1、 TRIpure Reagent 抽提指南 目录号 RP02 使用手册 实验室使用，仅用于体外 TRIpure Reagent 抽提指南 目录号 RP02 使用手册 实验室使用，仅用于体外 TRIpure Reagent 抽提指南 目录号 RP02 使用手册 实验室使用，仅用于体外 RIPA 裂 解液 目录号 1912 使用手册 实验室使用 ， 仅用于体外 - 1 - RIPA 裂解液 目录号：1912 目录编号 包装单位 191201 50ml 191202 100ml 产品介绍： RIPA 裂解液(RIPA Lysis Buffer) 是 一种传统的细胞组织快速裂解液。 RIPA 裂解液
2、裂 解 得 到 的 蛋 白 样 品 可 以 用 于 常 规 的 Western 、 IP 等。RIPA 的 本 意 是 Radio Immunoprecipitation Assay 。RIPA 裂解液的配方有很多种， 本产品 RIPA 裂解液的主要 成分为 50mM Tris(pH7.4) ，150mM NaCl ，1% Triton X-100 ，1% sodium deoxycholate ， 0.1% SDS 以及 sodium orthovanadate ，sodium fluoride ，EDTA 等多种磷酸酶抑制剂。 产品储存 ： 4 注意事项 ： 1. 裂解得到的蛋白样品， 由
3、于含有较高浓度的去垢剂干扰， 不能用 Bradford 法测定 蛋白浓度，可以选用本公司生产的 BCA 蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。 2. 用户使用前需加入蛋白酶抑制剂如 PMSF 或者根据需要再加入 leupeptin ， aprotinin 等其它抑制剂。 3. 裂解液中 SDS 4 保存易沉淀析出， 使 用前应该 37-60 水浴重新溶解完全后回 复到室温使用。 4. 裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或 4进行。 - 2 - 操作步骤： （实 验前 请先 阅读 注意 事项 ） 1. 对于培养细胞样品： 1) 取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF ，使PMSF 的最终浓度为1mM 。
4、 2) 对于 贴壁 细胞 ， 去除 培养 液， 用PBS 、 生理 盐水 或无 血清 培养 液洗 一遍(如果血清 中的蛋白没有干扰， 可以不洗) 。 按照6孔板每孔细胞加入100-200 微升裂解液的比 例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1-2秒后，细胞就会被裂解。 3) 对于 悬浮 细胞 ， 离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散 。按照6孔板 每孔 细胞 加 入100-200 微升裂解液的比例加入裂解液。 用手指轻弹以充分裂解细胞。 充分裂解 后应没有明显的细胞沉淀。如果细 胞量较多，必须分装成50-100 万个细胞/ 管，然 后再裂解。 4) 充分裂解后
5、， 10000-14000g 离心3-5 分钟 ， 取上 清 ， 即可 进行 后续 的PAGE 、 Western 、 免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 裂解 液用 量说 明 ： 通常6 孔板每孔细胞加入100 微升 裂解 液已 经 足够 ， 但如 果细 胞 密度非常高可以适当 加大裂解液的用量到150 微升或200 微升。 2. 对于组织样品： 1) 把组织剪切成细小的碎片。 2) 取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF ，使PMSF 的最终浓度为1mM 。 3) 按照每20 毫克组织加入100-200 微升裂解液的比例 加入裂解 液。( 如 果裂 解不 充分 可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液 的用量。) 4) 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。 - 3 - 5) 充分裂解后， 10000-14000g 离心3-5 分钟 ， 取上 清 ， 即可 进行 后续 的PAGE 、 Western 、 免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 6) 如果 组织 样品 本身 非 常细 小 ，可 以 适当 剪切 后 直接 加 入裂 解液 裂 解， 通 过强 烈 vortex 使样 品 裂解 充分 。然 后同 样离 心取 上清 ，用 于后 续实 验。 直接 裂解 的优 点 是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
