1、双荧光报告基因检测系统简明操作步骤试剂准备：磷酸盐缓冲液(PBS) PBS 缓冲液， 10X (每升) 11.5g Na2HPO4 2g KH2PO4 80g NaCl 2g KCl 溶于 1 升无菌去离子水中。 1XPBS 的 pH 应为 7.4.1. 制备被动裂解缓冲液 1PLB：将 1 倍体积的 5Passive Lysis Buffer(PLB)加到 4 倍体积的蒸馏水中。混合均匀。储存在 4（1 个月） 。建议每次使用前配制新鲜的 1XPLB。5XPLB 应储存在-20。 2LAR：用 Luciferase Assay Buffer 溶解冻干粉 Luciferase Assay Su
2、bstrate。存于-20（1 个月）或-70（1 年） 。3Stop & Glo 试剂： a. 取 2.1ml 50Stop & Glo Substrate 加到 105ml 的 Stop&Glo Buffer。在提供的棕色 Stop&Glo Reagent 瓶中，振摇 10 秒。在-20存 15 天。 b.若配制少量的 1Stop & Glo Reagent：将一定量的 50Stop & Glo Substrate 加入到所需要量的 Stop & Glo Buffer 中，使终浓度成为 1 倍浓度。（例如，加 0.2ml 的 50Stop & Glo Substrate 到 10ml 的
3、Stop & Glo 缓冲液中，制成 1Stop & Glo Reagent 溶液。 ）细胞裂解 1 除去培养细胞中的培养基。 2 用 1PBS 清洗培养细胞。去掉清洗液。 3 按推荐体积（见下表）将 1PLB 加入到培养孔中。 第 3 步中使用的 1PLB 体积 被动裂解 主动裂解 培养板 1PLB 平板大小 1PLB 6 孔 500ul 100200mm 1ml 12 孔 250ul 6015mm 400ul 24 孔 100ul 3512mm 200ul 48 孔 65ul 6 孔 250ul 96 孔 20ul 12 孔 100ul4 被动裂解：在室温轻缓晃动培养板 15 分钟，把裂解
4、液转移到检测试管中。结果检测a.检测 96 孔板中的样品： 开始之前： 设置自动进样器 1 和 2 分别分装 100ul 的 LARII 和 Stop&Glo试剂。 测量时，使用 1-2 秒延迟和 5-10 秒读数。 （在萤光发光仪上（ Luminometer）之内）1、加入 20ul PLB 裂解液/孔 2、加入 100ul LARII 3、检测萤火虫萤光素酶 4、加入 100ul Stop&Glo 试剂 5、检测海肾萤光素酶的活性6、其它孔如此循环操作。 b.用手动或配有单自动进样器的萤光发光仪进行检测：1、事先在检测管中加入 100ul LARII2、转移 20ul PLB 裂解液到检测管中，混合。3、检测萤火虫萤光素酶的活性4、向检测管中加入 100ul Stop&Glo Reagent5、检测海肾萤光素酶活性
