必 须 装 有 冷 却 装 置 ,否 则 热 量 可 引 起 蛋 白 质 等 物 质 的 变 性 而 不 能 分 离 ,还 因 发 热 引 起 缓 冲 液 中 水 分 蒸 发 过 多 ,使支 持 物 (滤 纸 ,薄 膜 或 凝 胶 等 )上 离 子 强 度 增 加 ,以 及

31、 引 起 虹 吸 现 象 (电 泳 槽 内 液 被 吸 到 支持 物 上 )等 ,都 会 影 响 物 质 的 分 离 .另 一 种 为 常 压 电 泳 ,产 热 量 小 ,室 温 在 10 25 分 离 蛋白 质 标 本 是 不 被 破 坏 的 ,无 需 冷 却 装 置 ,一 般 分 离 时 间 长 . 4. 电 渗 现 象 在 电 场 中 液 体 对 于 一 个 固 体 的 固 定 相 相 对 移 动 称 为 电 渗 .在 有 载 体 的 电 泳 中 ,影 响电 泳 移 动 的 一 个 重 要 因 素 是 电 渗 .最 常 遇 到 的 情 况 是 -球 蛋 白 ,由 原 点 向 负 极 移

32、动 ,这就 是 电 渗 作 用 所 引 起 的 倒 移 现 象 .产 生 电 渗 现 象 的 原 因 是 载 体 中 常 含 有 可 电 离 的 基 团 ,如 滤 纸 中 含 有 羟 基 而 带 负 电 荷 ,与 滤 纸 相 接 触 的 水 溶 液 带 正 电 荷 ,液 体 便 向 负 极 移 动 .由 于 电 渗 现 象 往 往 与 电 泳 同 时 存 在 ,所 以 带 电 粒 子 的 移 动 距 离 也 受 电 渗 影 响 ;如 电 泳 方向 与 电 渗 相 反 ,则 实 际 电 泳 的 距 离 等 于 电 泳 距 离 加 上 电 渗 的 距 离 .琼 脂 中 含 有 琼 脂 果 胶 ,其

33、 中 含 有 较 多 的 硫 酸 根 ,所 以 在 琼 脂 电 泳 时 电 渗 现 象 很 明 显 ,许 多 球 蛋 白 均 向 负 极 移 动 .除去 了 琼 脂 果 胶 后 的 琼 脂 糖 用 作 凝 胶 电 泳 时 ,电 渗 大 为 减 弱 .电 渗 所 造 成 的 移 动 距 离 可 用不 带 电 的 有 色 染 料 或 有 色 葡 聚 糖 点 在 支 持 物 的 中 心 ,以 观 察 电 渗 的 方 向 和 距 离 . 电 泳 的 分 类目 前 所 采 用 的 电 泳 方 法 ,大 致 可 分 为 3 类 :显 微 电 泳 ,自 由 界 面 电 泳 和 区 带 电 泳 .区带 电 泳

34、 应 用 广 泛 ,区 带 电 泳 可 分 为 以 下 几 种 类 型 : 按 支 持 物 的 物 理 性 状 不 同 ,区 带 电 泳 可 分 为 : (1)滤 纸 为 支 持 物 的 纸 电 泳 ; (2)粉 末 电 泳 : 如 纤 维 素 粉 ,淀 粉 ,玻 璃 粉 电 泳 ; (3)凝 胶 电 泳 :如 琼 脂 ,琼 脂 糖 ,硅 胶 ,淀 粉 胶 ,聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 ; (4)缘 线 电 泳 :如 尼 龙 丝 ,人 造 丝 电 泳 2. 按 支 持 物 的 装 置 形 式 不 同 ,区 带 电 泳 可 分 为 : (1)平 板 式 电 泳 :支 持 物 水 平 放

35、置 ,是 最 常 用 的 电 泳 方 式 ; (2)垂 直 板 电 泳 :聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 可 做 成 垂 直 板 式 电 泳 . (3)柱 状 (管 状 )电 泳 :聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 可 灌 入 适 当 的 电 泳 管 中 做 成 管 状 电 泳 . 3.按 pH 的 连 续 性 不 同 ,区 带 电 泳 可 分 为 : (1)连 续 pH 电 泳 :如 纸 电 泳 ,醋 酸 纤 维 素 薄 膜 电 泳 ; (2)非 连 续 pH 电 泳 :如 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 盘 状 电 泳 ; 电 泳 所 需 的 仪 器电 泳 所 需 的 仪 器 有 :电 泳 槽 和 电

36、源 . 1. 电 泳 槽 电 泳 槽 是 电 泳 系 统 的 核 心 部 分 ,根 据 电 泳 的 原 理 ,电 泳 支 持 物 都 是 放 在 两 个 缓 冲 液之 间 ,电 场 通 过 电 泳 支 持 物 连 接 两 个 缓 冲 液 ,不 同 电 泳 采 用 不 同 的 电 泳 槽 .常 用 的 电 泳 槽有 : (1)圆 盘 电 泳 槽 :有 上 ,下 两 个 电 泳 槽 和 带 有 铂 金 电 极 的 盖 .上 槽 中 具 有 若 干 孔 ,孔 不用 时 ,用 硅 橡 皮 塞 塞 住 .要 用 的 孔 配 以 可 插 电 泳 管 (玻 璃 管 )的 硅 橡 皮 塞 .电 泳 管 的 内

37、 径 早期 为 5 7mm,为 保 证 冷 却 和 微 量 化 ,现 在 则 越 来 越 细 . (2)垂 直 板 电 泳 槽 :垂 直 板 电 泳 槽 的 基 本 原 理 和 结 构 与 圆 盘 电 泳 槽 基 本 相 同 .差 别 只在 于 制 胶 和 电 泳 不 在 电 泳 管 中 ,而 是 在 块 垂 直 放 置 的 平 行 玻 璃 板 中 间 . (3)水 平 电 泳 槽 :水 平 电 泳 槽 的 形 状 各 异 ,但 结 构 大 致 相 同 .一 般 包 括 电 泳 槽 基 座 ,冷却 板 和 电 极 . 电 源 要 使 荷 电 的 生 物 大 分 子 在 电 场 中 泳 动 ,必

38、 须 加 电 场 ,且 电 泳 的 分 辨 率 和 电 泳 速 度 与电 泳 时 的 电 参 数 密 切 相 关 .不 同 的 电 泳 技 术 需 要 不 同 的 电 压 ,电 流 和 功 率 范 围 ,所 以 选 择电 源 主 要 根 据 电 泳 技 术 的 需 要 .如 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 和 SDS 电 泳 需 要 200 600V 电压 . 电 泳 技 术 的 应 用1. 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 可 用 做 蛋 白 质 纯 度 的 鉴 定 .聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 同 时 具 有电 荷 效 应 和 分 子 筛 效 应 ,可 以 将 分 子 大 小

39、 相 同 而 带 不 同 数 量 电 荷 的 物 质 分 离 开 ,并 且 还可 以 将 带 相 同 数 量 电 荷 而 分 子 大 小 不 同 的 物 质 分 离 开 .其 分 辨 率 远 远 高 于 一 般 层 析 方法 和 电 泳 方 法 ,可 以 检 出 10-9 10-12g 的 样 品 ,且 重 复 性 好 ,没 有 电 渗 作 用 . 2. SDS 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 可 测 定 蛋 白 质 分 子 量 .其 原 理 是 带 大 量 电 泳 管 路电 荷 的 SDS 结 合 到 蛋 白 质 分 子 上 克 服 了 蛋 白 质 分 子 原 有 电 荷 的 影 响 而

40、 得 到 恒 定 的 荷 /质 比 .SDS 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 测 蛋 白 质 分 子 量 已 经 比 较 成 功 ,此 法 测 定 时 间 短 ,分 辨率 高 ,所 需 样 品 量 极 少 (1 100g),但 只 适 用 于 球 形 或 基 本 上 呈 球 形 的 蛋 白 质 ,某 些 蛋 白质 不 易 与 SDS 结 合 如 木 瓜 蛋 白 酶 ,核 糖 核 酸 酶 等 ,此 时 测 定 结 果 就 不 准 确 . 3. 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 可 用 于 蛋 白 质 定 量 .电 泳 后 的 凝 胶 经 凝 胶 扫 描 仪 扫 描 ,从 而给 出 定 量

41、的 结 果 .凝 胶 扫 描 仪 主 要 用 于 对 样 品 单 向 电 泳 后 的 区 带 和 双 向 电 泳 后 的 斑 点 进行 扫 描 . 4.琼 脂 或 琼 脂 糖 凝 胶 免 疫 电 泳 可 用 于 检 查 蛋 白 质 制 剂 的 纯 度 ; 分 析 蛋 白 质 混 合物 的 组 分 ; 研 究 抗 血 清 制 剂 中 是 否 具 有 抗 某 种 已 知 抗 原 的 抗 体 ; 检 验 两 种 抗 原 是 否相 同 . 电 泳 后 结 果 检 测对 于 不 同 的 目 的 ,应 采 用 不 同 的 检 测 方 法 .用 染 料 和 生 物 大 分 子 结 合 形 成 有 色 的 复

42、合 物 是 电 泳 后 检 测 最 常 用 的 方 法 . (七 )聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 结 果 不 正 常 现 象 和 对 策 1. 指 示 剂 前 沿 呈 现 两 边 向 上 或向 下 的 现 象 .向 上 的 “微 笑 “现 象 说 明 凝 胶 的 不 均 匀 冷 却 ,中 间 部 分 冷 却 不 好 ,所 以 导 致 凝胶 中 分 子 有 不 同 的 迁 移 率 所 致 .这 种 情 况 在 用 较 厚 的 凝 胶 以 及 垂 直 电 泳 中 时 常 发 生 .向下 的 “皱 眉 “现 象 常 常 是 由 于 垂 直 电 泳 时 电 泳 槽 的 装 置 不 合 适 引 起

43、 的 ,特 别 是 当 凝 胶 和玻 璃 板 组 成 的 “三 明 治 “底 部 有 气 泡 或 靠 近 隔 片 的 凝 胶 聚 合 不 完 全 便 会 产 生 这 种 现 象 . 2.“拖 尾 “现 象 是 电 泳 中 最 常 见 的 现 象 .这 常 常 是 由 于 样 品 溶 解 不 佳 引 起 的 ,克 服 的办 法 是 在 加 样 前 离 心 ,选 用 合 适 的 样 品 缓 冲 液 和 凝 胶 缓 冲 液 ,加 增 溶 辅 助 试 剂 .另 一 方 法是 降 低 凝 胶 浓 度 . 3.“纹 理 “现 象 常 常 是 由 于 样 品 中 不 溶 颗 粒 引 起 的 ,克 服 办 法

44、 是 增 加 溶 解 度 和 离 心 除去 不 溶 性 颗 粒 . 4. 蛋 白 带 偏 斜 常 常 是 由 于 滤 纸 条 或 电 极 放 置 不 平 行 所 引 起 的 ,或 由 于 加 样 位 置 偏斜 而 引 起 . 5. 蛋 白 带 过 宽 ,与 邻 近 蛋 白 泳 道 的 蛋 白 带 相 连 ,这 是 由 于 加 样 量 太 多 或 加 样 孔 泄 漏引 起 的 . 6. 蛋 白 带 模 糊 不 清 和 分 辨 不 佳 是 由 于 多 种 原 因 引 起 的 .虽 然 梯 度 凝 胶 可 以 提 高 分辨 率 ,但 与 其 他 方 法 相 比 ,常 规 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶

45、电 泳 是 分 辨 率 较 低 的 方 法 .为 了 提 高 分 辨率 ,不 要 加 过 多 的 样 品 ,小 体 积 样 品 可 给 出 窄 带 .加 样 后 应 立 即 电 泳 ,以 防 止 扩 散 .选 择 合适 的 凝 胶 浓 度 ,使 组 分 得 以 充 分 的 分 离 .通 常 靠 近 前 沿 的 蛋 白 带 分 辨 率 不 佳 ,所 以 应 根 据分 子 量 与 凝 胶 孔 径 的 关 系 ,灌 制 足 够 长 度 的 凝 胶 ,以 使 样 品 不 会 走 出 前 沿 .样 品 的 蛋 白 水解 作 用 也 引 起 扩 散 而 使 分 辨 率 降 低 .水 解 作 用 通 常 发

46、 生 在 样 品 准 备 的 时 候 ,系 统 中 的 内源 性 蛋 白 酶 会 水 解 样 品 蛋 白 ,如 果 在 缓 冲 液 中 加 蛋 白 酶 抑 制 剂 可 以 减 少 这 种 情 况 的 发生 . 常 用 于 生 物 化 学 技 术 。喷塑目录喷塑定义 静电喷涂工艺（静电喷塑）具有的优势: 静电喷塑的工艺原理: 静电喷塑的工艺流程：编 辑 本 段 喷 塑 定 义将 塑 料 粉 末 喷 涂 在 零 件 上 的 一 种 表 面 处 理 方 法 。 喷 塑 也 就 是 我 们 常 讲 的 静 电 粉 末 喷 涂 ,它 是 利 用 静 电 发 生 器 使 塑 料 粉 末 带 电 ,吸 附在

47、 铁 板 表 面 ,然 后 经 过 180 220 的 烘 烤 ,使 粉 末 熔 化 黏 附 在 金 属 表 面 ,喷 塑 产 品 多 用于 户 内 使 用 的 箱 体 ,漆 膜 呈 现 平 光 或 哑 光 效 果 。 喷 塑 粉 主 要 有 丙 烯 酸 粉 末 、 聚 酯 粉 末 等 。编 辑 本 段 静 电 喷 涂 工 艺 （ 静 电 喷 塑 ） 具 有 的 优 势 :不 需 稀 料 ， 施 工 对 环 境 无 污 染 ， 对 人 体 无 毒 害 ； 涂 层 外 观 质 量 优 异 ， 附 着 力 及 机 械强 度 强 ； 喷 涂 施 工 固 化 时 间 短 ； 涂 层 耐 腐 耐 磨 能

48、 力 高 出 很 多 ； 不 需 底 漆 ； 施 工 简 便 ， 对工 人 技 术 要 求 低 ； 成 本 低 于 喷 漆 工 艺 ； 有 些 施 工 场 合 已 经 明 确 提 出 必 须 使 用 静 电 喷塑 工 艺 处 理 ； 静 电 喷 粉 喷 涂 过 程 中 不 会 出 现 喷 漆 工 艺 中 常 见 的 流 淌 现 象 。 编 辑 本 段 静 电 喷 塑 的 工 艺 原 理 :是 利 用 电 晕 放 电 现 象 使 粉 末 涂 料 吸 附 在 工 件 上 的 。 其 过 程 是 这 样 的 ： 粉 末 涂 料 由供 粉 系 统 借 压 缩 空 气 气 体 送 入 喷 枪 ， 在 喷

49、 枪 前 端 加 有 高 压 静 电 发 生 器 产 生 的 高 压 ， 由于 电 晕 放 电 ， 在 其 附 近 产 生 密 集 的 电 荷 ， 粉 末 由 枪 嘴 喷 出 时 ， 形 成 带 电 涂 料 粒 子 ， 它 受静 电 力 的 作 用 ， 被 吸 到 与 其 极 性 相 反 的 工 件 上 去 ， 随 着 喷 上 的 粉 末 增 多 ， 电 荷 积 聚 也 越多 ， 当 达 到 一 定 厚 度 时 ， 由 于 产 生 静 电 排 斥 作 用 ， 便 不 继 续 吸 附 ， 从 而 使 整 个 工 件 获 得一 定 厚 度 的 粉 末 涂 层 ， 然 后 经 过 热 使 粉 末 熔 融 、 流 平 、 固 化 ， 即 在 工 件 表 面 形 成 坚硬 的 涂 膜 。 编 辑 本 段 静 电 喷 塑 的 工 艺 流 程 ：1、 前 处 理 ： 目 的 ： 除 掉 工 件 表 面 的 油 污 、 灰 尘 、 锈 迹 ， 并 在 工 件 表 面 生 成 一 层 抗 腐 蚀 且 能 够 增加 喷 涂 涂 层 附 着 力 的 “磷 化 层 ”。 主 要 工 艺 步 骤 ： 除 油 、 除 锈 、