1、国标法测定大肠杆菌样本的细菌总数实验目的实验原理：国标法操作的原理实验器材：培养箱，10 只移液管，12 只 250ml 锥形瓶，5 只大试管，试管架， 4 个平皿，500ml 大烧杯 1 个，电子天平，纱布，脱脂棉，灭菌锅， PH 计或 PH 试纸，电炉，石棉网，铁架台，100ml 量筒，橡皮手套，超净台实验药品：磷酸盐缓冲液，蒸馏水，LB 培养基，琼脂，5%NaOH ，5%HCl实验步骤：一：10 只移液管，12 只 250ml 锥形瓶，5 只大试管，试管架， 45 个平皿，500ml 大烧杯 1 个，100ml 量筒进行洗涤，然后一起放入高压蒸汽灭菌锅中在 121 摄氏度条件下灭菌 20
2、min。灭完菌后烘干，完成后放入超净台中。用酒精灯擦拭超净台，紫外消毒 30min二：1：用电子天平称取成品 LB 3.1241g 和琼脂 1.8756g 放入 250ml 的洁净锥形瓶中。2：用量筒量取 125ml 的蒸馏水加入该锥形瓶中，制成培养基。3：用棉花堵住该锥形瓶的瓶口，用牛皮纸包住瓶口，用橡皮筋扎牢，再将培养基放入灭菌锅中在 121 摄氏度之下灭菌 20min。4：灭完菌后放入超净台中备用。三：1：取 1 只无菌 250ml 锥形瓶，用量筒向其中加入 49ml PBS2：将 1ml 样品加入到该锥形瓶中，摇匀制成 1:50 的细菌溶液。3：取 4 只试管，编号 144：用无菌移液
3、管分别向 4 只试管中加入 9ml 的 PBS5：用 1ml 无菌移液管从样品中移取 1ml 菌液加入到 1 中.震荡试管使菌液均匀。6：用 1ml 无菌移液管从 1 号试管中移取 1ml 的细菌溶液加入 2 号试管中，摇匀7：用另一只 1ml 无菌移液管从 2 号试管中移取细菌溶液，加入 3 中，摇匀 以此类推直至 4 只试管中均加入了细菌溶液。9：取 4 只平皿，编号 1410：分别用 4 只无菌移液管从这 4 只试管中移取的菌液置于 4 只平皿中，加入摄氏度温度下的培养基，约厚度。缓慢旋转平皿使菌液与培养基混合均匀；待培养基冷凝后倒置。11：将培养基在6 摄氏度条件下培养 12 小时。1
4、2：取出培养皿，选择细菌个数在 30 至 300 个之间的平皿数细菌的个数。四：实验结果（记得在操作过程和得到结果时拍照）1 号，2 号菌落个数多不可计，舍弃4 号平皿中菌落数目小于 10 cfu ，舍弃3 号平皿中菌落分布较均匀，数 3 号中的菌落数，一共有 210 个 cfu 。计算样品中细菌浓度为：1.05 105 Cfu/ml点评超净台中的实验步骤讲述详细，明确，不错。前面的步骤叙述有点乱，建议按照如下标题重新调整顺序。实验步骤：1、 仪器清洗将烧杯，培养皿、试管等仪器用洗衣粉清洗，超声 5min.然后用清水清洗，超声 5min,最后用三蒸水清洗，放入烘箱中烘干。2、 培养基配制精确称量。 。 。 。 。 。 。 。 。 。放入锥形瓶中，加入。 。 。 。mL 蒸馏水，摇匀3，灭菌包扎、灭菌，烘干备用3、 超净台中的操作（如上）除了实验步骤和结果，还要有讨论和注意事项例如：实验讨论：1、 评价该方法（操作简易程度，灵敏度如何，适用性）2、 为何选择细菌个数在 30 至 300 个之间的平皿数细菌的个数？注意事项比如各种仪器的使用注意事项，以及保持洁净，防止染菌等。
