1、关于抗生素检定菌液预试操作学习1、目的：学习短小芽孢杆菌浓菌液预试操作程序2、范围：卫生学检查用菌种3、责任：生测组检验员4、内容：A、仪器用具与试药（1） 160170干热灭菌 2h 用具：陶瓦盖 4 个 ；试管(30200mm) 3 支 ；镊子(23mm) 1 把；50ml 量筒 3 个； 25ml 量筒 2 个 ；250ml 锥形瓶 3 个；钢管 16 个 ；1ml 吸管 5 根 ；大口 5ml 吸管 4 支 ；10ml 吸管 1 根 ；5ml 吸管 1 根 ；碟子 4 个。（2）115高压 湿热灭菌 30 分钟：抗生素号培养基（取本品，加入 1000ml 纯化水，加热煮沸溶解，过滤分装
2、，灭菌）；工服 ； pH7.8 缓冲液（取磷酸二氢钾0.41g、磷酸氢二钾 7.32g、加水 1000ml 使溶解）；纯 化水 （3）其他：烂烧杯 3 个（盛放有菌试管）；一次性塑胶手套；电炉；5ml 胖肚移液管 4根；2 个 50ml 容量瓶；1 个 100ml 容量瓶；滴管；烧杯；滤纸片。B.准备2010 年 7 月 15 日短小芽孢杆菌浓菌液 20071101（菌液浓度预试 ），由游标卡尺测抑菌圈大小 取 0.2ml 原液40ml 培养基 0.5% 高 17.56mm 低16.16mm 取 1.0ml 原液+9.0ml 灭菌水0.2ml 20ml 培养基 0.1%高 17.24mm 低1
3、6.52mm 取中原液和水混合之后的 1.0ml+9.0ml 水，混合之后，取 0.2ml 至 40ml 培养基中 0.05%高 19.46mm 17.66mm 将取中原液和水混合之后的 1.0ml+9.0ml 水，混合之后，取 0.1ml 至 40ml培养基中 C 预试浓 度操作步骤1、电炉水浴加热把已配置好的抗生素号培养基溶化（约 300ml）耗时 30-60，一定要全溶，否则影响铺底层与菌层。2、把标准品从冰箱取出放置在干燥器中晾至恒温（约 30）3、0.1%新洁尔灭溶液或 2%甲酚皂溶液擦拭桌面及拖地板，紫外线杀菌 30 分钟。万分之一天平插上电源，打开开关，按“F”键使“g” 转 化
4、“mg” 使其稳定。4、标准品放置 30 分钟后，用稳定后的万分之一天平用减重法称取对照品 25ml容量瓶1000638=39.2mg。如称多了也可倒入容量瓶。但倒完之后复称一下纸重，以此数据才是所称重量，记录下来。5、用无菌水荡洗好的滴管把容量瓶的颈部周围冲洗干净，观察对照品是否溶解，是否有玻屑。再用无菌水定容至刻度，摇匀。6、配好对照品溶液放到冰箱保存。7、培养基完全溶后放入水浴锅（6065）放置 15，即可使温度达到水浴温度（6065），达到水浴温度就可以倒底层，倒时靠着平皿 边缘（20ml），不引起气泡。8、下午把标准品溶液与菌悬液从冰箱取出放置室温。9、准备二个 50ml 容量瓶和一
5、个 100ml 容量瓶、无菌水、滴管、烧杯，滤纸片。10、每个陶瓦盖上标明 1、2、3、4（代表浓度级别）。11、30200 试管也要标明、代表所用试管支数，更能识清，以免弄混。12、在 250ml 锥形瓶倒入 40ml 抗生素号培养基。13、用 1ml 灭菌吸管混匀原菌液，吹打。从原菌液中取出 0.2ml 原液至倒有 40ml抗生素号培养基的 250ml 锥形瓶中，用灭菌带棉花的 5ml 大口吸管吹匀，再用嘴吸取 5ml 混合菌液倒 1 号陶瓦碟内，在中间放下，向周围快速摊平。取原液0.2ml40ml 培养基 0.5%对高 16.10mm 对低14.94mm14、从原菌液中取 1.0ml 菌
6、液到号试管+9ml 灭菌水，拿 10ml 吸管吹打均匀，再从中取 0.2ml 混合菌液到号试管中，用量筒加 20ml 培养基到号试管，又取 5ml 大口吸管吹打菌液，混匀取 5ml 到 2 号陶瓦盖碟内铺平。原液+9.0ml 无菌水取 0.2ml 至 20ml 培养基 0.1%对高 18.24mm 对低 16.68m15、从号试管 1.0ml 菌液+9ml 灭菌水中取 0.2ml 菌液到 号试管，并加 40ml培养基，用 5ml 大口吸管用嘴吹打均匀，再吸 5ml 到 3 号陶瓦盖碟内。1.0ml 原液+9.0ml 无菌水取 0.2ml 加至 40ml 培养基 0.05%对高 17.26mm
7、对低18.64mm16、从号试管 1.0ml 菌液+9ml 无菌水中取 0.1ml 菌液到 号试管中，接着用量筒倒入 40ml 培养基，5ml 大口吸管吹打均匀后取 5ml 到 4 号陶瓦盖碟内，铺均匀，每一平皿铺完菌层立即盖上陶瓦盖。铺完菌层放置 20 分钟。1.0ml 原液+9.0ml 无菌水取 0.1ml 加至 40ml 培养基 0.025%对高 20.30mm 对低18.32mm17、利用 20 分钟配好高、低浓度标准品溶液。18、吸取放冷至室温的标准品溶液 5ml（胖肚移液管先荡洗三次）到 50ml 容量瓶，用 pH7.8 缓冲液稀释，缓冲液 荡洗了三次的滴定管，摇匀。19、再取一支
8、 5ml 胖肚移液管从摇匀的溶液中吸取 5ml 至 100ml 容量瓶，为低浓度，缓冲液稀释至刻度，摇匀。20、取一长一短滴管，荡洗三次，放入低 浓度和高浓 度容量瓶。21、20 分钟后，操作者视线以净化工作台水平面加入钢管：平皿数4；肉眼观察必须注意位置平衡及对称，四个钢管必须与平皿边缘有一定距离，要不仪器扫描时扫不出来抑菌圈大小。22、放置完钢管，再静置 10 分钟。23、滴加溶液:在高剂量（标 准品溶液）平皿外画一根 竖线，分别在对角两个钢管滴同一浓度。先加高浓度，标准品滴完盖上陶瓦盖放置 30 分钟。24、30完毕，用垫于玻璃的板子拿到抗生素检定室，先把陶瓦盖拿开，再水平小心拿起平皿置玻板上，只能最多三个碟垒一起，要不温度会不均匀。培养1416h，温度 3537结论：本次预试情况，将选取浓度为 0.025%的比例进行原料、成品、半成品抗生素的效价测定。
