苏丹黑B染色.doc

1、苏丹黑 B 染色检查的标准操作程序(SOP)实验室名称 项 目 编 号 制定日期细胞室 苏丹黑 B 染色检查 * *年*月*日【目的】指导苏丹黑 B 染色检查。【该 SOP变动程序】本标准操作程序的改动可由任一使用本 SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、质控主管、科主任。【用途】急性白血病类型的鉴别诊断。【染色原理】苏丹黑 B 是一种脂溶性染料，故能将细胞内的脂类显示出来，呈棕黑色颗粒。【分布】（1） 粒细胞系正常：经苏丹黑 B 染色后，原粒细胞多为阴性反应，自早幼粒细胞开始出现阳性反应，以后随细胞不断发育，脂类（嗜苏丹物质）逐渐增多，成熟粒细胞阶段最为丰富。黑色颗粒大小均

2、匀，其数目、分布均与特殊颗粒相似而体积略大。嗜酸粒细胞之脂类（嗜苏丹物质）颗粒较中性粒细胞大，着色偏棕，体大形圆，有周边深、中央低之特点。嗜碱粒细胞呈阴性反应。病理：慢性粒细胞白血病、恶性淋巴肉芽肿以及各种感染疾患，中性粒细胞的脂类（嗜苏丹物质）颗粒减少，而恶性贫血、营养性大细胞贫血和缺铁性贫血，脂肪颗粒改变不大。嗜碱粒细胞可有阳性颗粒出现，其颗粒大小不等，也有呈阴性反应的。（2） 淋巴细胞系正常：苏丹黑 B 染色呈阴性反应。病理：急、慢性淋巴细胞白血病，可以出现阳性的嗜苏丹颗粒，形状与分布皆与线粒体相似。（3） 单核细胞系：浆中有数目不定的阳性颗粒，特点为细小，形状不规则，弥散分布，有的盖于

3、核上。（4） 网状内皮细胞：部分呈阳性反应。（5） 浆细胞：阴性反应。（6） 巨核细胞与血小板：呈阴性反应。（7） 红细胞系：自幼稚到成熟，皆呈阴性反应。【试剂配置】1）10% 甲醛盐水溶液，取 40%甲醛 10ml 加生理盐水 90ml。2）1% 苏丹黑 B 酒精溶液，取苏丹黑 B 1g 溶于 100ml 的 70%酒精中。3）1% 伊红水溶液。4）1% 美蓝水溶液。注另有福尔马林（甲醛）蒸汽固定法：以病理切片染色用的立式标本缸，底部盛甲醛液 1-2ml。用前将此标本缸置于 37温箱中预热约 10 分钟，则标本缸内即充满蒸汽，再以迅速的动作开盖，立即将所要固定的涂片放在其中，再将标本缸放入

4、37温箱固定 10 分钟即可。【染色步骤】固定：新鲜干燥之血或骨髓涂片浸于 10甲醛盐水溶液中 10 分钟。水洗：自来水冲洗 10 分钟，蒸馏水涮洗，晾干。染色：放入 1%苏丹黑 B 染色液中，37浸染 1012 小时。分色：放入 70%酒精中，分色 3 分钟，晾干。复染：1% 伊红染 5 分钟，蒸馏水冲洗，1%美蓝染 1 分钟。水洗：自来水冲洗，晾干。【对照标本】在染色前用有机溶剂提取脂类，然后进行苏丹黑 B 染色，则呈阴性反应。提取脂类方法如下：1.溶解磷脂1）用热吡啶浸 24 小时。2）用冷丙酮浸 24 小时。2.溶解一般脂肪：乙醚、氯仿及丙酮等量混合，浸 24 小时。【结果判断】脂类（嗜苏丹物质）呈棕黑或深黑色颗粒，定位于胞浆中。【临床意义】急淋：幼稚淋巴细胞常出现较粗大的脂肪颗粒。急单：幼稚单核细胞的脂肪颗粒细小，弥散分布，有的盖于核上。急粒：原始粒细胞可有非常细小的颗粒，集中于核旁区。因为三种急性白血病的脂肪染色不同，故苏丹黑 B 染色有助于鉴别急性白血病的类型。操作人员 部门主管 质量负责人姓名 王烈 日期 04 年 07月 15日