1、血清总补体溶血活性测定,补体是存在于血清中的一组不耐热的具有酶活性的球蛋白。 补体是抗体发挥溶细胞或溶菌作用的补充条件。 在正常情况下，补体含量相对稳定，但在某些疾病时可发生变化。 动态监测血清总补体的活性，对一些疾病有辅助诊断的意义。,概述,实验原理,绵羊红细胞（ SRBC）与相应抗体结合形成的致敏红细胞可激活补体，从而导致SRBC溶解。 当致敏红细胞的浓度一定时，在规定的反应时间内，溶血程度与补体的活性成正相关，但不是直线关系，为典型的S形曲线。,在轻微溶血和接近完全溶血时，补体量的变化不能使溶血程度有显著改变，即溶血对补体量的变化不敏感。 在半溶血（50溶血）上下时曲线最陡，即使补体含量
2、仅有较小变动时，溶血程度也会发生较大的改变，也就是说对补体量的变化非常敏感。,故采用50溶血作为终点指标要比100溶血敏感的多，这一方法称为补体50溶血试验（complement hemolysis 50 assay），简称为CH50。 以引起50%溶血所需的最小补体量为一个CH50单位，由此可以计算出待测血清中总的补体溶血活性，以U/ml表示。,主要试剂与器材,溶血素 2SRBC pH7.4 巴比妥缓冲液（BBS） 待测血清、蒸馏水 离心机、试管、吸管、恒温水浴箱、分光光度计、比色杯等,实验步骤,1.稀释待测血清：吸取待测血清0.2ml，加BBS3.8ml，将血清1：20稀释（已完成）。,2
3、.正式实验取10只试管，分别编号，按照下表加入各试剂,试管号,BBS,1：20稀释血清,2SRBC,2U溶血素,补体溶血活性,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10,1.40 1.35 1.30 1.25 1.20 1.15 1.10 1.05 1.00 1.50,0.10 0.15 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40 0.45 0.50 0.00,0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5,0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5,置 37 水浴 30min,200 133 100 80 66.6 57
4、.1 50 44.4 40 -,3.制备50溶血标准管理论方法 代替方法 2SRBC 0.5ml 4.5ml H2O+ + 蒸馏水2ml 2 SRBC 0.5ml+ 17g/L高渗盐水 2ml+ 2 SRBC 0.5ml 以上两种方法效果相同，所以实验中采用后者。,使红细胞全部溶血,形成等滲,50溶血管,结果判断方法,将各反应管经2500r/min、5min离心后，先用目测法观察其溶血程度，并与50溶血标准管比较，选择与标准管最接近的两管。 再用分光光度计于波长542nm进行比色测定。以BBS缓冲液为空白对照，校正零点，找出吸光度与标准管最接近的一管，根据该管的血清用量，求出总补体溶血活性。,
5、总补体活性（U/ml）,1,血清用量（ml）,稀释倍数,实验结果,写出标准管和选出的两管的吸光度，判断哪一管与标准管的透光率接近。 计算总补体活性。,注意事项,待测血清必须新鲜，如放置室温2h以上，可使补体活性下降。 待测血清还应该无溶血、无污染等。 绵羊红细胞等试剂均应新鲜配制。 实验器材应该清洁，残留的酸碱等化学物质均可使补体受破坏。 补体的溶血活性可受多种因素的影响，如溶液的酸碱度变化、钙和镁离子增加等可使补体溶血活性降低。,应用与评价,本方法快速、简便，但敏感性较低，结果易受多种因素的影响。 主要用于测定补体经典激活途径的溶血功能，不能测定补体蛋白的绝对值 参考值：50-100U/ml 增高：可见于急性炎症、组织损伤、恶性肿瘤 降低：多见于免疫复合物型超敏反应,
